HPLC測定桂附理中丸中6-姜辣素的含量

戴瑋，常新全，肖蘇萍，周海燕，郭凱，張斯杰

(中國中藥公司，北京 100195)

HPLC測定桂附理中丸中6-姜辣素的含量

戴瑋，常新全*，肖蘇萍，周海燕，郭凱，張斯杰

(中國中藥公司，北京 100195)

目的：建立桂附理中丸中6-姜辣素的HPLC測定方法。方法：采用Waters Symmetry C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；乙腈-甲醇-水(40∶5∶55)為流動相；檢測波長為280 nm；流速為1.0 mL·min-1。結(jié)果：6-姜辣素在0.001 142～0.022 84 mg·mL-1與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 9)，平均加樣回收率為101.67%，RSD=0.72%。結(jié)論：6-姜辣素的含量測定方法可用于桂附理中丸的質(zhì)量控制。

桂附理中丸；6-姜辣素；高效液相色譜；含量測定

桂附理中丸由肉桂、附片、黨參、炒白術(shù)、炮姜、炙甘草六味中藥組成，是具有一定應(yīng)用基礎(chǔ)、療效顯著的溫陽健脾類中藥，有43個廠家擁有該品種的批準(zhǔn)文號。由于桂附理中丸含量測定指標(biāo)成分桂皮醛在方中極不穩(wěn)定，半年即下降50%以上，無法滿足《中華人民共和國藥典》(2010年版)[1]的要求，目前已不見該品種在市場上銷售。本研究采用高效液相色譜法建立了桂附理中丸中6-姜辣素的含量測定方法，為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters2695高效液相色譜儀；DENVER電子分析天平(1/10，北京賽多利斯儀器系列有限公司)；KQ3200超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海飛越實(shí)驗儀器有限公司)。

1.2 試藥

6-姜辣素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111833-201102)；甲醇、乙腈為色譜純；其余試機(jī)均為分析純；水為純化水。

桂附理中丸(廣東佛山馮了性藥業(yè)有限公司，批號分別為110016，110017，110018，130001，130002，130003)；肉桂、附片、黨參、炒白術(shù)、炮姜、炙甘草均購自北京華邈中藥工程技術(shù)開發(fā)中心。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-甲醇-水(40∶5∶55)；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：280 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 對照品溶液的制備

取6-姜辣素對照品適量，精密稱定，加甲醇配制成質(zhì)量濃度為0.012 mg·mL-1的溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取桂附理中丸，剪碎，取0.5 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加水1 mL，超聲處理10 min，并時時振搖使其溶散，甲醇定容至刻度，超聲處理45 min，放置至室溫，補(bǔ)充甲醇至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

取按處方比例及工藝制備的缺炮姜的陰性樣品，按2.3項下方法制成陰性樣品溶液。

2.5 專屬性試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液注入液相色譜儀，按2.1方法測定，陰性樣品溶液在與對照品色譜峰相應(yīng)保留時間無吸收峰。結(jié)果表明，其他組分對測定無干擾。對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液色譜圖見圖1。

注：A.對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性樣品溶液。圖1 對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液高效液相色譜圖

2.6 線性關(guān)系考察

取6-姜辣素對照品適量，精密稱定，加甲醇分別稀釋成質(zhì)量濃度為0.001 142、0.004 567、0.009 134、0.011 42、0.022 84 mg·mL-1的溶液，搖勻。分別精密吸取上述溶液，按2.1色譜條件進(jìn)行分析，以對照品峰面積為縱坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=11 501 458.063 4X+1 595.749 5(r=0.999 9)。結(jié)果表明，6-姜辣素在0.001 142～0.022 84 mg·mL-1與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗

取6-姜辣素對照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，經(jīng)計算RSD=0.3%，表明本方法精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、16 h進(jìn)樣，測定6-姜辣素峰面積，結(jié)果RSD=0.6%，表明供試品溶液中6-姜辣素含量在16 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗

取同一批次桂附理中丸樣品6份，按供試品溶液的制備方法制備，按照上述色譜條件測定，結(jié)果樣品中6-姜辣素平均含量為0.22%，RSD=1.0%，說明本法重復(fù)性良好。

2.10 回收率試驗

取已知6-姜辣素含量的桂附理中丸6份，每份0.25 g，精密稱定，分別加入已知量對照品(0.054 8 mg)，按供試品溶液制備方法操作，按上述色譜條件進(jìn)行分析，計算平均回收率，結(jié)果見表1。

