微生物強化對椒坯發(fā)酵群落多樣性及性質(zhì)的影響

梁如，黃鈞，張立強，崔瑞迎，吳重德，廖昌明，李紅，周榮清,2,3*

1(四川大學(xué) 輕紡與食品學(xué)院，四川 成都，610065)　2(國家固態(tài)釀造工程技術(shù)研究中心，四川 瀘州，645000) 3(四川大學(xué) 制革清潔技術(shù)國家工程實驗室，四川 成都，610065)　4(成都鑫鴻望食品有限公司，四川 成都，611741)

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微生物強化對椒坯發(fā)酵群落多樣性及性質(zhì)的影響

梁如1，黃鈞1，張立強1，崔瑞迎1，吳重德1，廖昌明4，李紅4，周榮清1,2,3*

1(四川大學(xué) 輕紡與食品學(xué)院，四川 成都，610065)2(國家固態(tài)釀造工程技術(shù)研究中心，四川 瀘州，645000) 3(四川大學(xué) 制革清潔技術(shù)國家工程實驗室，四川 成都，610065)4(成都鑫鴻望食品有限公司，四川 成都，611741)

描述了應(yīng)用磷脂脂肪酸(phosphoric acid fatty acids,PLFAs)及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-變性梯度凝膠電泳(polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技術(shù)研究微生物強化發(fā)酵椒坯群落多樣性變化的規(guī)律。研究表明，高鹽發(fā)酵使椒坯的細(xì)菌生物量顯著降低；對于強化的樣品，因所使用的菌株及強化方式不同，其群落多樣性及優(yōu)勢菌差異顯著，假絲酵母菌Candidaversatilis強化提高了椒坯總生物量，魯氏酵母Zygosaacharomycerouxii則相反；共培養(yǎng)強化提高了椒坯以Tetragenoccus和Zygosaacharomyces為主的優(yōu)勢菌的生物量，同時發(fā)現(xiàn)嗜鹽四鏈球菌Tetragenoccushalophilus對Vagococcus具有明顯的抑制作用。理化研究表明，不同強化方式使樣品的總酸(TA)、還原糖(RS)和氨基態(tài)氮(FN)等參數(shù)略有差異。不同強化方式對揮發(fā)性組分貢獻不同，其中，共培養(yǎng)強化使椒坯揮發(fā)性組分總含量提高了28.46%。該研究揭示了強化發(fā)酵對椒坯微生物群落和品質(zhì)的影響規(guī)律，對微生物強化技術(shù)在傳統(tǒng)發(fā)酵的應(yīng)用有一定的指導(dǎo)作用。

微生物群落；共培強化；揮發(fā)性組分；磷脂肪酸(phosphoric acid fatty acids,PLFAs)；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-變性梯度凝膠電泳(polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)

辣椒(CapsicumannumL.)是在墨西哥、印度和中國等多個國家普遍種植的一年生或多年生的草本植物，常被作為香辣型蔬菜直接食用或是許多發(fā)酵調(diào)味品的原料。其中，辣椒醬就以辣椒為原料發(fā)酵而成的具有獨特的辛辣味、鮮艷色澤和質(zhì)地的佐餐調(diào)味品[1-2]，同時也是郫縣豆瓣等調(diào)味品的中間制品。高鹽發(fā)酵是我國辣椒醬生產(chǎn)的主要工藝，辣椒本身產(chǎn)生的內(nèi)源酶及發(fā)酵過程中自然混入的多種微生物對辣椒醬獨特的品質(zhì)形成有重要貢獻。因此，高鹽環(huán)境、季節(jié)影響和亞硝酸鹽易積累等因素是妨礙產(chǎn)業(yè)集約化生產(chǎn)的技術(shù)難題。微生物強化發(fā)酵技術(shù)是解決這一難題的有效嘗試，最近發(fā)表的有關(guān)純種強化發(fā)酵報道[3-7]，證實了純種強化有益于產(chǎn)品品質(zhì)的改善。然而，因辣椒的品種、產(chǎn)地和栽培技術(shù)的差異會影響辣椒堿和辣椒素的含量，從而對微生物的生長繁殖作用各異[8-9]，所以難以應(yīng)用可培養(yǎng)技術(shù)了解強化菌株的作用規(guī)律及優(yōu)化強化工藝。本文報道了基于磷脂脂肪酸(phosphoric acid fatty acids,PLFAs)及變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)免培養(yǎng)技術(shù)研究了假絲酵母Candidaversatilis、魯氏酵母Zygosaacharomycerouxii和嗜鹽四鏈球菌Tetragenoccushalophilus及3株微生物共培對椒坯微生物群落結(jié)構(gòu)的影響規(guī)律，同時研究了椒坯總酸、氨態(tài)氮和游離氨基酸等理化指標(biāo)及揮發(fā)組分的變化，揭示了菌株間的作用特點，對科學(xué)認(rèn)識強化椒坯發(fā)酵和強化工藝的優(yōu)化具有指導(dǎo)和借鑒作用。

