茉莉花窨制前后總黃酮含量的測(cè)定*

代容春，林榮華

（福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350108）

茉莉花窨制前后總黃酮含量的測(cè)定*

代容春，林榮華

（福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350108）

以正交試驗(yàn)法優(yōu)化后的超聲波提取工藝提取總黃酮，聚酰胺吸附提純，蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，用分光光度法于510nm處測(cè)定了茉莉花窨制前后的總黃酮含量。結(jié)果表明：蘆丁濃度在10.0～50.0mg .L-1內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為y=0.0101x+0.0047，相關(guān)系數(shù)R2=0.9991，平均回收率為100.43%（RSD=4.397%）。窨制前的茉莉花總黃酮含量為2.806%，窨制后的茉莉花總黃酮含量為2.656%；差異顯著性分析可知，2個(gè)樣品總黃酮含量差異不顯著。研究結(jié)果可為利用茉莉花渣生產(chǎn)黃酮類藥用成分提供科學(xué)根據(jù)。

茉莉花；窨制；總黃酮；含量測(cè)定；正交試驗(yàn)

茉莉(Jasminum sambac(L.)Ait)為木犀科多年生常綠灌木，多分布于熱帶、亞熱帶和溫帶地區(qū)，我國(guó)以江蘇、浙江、福建、臺(tái)灣、廣東、四川、云南等地分布最為廣泛[1]。茉莉的根、葉、花均有藥用價(jià)值。根有麻醉、止痛之功效，可以用于治療失眠、頭痛、齲齒、跌打損傷；葉用于治療外感發(fā)熱、腹脹腹瀉；花可用于治療腹脹腹瀉、結(jié)膜炎、皮炎、瘡毒等[2-4]。關(guān)于茉莉的藥用成分多數(shù)研究者認(rèn)為主要為黃酮類與多糖類化合物，韋英亮等的初步研究也表明，從茉莉花渣中所提取的黃酮化合物對(duì)某些人類腫瘤細(xì)胞在體外試驗(yàn)時(shí)表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒性 [5-6]。

茉莉花是我國(guó)具有相當(dāng)經(jīng)濟(jì)價(jià)值的重要花卉，大量栽培主要用于采摘茉莉花以窨制茉莉花茶或加工成價(jià)值昂貴的天然香精。目前，我國(guó)茉莉花茶年產(chǎn)量穩(wěn)定在11～12萬(wàn)t之間，由此產(chǎn)生了大量的茉莉花渣[7]。茉莉花渣是茉莉花苞經(jīng)過(guò)花茶窨制后的廢棄物，是茉莉花茶加工過(guò)程中主要的下腳料，在此過(guò)程中有20%～25%的芳香油物質(zhì)被茶葉吸收，其它化學(xué)成分的變化尚未見詳細(xì)報(bào)道。本研究采用超聲波提取法提取總黃酮，比色法測(cè)定茉莉花窨制前后總黃酮含量的變化，為合理利用茉莉花渣，實(shí)現(xiàn)廢物循環(huán)利用和農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

蘆?。篊27H30O16·3H2O，相對(duì)分子質(zhì)量為664.57，上海試劑二廠生產(chǎn)。聚酰胺粉：80～100目，以70%乙醇預(yù)處理。

窨制前的茉莉花（樣品I）和窨制后的茉莉花（樣品II），由福州春倫茶業(yè)有限公司提供。樣品處理方法為自然晾干，80℃恒溫干燥2 h后粉碎過(guò)篩。

1.2 儀器

UV-1100型紫外可見分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）、RE-52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、數(shù)控超聲波清洗器KQ3200-DV（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 超聲波提取工藝的優(yōu)化

以窨制前的茉莉花為材料，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選用正交表L9（34）對(duì)超聲波提取工藝的4個(gè)主要因素（溫度、時(shí)間、乙醇濃度、料液比）進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，各因素的水平表見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

1.3.2 總黃酮的提取及純化

稱取過(guò)60目篩的樣品干燥粉末10 g，按表1正交試驗(yàn)結(jié)果獲得的最佳超聲波提取工藝提取總黃酮，過(guò)濾后濾渣重復(fù)提取1次。合并濾液，減壓濃縮至適量，以石油醚反復(fù)萃取脫脂，棄去醚層。濾液進(jìn)一步濃縮至浸膏狀，用70%乙醇溶解并定容至100ml。

準(zhǔn)確吸取提取液5ml，加200mg聚酰胺粉攪勻，轉(zhuǎn)移到裝有400mg聚酰胺粉的砂芯層析柱中，用乙醇梯度洗脫，洗脫順序?yàn)?5%乙醇（20ml）→55%乙醇（20ml）→75%乙醇（20ml）→95%乙醇（20ml）→無(wú)水乙醇（20ml）。收集各級(jí)洗脫液，合并濃縮，用70%乙醇定容至100ml，備測(cè)。

