強(qiáng)生Vitros 5.1 FS生化分析儀上乳酸脫氫酶的性能驗證

王麗馨，楊　沛，殷　勤，陳開春,鄧少麗

(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所檢驗科,重慶 400042)

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·論著·

強(qiáng)生Vitros 5.1 FS生化分析儀上乳酸脫氫酶的性能驗證

王麗馨，楊沛，殷勤，陳開春,鄧少麗△

(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所檢驗科,重慶 400042)

目的探討強(qiáng)生Vitros 5.1 FS生化分析儀上乳酸脫氫酶(LDH)的性能驗證。方法根據(jù)美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會的檢測儀器評價標(biāo)準(zhǔn)，并參照美國強(qiáng)生公司提供的驗證方案對LDH的精密度、正確度、線性范圍、最大稀釋度、生物參考區(qū)間進(jìn)行驗證。結(jié)果LDH批內(nèi)及批間精密度試驗均≤3.30%;正確度試驗≤4.00%;線性試驗決定系數(shù)為0.997 2;LDH用生理鹽水稀釋最大稀釋度為8倍;生物參考區(qū)間試驗證實《VITROS方法學(xué)手冊》提供的參考區(qū)間313～618 U/L可以引用。結(jié)論強(qiáng)生Vitros 5.1 FS生化分析儀檢測的LDH性能驗證基本符合質(zhì)量目標(biāo)要求和廠商說明要求，滿足臨床檢驗的需求。

干化學(xué);乳酸脫氫酶;性能驗證

近多年來,隨著檢驗醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展,臨床生物化學(xué)檢測已逐步從簡單的手工操作發(fā)展成為完全的自動化測定,各醫(yī)院檢驗科也配備了不同系統(tǒng)的生化分析儀來承擔(dān)生化檢驗的日常工作。干化學(xué)法以操作簡便、快速的特點，成為急診生化檢測的一種新手段[1]。由于干化學(xué)儀和濕化學(xué)儀檢測乳酸脫氫酶(LDH)的原理不一樣，本實驗室分別設(shè)置了不同的參考區(qū)間，按照ISO15189和原衛(wèi)生部《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實驗室管理辦法》的要求[2-3]，本實驗室對強(qiáng)生Vitros 5.1 FS生化分析儀檢測LDH的精密度、正確度、線性范圍、最大稀釋度、生物參考區(qū)間進(jìn)行系統(tǒng)評價[4]，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇本院的40例健康體檢人群，其中男20例，女20例,年齡23～60歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)1個月內(nèi)無急性感染史；(2)發(fā)育、精神正常，無心血管、肺、腎、肝、膽、胰等器質(zhì)性疾患；(3)半年內(nèi)無輸血和大手術(shù)史；(4)3個月內(nèi)未服影響酶活力的藥物(如異煙肼、對氨基水楊酸、氯丙嗪、地巴唑、硫脲嘧啶等)，2周內(nèi)無中毒史，未接觸毒物及其他有害物質(zhì)；(5)女性不在妊娠期及哺乳期；(6)家庭成員中無病毒性肝炎史，3個月內(nèi)同工作或?qū)W習(xí)的班組內(nèi)無急性病毒性肝炎史發(fā)生；(7)在受檢對象中，若血清中乙型肝炎病毒表面抗原呈陽性者均予以剔除；(8)無飲酒、吸煙史；(9)無糖尿病、痛風(fēng)，體質(zhì)量正常；(10)3個月內(nèi)未口服避孕藥；(11)15周歲以上；(12)無糖尿病、冠心病、痛風(fēng)等家族史；(13)空腹采血。

1.2儀器與試劑采用強(qiáng)生Vitros 5.1 FS生化分析儀及原裝試劑(批號63463570)、質(zhì)控品(低濃度批號45661、中濃度批號45662、高濃度批號45663)、校準(zhǔn)品(批號0333)進(jìn)行檢測。

1.3方法

1.3.2正確度試驗采用原衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質(zhì)評標(biāo)本(2014年第3次)驗證正確度，分別測定5份標(biāo)本，每份標(biāo)本測定1次，與原衛(wèi)生部臨床檢驗中心回報的靶值計算偏倚。

1.3.3線性試驗選用低濃度標(biāo)本作為下線濃度(L),高濃度標(biāo)本作為上線濃度(H)，按L、3.75L+1.25H、2.50L+2.50H、1.25L+3.75H、H配制成5個濃度標(biāo)本，每個標(biāo)本分別測定3次，計算均值，將均值與理論值做線性回歸分析(Y為理論值，X為實測均值)，計算Y=bX+a。