1　材料與方法

1.1微生物、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

微生物：耐鹽酵母菌C.versatilisCGMCC 3790和Z.rouxiiCGMCC 3791；耐鹽乳酸菌T.halophilusCGMCC 3792。本實驗室分離并保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心(China General Microbiologiocal Culture Collection Center,CGMCC)。

種子培養(yǎng)基：(1)酵母菌：含120 g/L NaCl的YM培養(yǎng)基[9]；(2)乳酸菌：含90 g/L NaCl的MRS培養(yǎng)基[10]。YM和MRS培養(yǎng)基的pH分別調(diào)為5.0、7.0于115 ℃滅菌15 min后，分別從活化的菌株斜面試管中挑2～3環(huán)，分別置于30±1 ℃和37±1 ℃的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)至對數(shù)期。

1.2實驗方法

1.2.1原料與樣品制備

干辣椒 (美國紅，甘肅，2013年)經(jīng)挑選、清洗、浸泡和粉碎后，分別將鹽分和水分調(diào)至約15%和63%。分別將T.halophilus、C.versatilis和Z.rouxii的純培養(yǎng)物接種到椒坯中，初始菌濃分別為5.2×107CFU/g (CS4)、4.1×106CFU/g (CS5)和5.3×106CFU/g (CS6)。將另一部分接種T.halophilus純培養(yǎng)物(初始菌濃為5.2×107CFU/g)椒坯發(fā)酵至pH5.8以下時，再接入Z.rouxii和C.versatilis純培養(yǎng)物，使其濃度分別為4.8×106CFU/g和5.8×106CFU/g (CS3)。未做任何處理椒坯為自然發(fā)酵組 (CS2)。將制備好的椒坯置于常溫環(huán)境中發(fā)酵30 d，每隔6 d攪拌1次，CS1為未發(fā)酵椒坯樣品。

1.2.2理化指標(biāo)的檢測

水分測定：GB/5009.3—2010的第一法 (直接干燥法)；NaCl含量的測定:GB/T 12457—2008；FN的測定：GB/T 5009,39；TA的測定：GB/T 12456—2008 (以乳酸計)；RS的測定：GB/T5009.7—2008 (直接滴定法)。游離氨基酸(FAA)的檢測：精確稱取樣品5.00 g，研磨后，蒸餾水定容至50 mL，取10 mL濾液，加5 mL 10%三氯乙酸溶液，室溫靜置2 h后，離心 (10 000×g，4 ℃) 10 min，上清液經(jīng)0.45 mm濾膜過濾并適當(dāng)稀釋后，用自動氨基酸檢測儀(A300, membrace Pure GmbH，德國)檢測FAA的含量。

1.2.3揮發(fā)性組分檢測

采用頂空-固相微萃取氣相色譜-質(zhì)譜法(HS-SPME-GC-MS)測定樣品的揮發(fā)性組分[11]。稱取研磨至膏狀的樣品0.50 g于頂空瓶中，加入內(nèi)標(biāo)辛酸和辛酸甲酯各10 μL，60 ℃平衡15 min，插入固相微萃取頭 (CAR/PDMS，85 μm，supelco，USA)，萃取45 min。然后在進樣口中解吸3 min，檢測揮發(fā)性組分。色譜條件：色譜柱為HP-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱 (30.0 m×0.32 mm×0.25 μm，J&W，USA)；升溫程序：40 ℃保持5 min，以4 ℃/min升至100 ℃，再以6 ℃/min升至230 ℃，保持10 min，進樣口溫度250 ℃；載氣為高純氦氣，流速1.0 mL/min；離子源溫度和連接線溫度分別為230和250 ℃；EI電子能量為70 eV；質(zhì)量掃描范圍35～400 amu。