表1 6-姜辣素加樣回收率試驗(n=6)

2.11 樣品含量測定

取不同批次桂附理中丸樣品，按供試品制備方法處理，按上述色譜條件進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表2。

表2 不同批次桂附理中丸含量測定結(jié)果(n=2)

3 結(jié)論與討論

由于含有活躍的醛基，桂皮醛光、熱穩(wěn)定性較差。肉桂以粉末入藥，其中桂皮醛容易發(fā)生降解導(dǎo)致含量降低[2]。

桂附理中丸由肉桂、附片、黨參、炒白術(shù)、炮姜、炙甘草六味中藥組成，其中肉桂具有補(bǔ)火助陽、散寒止痛、溫通經(jīng)脈的功能，附子具有回陽救逆、補(bǔ)火助陽、散寒止痛的功能，二者合用補(bǔ)火助陽，共為方中君藥。黨參健脾益肺、養(yǎng)血生津，白術(shù)健脾益氣、燥濕利水，二者合用補(bǔ)氣健脾，為方中臣藥。炮姜溫中止痛為方中佐藥，炙甘草補(bǔ)脾和胃、調(diào)和諸藥為方中使藥。肉桂和附子雖為方中君藥，但在方中用量較少，指標(biāo)成分含量偏低。黨參中的有效成分蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、黨參炔苷和白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ因產(chǎn)地、品種不同含量差異較大[3-5]，不適合作為含量測定指標(biāo)成分。炮姜雖為方中佐藥，但其有效成分6-姜辣素具有抗胃潰瘍、止嘔的藥理作用[6-7]，這與桂附理中丸治療脾胃虛寒、嘔吐的功能相對應(yīng)，可以在一定程度上反映該藥的功能，因此選擇6-姜辣素作為桂附理中丸含量測定的新指標(biāo)。

由于桂附理中丸含有大量煉蜜，加入有機(jī)溶劑后形成團(tuán)塊，不利于成分提取，故先加適量水超聲分散后再加入有機(jī)溶劑提取。通過對不同比例提取溶劑、不同超聲提取時間進(jìn)行考察，確定采用2.3中供試品制備方法。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京，中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 強(qiáng)皎，葉炳皇，林麗，等.丁香酚、桂皮醛不同存在狀態(tài)下的穩(wěn)定性影響因素研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2014，25(1)：89-92.

[3] 楊靜，蘇強(qiáng)，劉恩荔，等.不同產(chǎn)地黨參蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和黨參炔苷含量測定[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，41(8)：698-702.

[4] 黃健,車曉平,陳志峰,等.不同產(chǎn)地黨參中黨參炔苷的含量測定[J].北京中醫(yī)藥,2011,30(6):467-468.

[5] 許祥君，陳敏，宗露，等.不同品規(guī)白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ的含量測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，31(17)：421-1424.

[6] 徐靜華,陳雪梅,趙余慶,等.姜辣素對動物實(shí)驗性胃潰瘍的影響[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2011,28(3):221-225.

[7] 王耀霞,楊志宏,岳旺,等.姜辣素在2種嘔吐動物模型中止嘔作用機(jī)制的探討[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2009,26(2):134-164.

Determinationof6-GingerolinGuifulizhongPills

DAI Wei，CHANGXinquan*，XIAOSuping，ZHOUHaiyan，GUOKai，ZHANGSijie

(ChinaNationalTraditionalChineseMedicineCorp.，Beijing100195，China)

Objective：To establish an HPLC method for determination of 6-Gingerol in Guifulizhong Pills.Methods：HPLC was adopted with Waters Symmetry C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)，the mobile phase was a mixture of acetonitrile-methanol -water(40∶5∶55)，the detection wavelength was 280 nm and the flow rate was 1.0 mL·min-1.Results：The calibration curve of 6-gingerol was linear in the range of 0.001 142～0.022 84 mg·mL-1(r=0.999 9)，and the average recovery of was 101.67%(RSD=0.72%).Conclusion：The method of 6-gingerol determination could be used for the quality control of Guifulizhong Pills.

Guifulizhong Pills；6-gingerol；HPLC；determination

2016-05-13)

*

常新全，高級工程師，研究方向：中藥制劑工藝與質(zhì)量控制，E-mail：13911273610@139.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.12.025