1.3.4最大稀釋度試驗選擇LDH接近線性上限的高值血清，用生理鹽水做稀釋液，對高值血清對倍稀釋，即2、4、8、16、32倍稀釋，每個標(biāo)本連續(xù)測定2次，計算均值。計算各稀釋度時試驗標(biāo)本內(nèi)含分析物的濃度為這些標(biāo)本的預(yù)期值。計算預(yù)期值與實測均值之間的偏倚，以小于可接受最大偏倚的稀釋度為最大稀釋度。

2　結(jié)　　果

2.1精密度驗證結(jié)果批內(nèi)精密度小于廠家要求，即CV≤2.86%；批間精密度小于廠家要求，即CV≤3.30%。見表1。

表1　　精密度測定結(jié)果

2.2正確度驗證結(jié)果偏倚小于《臨床生物化學(xué)常規(guī)檢驗項目分析質(zhì)量目標(biāo)》中的要求(≤4.00%)，見表2。

表2　　正確度測定結(jié)果

2.3線性驗證結(jié)果將所選取的高值質(zhì)控物按一定比例稀釋后得出回歸方程Y=bX+a，b值為0.97～1.03，決定系數(shù)(R2)為0.997 2(≥0.95)，線性范圍為100～2 150 U/L。說明該儀器的檢測結(jié)果達(dá)到線性要求，見表3。

表3　　線性分析結(jié)果(U/L)

2.4最大稀釋度驗證結(jié)果將所選取的高值血清對倍稀釋，檢測預(yù)期值與實測均值之間的偏倚，LDH用生理鹽水稀釋最大稀釋度為8倍?！杜R床生物化學(xué)常規(guī)檢驗項目分析質(zhì)量目標(biāo)》中LDH可接受的最大偏倚為4.00%，見表4。

表4　　最大稀釋度結(jié)果

2.5生物參考區(qū)間驗證結(jié)果對《VITROS方法學(xué)手冊》提供的參考區(qū)間313～618 U/L進(jìn)行驗證，挑選40例健康體檢人群，其中男20例，女20例,檢測結(jié)果均在參考區(qū)間內(nèi)，R為100.00%，可以應(yīng)用于臨床需要。

3　討　　論

隨著干化學(xué)技術(shù)的發(fā)展，其檢測項目和檢測速度不但能滿足臨床需求，而且無需純水系統(tǒng)，具有分析速度快和抗干擾等優(yōu)勢，在國內(nèi)急診檢驗分析中占有相當(dāng)份額，按《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實驗室管理辦法》和醫(yī)學(xué)實驗室ISO 15189《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的要求，檢測系統(tǒng)進(jìn)行常規(guī)工作前應(yīng)對其分析性能進(jìn)行驗證，以滿足預(yù)期要求[5]。

目前大多數(shù)實驗室會將干化學(xué)儀和濕化學(xué)儀檢測的同一項目進(jìn)行比對，再通過修改儀器回歸方程的斜率和截距，實現(xiàn)檢測結(jié)果的可比性。同一實驗室不同儀器之間分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性對于疾病的診斷、治療及預(yù)后都起著重要的作用[6]。但是由于干化學(xué)儀和濕化學(xué)儀檢測方法學(xué)的不一致，導(dǎo)致部分項目不能實現(xiàn)檢測結(jié)果的可比性，需建立各自的參考區(qū)間。楊萍[7]報道，臨床應(yīng)用中可各自建立獨立的參考區(qū)間，不能以單一改變校正因數(shù)或系數(shù)來矯正干、濕化學(xué)的分析偏倚。

本實驗室干化學(xué)儀和濕化學(xué)儀檢測LDH由于原理的差異，不能實現(xiàn)檢測結(jié)果的可比性。濕化學(xué)儀為Beckman DxC800生化分析儀，其在LDH的檢測過程中，LDH催化L-乳酸氧化為丙酮酸，同時將β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)可逆地還原為還原型β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，系統(tǒng)通過檢測340 nm處的吸光度變化檢測LDH活性；而Vitros 5.1 FS生化分析儀則通過反射光光度測定法檢測LDH催化丙酮酸和NADH轉(zhuǎn)化為乳酸和NAD+的氧化過程，再將其轉(zhuǎn)化成LDH活性而進(jìn)行檢測[8]。由此可觀察出DxC800生化分析儀檢測LDH是正反應(yīng)，而Vitros 5.1 FS分析儀檢測LDH是負(fù)反應(yīng)，檢測原理的差異導(dǎo)致不能實現(xiàn)檢測結(jié)果的可比性。Vitros 5.1 FS分析儀檢測LDH需要設(shè)置不同的參考區(qū)間，目前采用廠家《VITROS方法學(xué)手冊》提供的生物參考區(qū)間，并進(jìn)行了生物參考區(qū)間驗證，可以應(yīng)用于臨床。