1.2.4PLFAs

樣品中PLFAs提取和分析，參考文獻[12-13]所述的方法提取樣品中PLFAs，檢測條件：色譜柱為HP-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱(30.0 m×0.32 mm×0.25 μm，J&W，USA)進樣口為高純氮氣溫度250 ℃，進樣量0.5 μL，分流比10∶1；載氣和連接線流速1.0 mL/min；起始柱溫40 ℃，保持2 min，再以5 ℃/min升至220 ℃，保持10 min；質(zhì)譜 (EI)的電子能量70 eV；離子源溫度230 ℃；掃描范圍35～400 amu。

1.2.5PCR-DGGE

稱取5.00 g樣品，轉(zhuǎn)移至裝有無菌玻珠的離心管中，加入20 mL PBS (0.1mol/L，pH8.0)，渦旋振蕩分散后，離心10 min (800×g，4 ℃)，相同PBS洗滌沉淀物2次，匯集的上清液離心 (10 000 ×g，4 ℃)10 min，棄上清液，洗滌菌團3次，轉(zhuǎn)移到1.5 mL的EP管中，-20 ℃保存待用。參考文獻[14]所述方法提取總DNA，經(jīng)試劑盒 (Universal DNA Purification Kit，Tiangen Biotech (Beijing)Co., Ltd.)純化后，用表1中所示的引物，按參考文獻[15-18]所述方法完成巢氏PCR。按參考文獻[19-20]進行DGGE分析。切割具有代表性條帶，加入適量ddH2O后置于4 ℃冰箱中過夜，收集DNA溶出片段，經(jīng)1%瓊脂糖電泳檢測純度后，送樣至上海生工進行測序分析。將有效的DNA序列與NCBI的BLAST(www.ncbi.nlm nih.gov/BLAST)以及RDP CLASSIFIER (http://rdp.cme.msu.edu/index.jsp) 數(shù)據(jù)庫的序列比對獲得最近親緣關(guān)系相關(guān)菌株信息。

表1　所用引物對及其序列

注：1)下劃線堿基為GC夾。

2.2.5數(shù)據(jù)處理

揮發(fā)性組分的鑒定及數(shù)據(jù)處理：通過待測樣品組分質(zhì)譜數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)譜庫(NIST05)比對，匹配度大于800 (最大為1 000)的物質(zhì)予以報道，采用峰面積歸一化法(內(nèi)標(biāo)法)確定樣品中各檢出物質(zhì)的含量，揮發(fā)性組分含量以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差 (n=3)。

PLFAs鑒定及數(shù)據(jù)處理：通過待測樣品各組分質(zhì)譜圖與NIST05標(biāo)準(zhǔn)譜庫比對，以及保留時間與37種FAME標(biāo)準(zhǔn)品 (Accustandard，USA)保留時間的比較，確定PLFAs組成；采用內(nèi)標(biāo)(19∶0)歸一化法計算各組分的含量，樣品中PLFAs含量用nmol/g dw表示。參考文獻[21]所述的方法命名PLFAs，參考文獻[22-24]所述方法估算其菌群的構(gòu)成及相對含量，含量以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差 (n=3)。

DGGE多樣性指數(shù)：將 DGGE光密度數(shù)據(jù)導(dǎo)入ZZSTAT軟件 (v2010)，計算細(xì)菌和真菌的多樣性指數(shù)。

采用SPSS 16.0軟件 (SPSS，USA)進行不同樣品間的聚類分析，距離計算方法為歐氏距離和樣品間的差異性分析(兩因素方差分析 Two-way ANOVA，Duncan's test，P<0.05)。

2　結(jié)果與討論

2.1對細(xì)菌群落多樣性的影響

2.1.1基于PLFAs的椒坯細(xì)菌群落多樣性的變化

樣品中共檢出了8種PLFAs，碳鏈長度在14～18之間，總PLFAs含量依次是CS1 (4.78 nmol/g)>CS5 (1.15 nmol/g)>CS3 (1.06 nmol/g)>CS2 (0.79 nmol/g)>CS4 (0.78 nmol/g)>CS6 (0.59 nmol/g)。包括直鏈和支鏈飽和、單不飽和及多不飽和4類PLFAs，其中直鏈飽和及多不飽PLFA比例較高，所占比例分別在40.33%～46.09%和27.32%～44.09%。其中，i14∶0,16∶0和18∶2ω9,11為優(yōu)勢PLFAs。