1.3.3 最大吸收波長(zhǎng)的選擇

以NaNO2、Al(NO3)3、NaOH為顯色劑，分別作樣品I、樣品II提取液以及蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的吸收曲線，三者均在510nm處有一強(qiáng)吸收，因此選擇510nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

1.3.4 蘆丁濃度與吸光度的關(guān)系確定

精密稱取蘆丁標(biāo)樣10mg（80℃干燥至恒重），用70%乙醇溶解，然后轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，70%乙醇定容，搖勻，即得0.1mg .mL-1的蘆丁標(biāo)液。分別取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml蘆丁標(biāo)液于6個(gè)10ml容量瓶中，各加70%乙醇使成5ml，加入5%NaNO2溶液0.3ml搖勻，放置6min后，加10%Al(NO3)3溶液0.3ml，搖勻放置6min后加入1 mol .L-1NaOH溶液4ml，再加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置15min后于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，以蘆丁空白為參比，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.5 總黃酮含量的測(cè)定

分別吸取樣品I和樣品II提取液1.0ml于10ml容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)蘆丁—吸光度測(cè)定法，以樣液空白參比，于510nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣液總黃酮含量，最后換算成各樣品的總黃酮含量百分率，即得率（以蘆丁計(jì)）。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品含量（mg.L-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y=0.0101x+0.0047,相關(guān)系數(shù)R2=0.9991，表明蘆丁濃度在10.0～50.0mg.L-1具有良好的線性關(guān)系，見表2。

表2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

表3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

表4 茉莉花窨制前后總黃酮含量測(cè)定結(jié)果（按蘆丁計(jì)算）

表5 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

2.2 超聲波提取工藝的優(yōu)化

以總黃酮得率為指標(biāo)，L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果見表3。由正交試驗(yàn)結(jié)果可以看出，6號(hào)樣品總黃酮的得率最高，為2.850%。極差分析可知，各因素對(duì)總黃酮提取得率影響的大小順序?yàn)椋篈>B>D>C。試驗(yàn)較優(yōu)條件為A2B3C1D2，即茉莉花總黃酮超聲波提取的最佳工藝為溫度55℃、時(shí)間90min、乙醇濃度70%、料液比1:15。

2.3 總黃酮含量的測(cè)定

2個(gè)樣品總黃酮含量測(cè)定結(jié)果見表4。窨制前的茉莉花總黃酮含量為2.806%；窨制后的茉莉花總黃酮含量為2.656%。經(jīng)LSD檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析可知，2個(gè)樣品總黃酮含量差異不顯著（P=0.05）。

2.4 顯色穩(wěn)定性試驗(yàn)

各樣品提取液及蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品顯色反應(yīng)較穩(wěn)定。在45min內(nèi)每隔15min測(cè)定其吸光度，吸光度值均未發(fā)生改變。

2.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)

稱取以上樣品6份，分別添加質(zhì)量濃度為0.1mg.mL-1的蘆丁標(biāo)樣3.9ml，按前述操作進(jìn)行提取、層析、測(cè)定。以加標(biāo)測(cè)得量減去原樣含量，除以加標(biāo)量，計(jì)算回收率，其結(jié)果見表5。平均回收率為100.43%，標(biāo)準(zhǔn)差為4.416%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為4.397%。

3 討論

早期茉莉花渣無(wú)有效的利用途徑，除了少量用做豬飼料外，有的被排放江河，有的長(zhǎng)期堆放后腐敗，造成資源的極大浪費(fèi)和環(huán)境的污染[8]。研究以正交試驗(yàn)法優(yōu)化后的超聲波提取工藝提取總黃酮，利用聚酰胺吸附提純與常用的硝酸鋁顯色法相結(jié)合，測(cè)定茉莉花窨制前后的總黃酮含量。結(jié)果表明，窨制前的茉莉花總黃酮含量為2.806%，窨制后的茉莉花總黃酮含量為2.656%，二者差異不顯著。黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用[9-14]。鑒于窨制后的茉莉花渣資源豐富，黃酮含量較高，藥用價(jià)值大，作者認(rèn)為可以大力開發(fā)利用其黃酮類藥用成分，為利用茉莉花渣生產(chǎn)黃酮類藥用成分提供科學(xué)依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1007-550X.2016.08.001

Q946

A

1007-550X（2016）08-0038-04

福建省教育廳資助項(xiàng)目(編號(hào)：JA13072)。

2016-06-19

代容春(1973-)，女，福建仙游人，副教授，碩士，主要從事植物生理學(xué)和植物細(xì)胞工程研究。