精密度是試劑和檢驗程序重要的分析性能之一,因為臨床醫(yī)生和患者首先關(guān)心的是檢驗結(jié)果的重復(fù)性或復(fù)現(xiàn)性必須良好,絕不希望同一標(biāo)本在不同時間測量的結(jié)果有明顯差異,以致臨床實驗室的檢驗結(jié)果不可信,檢驗結(jié)果不能成為診斷和治療的依據(jù)[9]。通過表1可得知，批內(nèi)、批間精密度均滿足儀器廠家要求，檢測結(jié)果顯示該檢測系統(tǒng)具有較好的重復(fù)性，能夠保證檢測結(jié)果的穩(wěn)定可靠。

正確度驗證通常采用EP15-A2提供的兩種方法：(1)兩種方法間患者標(biāo)本結(jié)果的比對；(2)定值參考物質(zhì)檢測的回收試驗或偏移驗證[5]。本實驗室是采用第二種方法進(jìn)行正確度驗證，通過表2可得知，采用原衛(wèi)生部臨床檢驗

中心室間質(zhì)評標(biāo)本對LDH進(jìn)行評價，結(jié)果均在可接受范圍內(nèi)，正確度滿足臨床的需要。

線性化是反映實驗方法性能特征的重要指標(biāo)，是保證臨床檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的重要砝碼。線性分析試驗得到的回歸方程中，b值在0.97～1.03范圍內(nèi)，R2≥0.95，所測的實測值與期望值之間密切相關(guān)，顯示了良好的線性檢測范圍，符合儀器的線性要求。

Vitros 5.1 FS生化分析儀使急診生化檢測速度大大提高，縮短了實驗室檢測結(jié)果的回報時間，為患者提供了快速、準(zhǔn)確的檢驗結(jié)果，真正實現(xiàn)了為危重患者開設(shè)了急診通道。但在未來的工作中，仍然不能忽視不同分析系統(tǒng)之間檢驗結(jié)果是否存在一致性的問題，但如果由于方法學(xué)的不一致，不能實現(xiàn)檢測結(jié)果的可比性，檢驗師應(yīng)該積極地與臨床醫(yī)生溝通，設(shè)置不同的參考區(qū)間。

[1]李鴻飛，邱廣斌．常用生化指標(biāo)干化學(xué)與濕化學(xué)檢測結(jié)果的比較分析[J]．檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(1)：109-111．

[2]楊振華，王治國．臨床實驗室管理[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：1-7．

[3]叢玉隆，馮仁豐，陳曉東．臨床實驗室管理學(xué)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2004：1-10．

[4]楊有業(yè)，張秀明．臨床檢驗方法學(xué)評價[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：118-136．

[5]林海標(biāo)，范雪蓮，王建兵，等．分析和評價強(qiáng)生Vitros 5．1 FS 生化儀的精密度和正確度[J]．檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11(15)：2047-2048．

[6]袁平宗，湯雪彪，胡江紅，等．強(qiáng)生干化學(xué)350與日立7600-020檢測系統(tǒng)可比性分析[J]．國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(10)：1299-1301．

[7]楊萍．干、濕化學(xué)法檢測部分生化項目結(jié)果比較[J]．蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2006，31(1)：83-84．

[8]李金密，龔春梅，何秀玲，等．干化學(xué)與濕化學(xué)分析儀的可比性分析[J]．檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2015，12(5)：606-608．

[9]趙建忠．生化分析儀精密度、準(zhǔn)確性以及線性范圍性能驗證[J]．國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(10)：1111-1112．

Performance verification of lactate dehydrogenase in Johnson Vitros 5.1 FS biochemical analyzer

WANGLixin,YANGPei,YINQin,CHENKaichun,DENGShaoli△

(DepartmentofClinicalLaboratory,ResearchInstituteofFieldSurgery,DapingHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400042,China)

ObjectiveTo study the performance verification of lactate dehydrogenase(LDH) in the Johnson Vitros 5.1 FS biochemical analyzer.MethodsAccording to CLSI instrumentation evaluation standard and referring to the validation scheme provided by the Johnson company,the precision,accuracy,linear range of LDH,maximum dilution degree,biological reference range were verified.ResultsThe LDH intra-batch and inter-batch precision experiments were≤3.30%;the accuracy experiment≤4.00%;the determination coefficient of the linear experiment was 0.997 2;the LDH maximum dilution degree was 8 times with saline solution dilution;the biological reference range experiment verified that the reference range 313-618 U/L provided by the VITROS Methodology Manual could be quote.ConclusionThe performance verification of LDH detected by the Johnson Vitros 5.1 FS biochemical analyzer basically conforms to the requirements of the quality objectives and manufacturer′s instructions,and meets the needs of clinical test.

dry chemistry;lactate dehydrogenase;performance verification

王麗馨，女，技師，主要從事臨床生化檢驗與臨床研究?！?/p>

，E-mail：dengs1072@yahoo.com.cn。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.17.009

A

1673-4130(2016)17-2382-03

2016-04-12

2016-06-20)