椒坯菌群及生物量估算結(jié)果表明，與初始樣品比較，發(fā)酵椒坯的G+、G-菌和真菌含量及其比例變化顯著(P<0.05)，強化致使G+菌和真菌為優(yōu)勢菌，除CS6外，各樣品間的生物量無顯著差異 (P<0.05)(表2)。自然發(fā)酵使細(xì)菌生物量減少，G+菌為絕對優(yōu)勢菌群。與自然發(fā)酵相比C.versatilis和Z.rouxi單獨強化使椒坯中G+和G-菌生物量降低，且C.versatilis使真菌的生物量增加，Z.rouxii則相反，這可能是代謝產(chǎn)物乙醇、有機酸等的抑制及底物競爭性消耗等所致，但二者的菌群差異的原因有待深入探討。由于T.halophilu產(chǎn)生有機酸的抑菌作用，使真菌的生物量降低。共培養(yǎng)則使總生物量和真菌量略有提高。

表2　樣品間微生物群落的區(qū)別

注：1)含量表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差nmol/g dw；2)同一行中不相同字母表示差異顯著(Duncan’s test，P<0.05)；3)ND 表示未檢出；4)表示未計算。

2.1.2基于PCR-DGGE的微生物群落結(jié)構(gòu)的研究

細(xì)菌DGGE圖譜(圖1a)的多樣性指數(shù)分析結(jié)果表明，自然發(fā)酵使S和H指數(shù)減少，D指數(shù)增加，強化發(fā)酵則使D指數(shù)減小，S和H指數(shù)增大。因菌株性質(zhì)和不同強化方式不同，致使樣品的微生物群落多樣性亦有差異，C.versatili和共培使S和H的增幅高于T.halophilus和Z.rouxii，D指數(shù)則降幅較大(表3)。據(jù)DGGE圖譜的強度特征聚為兩簇，CS5 (C.versatili)是一簇，其余樣品的聚為另一簇，相似度大于59.60%，CS2和CS6相似性接近而聚相同亞簇，CS3和CS4因T.halophilus參與強化，其代謝物有效抑制了雜菌，結(jié)構(gòu)類似聚為相同亞簇(圖1b)。

測序結(jié)果在NCBI和RDP CLASSIFIER中檢索比親緣性的結(jié)果表明(表4)，細(xì)菌涉及3個不同科(Enterobacteriaceae、Enterococcaceae和Bacillaceae)，由Pantoea、Tetragenococcus、Vagococcus、Bacillus和Enterobacter等5個屬構(gòu)成。CS1所含的4個屬的細(xì)菌(Pantoea/條帶1、Vagococcus/條帶4和條帶12、Enterobacter/條帶10和條帶11)，Vagococcus屬菌為CS2的優(yōu)勢菌。Tetragenococcus屬菌是CS3和CS4的優(yōu)勢菌(條帶3和條帶5-8)，這與接入的T.halophilus的強耐鹽性、高的繁殖率和具有競爭性抑制自然混入細(xì)菌等特性有關(guān)。Vagococcus(條帶4和條帶12)和Bacillus(條帶9)為CS5和CS6的優(yōu)勢菌，這可能是Z.rouxii和C.versatilis的代謝產(chǎn)物如乙醇和有機酸等對細(xì)菌抑制作用所致。Bacillus是兼性厭氧菌，起始時耗氧迅速，致使溶氧降低，有益于厭氧菌繁殖，產(chǎn)生的有機酸，降低了椒坯的pH值，致使E.asburiae和E.cloacae等致病菌[25]消失，產(chǎn)生的水解酶促進了蛋白質(zhì)、多種糖類等的降解[26]。由此可見椒坯的高鹽微生物強化發(fā)酵不僅能改善風(fēng)味，也能抑制或消除雜菌?？赡芤騎.halophilus對Vagococcus有較強的抑制作用，在CS3和CS4均未檢出Vagococcus。

表3　不同樣品細(xì)菌和真菌多樣性指數(shù)

1-6泳道分別表示CS1-CS6號樣品; R1-6分別對應(yīng)CS1-CS6號樣品圖1　樣品間細(xì)菌DGGE圖譜(a)和聚類分析(b)Fig.1　DGGE profile of bacteria(a) and Hierarchal cluster analyses(b) in sample

真菌DGGE圖譜 (圖2a)多樣性指數(shù)分析結(jié)果表明，自然發(fā)酵、T.halophilu和C.versatilis強化使S和H指數(shù)略增，而D指數(shù)略減，Z.rouxii與共培強化則使S和D指數(shù)減小，H指數(shù)增加 (表3)。聚類分析的結(jié)果表明，樣品間的群落結(jié)構(gòu)相似度較高，原料和自然發(fā)酵的樣品聚為一簇 (相似度>84.69%)，純種強化聚為另一簇 (相似度>84.88%)。酵母菌強化 (CS3、CS5和CS6)聚為亞簇(相似度>90.92%)，C.versatilis因其功能是發(fā)酵后期產(chǎn)酯，所以另聚為一小簇(圖3b)。測序結(jié)果結(jié)果表明 (表4)，所有樣品中只檢出Z.rouxii和Z.pseudorouxii兩種酵母菌。在CS3和CS5號中雖然采用了C.versatilis強化，測序的結(jié)果未檢出?？赡苁墙放鞯沫h(huán)境不適合其大量繁殖或DNA提取方法等限制[16]，詳細(xì)原因待進一步探討。

表4　細(xì)菌和真菌DNA測序及與BLAST和RDP數(shù)據(jù)庫比對結(jié)果

1-6泳道分別表示CS1-CS6號樣品；R1-6分別對應(yīng)CS1-CS6號樣品圖2　真菌DGGE圖譜(a)和聚類分析(b)Fig.2　DGGE profile of fungal(a) and Hierarchal cluster analyses(b) in samples

2.2對理化性質(zhì)的影響

表5為不同強化方式樣品發(fā)酵結(jié)束時理化指標(biāo)，發(fā)酵過程中因水分蒸發(fā)，需間歇補水，導(dǎo)致水分和鹽分含量略有波動。T.halophilus和C.versatilis強化，使椒坯的TA、FN和RS含量略有增高 (P<0.05)，Z.rouxii強化使TA的含量略有減少 (P<0.05)，可能與Z.rouxii在椒坯中快速生長繁殖有關(guān)。共培養(yǎng)強化對TA、FN和RS含量無明顯影響 (P<0.05)。

2.2.1對游離氨基酸含量的影響

檢測各樣品中的FAA的結(jié)果表明 (表6)，自然發(fā)酵使檢出的17種FAA中15種FAA增加，其中，Thr、Ser、Ala 、Met、Ile和Arg的增幅超過20%；相對自然發(fā)酵，T.halophilus強化使16種FAA的含量增加，與樣品中FN含量變化一致，其中His增加了4倍，Arg的含量減少了15.13%，增幅超過20%以上的包括Asp (29.56%)、Thr (49.65%)、Glu (57.85%)、Gly (45.95%)等11種FAAs；Z.rouxii和C.versatilis的強化使Thr、Ser、Asn、Gly、Ala、Met、Ile、Phe、Trp和Arg等11種FAA含量降低，但使Glu的含量分別提高了27.53%和34.78%，Lys的含量分別提高了13.68%和21.05%；共培強化則使Glu提高了20.17%，Cys 和lys 分別提高了16.41%和13.68%。

表5　不同樣品理化性質(zhì)的區(qū)別

注：1)同一行中不同字母表示有顯著的差別(Duncan’s test,P<0.05)。

2.3對揮發(fā)性組分的影響

各種樣品共檢出了50種不同揮發(fā)性組分，包含1種酸、9種醇、17種酯、4種醛、8種酮、5種酚、1種吡嗪及5種其他組分。自然發(fā)酵分別使醇和醛類組分分別從266.24 mg/kg，19.44 mg/kg增加到464.82 mg/kg和129.62 mg/kg。相對自然發(fā)酵，T.halophilius的強化，醇、酯組分略減，酚類組成稍增(圖3)，致使總揮發(fā)組分含量略減。Z.rouxii和C.versatilis的強化，使椒坯中的醇組分含量增加、酯類和其它類組分略增，酚類減少，醛類略減，前者使酮類和烷烴類組分略減少，而后者則是使之稍增(圖4)。Z.rouxii、C.versatilis和T.halophilius的共培養(yǎng)強化則使揮發(fā)組分總的含量提高了28.46%，達到1764.93 mg/kg。醇類和酯類組分別增加了38.09%和40.92%，酚類組分降低了31.92%。苯乙醇，從330.66 mg/kg增加到447.05 mg/kg，但其比例略有減少，相對比例增幅較大是異丁醇，提高了5.2倍，其次是4-甲基-戊醇和3-甲基-丁醇。酯類組分中含量較高的4種組分，依次為辛酸乙酯(24.10%)>月桂酸乙酯(20.87%)>棕櫚酸乙酯(13.69%)>肉桂酸乙酯(13.54%)。強化作用使其乙酸異戊酯和辛酸-3-甲基丁酯增幅最高，分別是7.78倍和1.88倍，葵酸、辛酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、順-9-十六烯酸、月桂酸、十五碳酸、苯乙酸乙酯、壬酸和己酸等9種酸的乙酯組分的增幅超過了30%。在檢出的酚類組分中，苯酚的含量從87.85 mg/kg降至34.88 mg/kg，降幅為60.30%，而4-乙基愈創(chuàng)木酚，4-乙烯基愈創(chuàng)木酚和4-乙基苯酚則有較大的增幅。

表6　不同樣品中游離氨基酸含量

注：1)同一行中不同字母表示存在顯著的差別 (兩因素方差分析，Duncan’s test,P<0.05)。

編號1-6分別代表CS1-CS6圖3　樣品間各類揮發(fā)性組分的比例Fig.3　Different ratio of volatile components in samples

3　結(jié)論

基于PLFAs和DGGE所獲得互補的強化的信息，定量表征了不同菌株強化的特點及對微生物群落多樣性的影響規(guī)律。Z.rouxiiCGMCC 3791在椒坯中具有較強的繁殖能力，而C.versatilisCGMCC 3790則較弱。T.halophilusCGMCC 3792強化能有效地抑制其它細(xì)菌，尤其是對Vagococcus的抑制。椒坯的發(fā)酵具有“自凈化” (滅雜菌)和改善了品質(zhì)的作用，不同強化對方式TA、FN、 RS和FAA及各種揮發(fā)組分含量的影響，因所用菌株的生理特性的不同而異。3種微生物共培強化對TA、FN和RS的含量無明顯影響，醇類和酯類組分為主的揮發(fā)組分的含量顯著提高，而酚類組分則有所減少。

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Effect of strengthen fermentation on the microbial diversity and the physicochemical properties of minced chilli (Capsicumannum)

LIANG Ru1, HUANG Jun1, ZHANG Li-qiang1, CUI Rui-ying1,WU chong-de1, LIAO Chang-ming4, LI Hong1, ZHOU Rong-qing1,2,3*

1(College of light industry, Textile &Food Engineering, Sichuan University, Chengdu 610065, China) 2(National Research Center of solid-state Brewing, Luzhou 646000，China) 3(National Engineering Laboratory for Clean Technology of Leather Production, Chengdu 610065, China) 4(Chengdu Xin-Hong Wang Food Co.Ltd.,Chengdu 611741, China)

In the present research，the changes of the microbial community diversity in the strengthening fermented minced chilli (CapsicumannumL.) were investigated by phospholipid fatty acids (PLFAs) combined with polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE). The result showed that total biomass of bacteria was decreased significantly through high-salt fermentation. The difference of microbial community diversity and dominant strains was also observed due to the difference of strains inoculated and the strengthening patterns. Total biomass was increased byCandidaversatilis, while that was decreased byZygosaacharomycesrouxii, and that of the co-culturing sample, which were mainly composed ofTetragenoccusandZygosaacharomyces, was increased compared with natural fermentation. It was worthy to note thatTetragenoccushalophilusshowed significant inhibition effect onVagococcus. The physiochemical properties of various samples, which were major titratable acidity (TA), reduce sugar (RS) and free amino nitrogen (FN), were slightly different due to the divergence of microorganisms inoculated. The influences of strengthening patterns on total content of volatile components were different, especially co-culturing sample showed the highest augmenter about 28.46% compared with natural fermentation. The results of this study suggested that not only the microorganisms but also the strengthen patterns had significant effect on the microbial community and the quality of minced chilli.

microbial community; co-culturing; volatile compounds; PLFAs; PCR-DGGE

10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201601003

在讀博士研究生(周榮清教授為通訊作者，E-mail：zhourqing@scu.edu.cn)。

國家自然基金項目資助(31171742)；四川省科技支撐計劃(2014SZ0129)

2015-08-15，改回日期：2015-09-11