利肺片中五味子醇甲和五味子甲素含量測(cè)定方法研究

胡東梅　張　瑞（馬鞍山市食品藥品檢驗(yàn)中心　馬鞍山　243000）

利肺片中五味子醇甲和五味子甲素含量測(cè)定方法研究

胡東梅張瑞（馬鞍山市食品藥品檢驗(yàn)中心馬鞍山243000）

目的：建立同時(shí)測(cè)定利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的反相高效液相色譜（RP-HPLC）方法。方法：樣品用甲醇超聲提取，過(guò)濾，取續(xù)濾液，用RP-HPLC直接測(cè)定，十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動(dòng)相為甲醇∶水（梯度洗脫），檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。結(jié)果：五味子醇甲和五味子甲素分別為1.636～16.36μg（r=1.000）和1.636～16.36μg（r=0.9990）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。平均加樣回收率（n=6）分別為97.6%～101.8%、98.9%～101.5%，RSD分別為1.6%、1.0%。結(jié)論：該方法快速簡(jiǎn)便，可以用于利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的含量測(cè)定。

HPLC五味子醇甲 五味子甲素 利肺片

利肺片收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十一冊(cè)（WS3-B-2152-96），由百部、百合、五味子、枇杷葉、白及、牡蠣、甘草、冬蟲夏草和蛤蚧粉組成，具有驅(qū)癆補(bǔ)肺、鎮(zhèn)咳祛痰的作用，用于治療咳嗽咯痰、咯血哮喘、慢性氣管炎等癥。該標(biāo)準(zhǔn)中只有性狀和片劑通則檢查其質(zhì)量，沒(méi)有含量測(cè)定方法，某些含五味子的中成藥中五味子醇甲和五味子甲素的含量測(cè)定方法已有報(bào)道，利肺片中有效成分含量測(cè)定方法未見(jiàn)報(bào)道，《中國(guó)藥典》2015年版一部中收載的五味子的藥材及飲片中，含量測(cè)定項(xiàng)下僅測(cè)五味子醇甲，文獻(xiàn)報(bào)道五味子有效成分主要含有聯(lián)苯環(huán)辛烯類物質(zhì)，有五味子甲素、乙素、丙素，醇甲等，本文建立了HPLC法測(cè)定利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的含量方法。

1　儀器和試藥

高效液相色譜儀（德國(guó)戴安）配DAD檢測(cè)器；AL-104電子天平（梅特勒-托利多上海公司）；BP211D電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。五味子醇甲（批號(hào)：110857-201513）五味子甲素對(duì)照品（批號(hào)：110764-201513）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。利肺片為市售品（批號(hào)：20140801、20150201、20150302）。所用試劑均為分析純，水為純化水，液相用水為去離子水，甲醇為色譜純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件：色譜柱:德國(guó)戴安公司，十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱AcciaimTM120（150mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇-水（梯度洗脫程序見(jiàn)表1）。流速：1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，進(jìn)樣量：20μL，柱溫：35℃。

表1　梯度洗脫程序

2.2樣品溶液的制備：取利肺片約10g，研細(xì)，混勻。精密稱取每種批號(hào)的供試品各1g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理（功率250w，頻率20kHz）30min，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻。過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3對(duì)照品溶液的制備：精密稱取五味子醇甲對(duì)照品16.36mg和五味子甲素對(duì)照品17.52mg，分別置于50mL容量瓶中用甲醇稀釋并定容至刻度，分別取5mL置50mL容量瓶中用甲醇定容至刻度作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別取兩種溶液各2mL置10mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度即得混合對(duì)照品溶液。

2.4陰性樣品溶液的制備：根據(jù)利肺片的處方制備不含五味子藥材的陰性樣品，照供試品溶液的制備項(xiàng)下同法操作，即得。

3　結(jié)　果

3.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，自動(dòng)進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，可見(jiàn)對(duì)照品溶液兩個(gè)峰能夠完全分離，陰性樣品溶液在該處無(wú)吸收峰見(jiàn)圖1。

3.2精密度及穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取混合對(duì)照品溶液20μL連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，五味子醇甲、五味子甲素的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為0.1%、0.3%。

精密吸取混合對(duì)照品溶液在0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣，五味子醇甲、五味子甲素的峰面積RSD分別為0.2%、0.4%。

3.3線性范圍與檢出限：取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密吸取0.5、1、1.5、2、3、5mL分別置于10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，以色譜圖峰面積（Y）對(duì)相應(yīng)對(duì)照品的含量（x）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果顯示，五味子醇甲在1.636～16.36μg，五味子甲素在1.752～17.52μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，五味子醇甲的回歸方程為Y=0.637x+ 0.010，r=1.000，檢出限為0.02μg；五味子甲素的回歸方程為Y= 0.488x-0.066，r=0.9990，檢出限為0.01μg。3.4回收率試驗(yàn)：準(zhǔn)確稱取已知含量的樣品粉末6份，每份約0.5g，分別加入五味子醇甲和五味子甲素對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL，置10mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度。過(guò)濾，精密吸取20μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，加標(biāo)回收率結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　五味子醇甲和五味子甲素加標(biāo)回收率（n=6）

3.5樣品測(cè)定：精密稱取不同廠家的三批樣品，照“2.2”項(xiàng)下制備樣品溶液，精密吸取20μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　不同廠家的三批樣品含量測(cè)定結(jié)果

4　試驗(yàn)條件的選擇

4.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：經(jīng)高效液相DAD光譜掃描，五味子醇甲、五味子甲素的最大吸收波長(zhǎng)分別為254nm和220nm，220nm波長(zhǎng)處溶劑吸收強(qiáng)，干擾大，故選擇254nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

4.2提取溶劑及條件的選擇：分別對(duì)提取溶劑（甲醇、乙醇）和提取方式（超聲和回流）及溶劑比例（100%甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇）進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)100%甲醇提取效率最高，以甲醇超聲30min和回流提取30min，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者無(wú)較大差異，故選擇100%甲醇超聲30min，簡(jiǎn)便快速。

4.3流動(dòng)相的選擇：首先采用流動(dòng)相為甲醇-水（65∶35）等度洗脫，發(fā)現(xiàn)五味子甲素出峰時(shí)間太長(zhǎng)（約30min），采用流動(dòng)相為甲醇-水（75∶25），發(fā)現(xiàn)五味子醇甲出峰時(shí)間太短（約3min），5min之前的雜質(zhì)峰太大，干擾大，選擇梯度洗脫，五味子醇甲的保留時(shí)間為6min，五味子甲素的保留時(shí)間為17min，無(wú)干擾，分離度良好，故選擇梯度洗脫。

5　討論

作者采用高效液相色譜法建立了同時(shí)測(cè)定利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的方法。經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，建立的定量分析方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為全面評(píng)價(jià)利肺片的質(zhì)量提供了依據(jù)。由于3種批號(hào)的樣品來(lái)自3個(gè)廠家，2種活性成分含量存在較大的差異，標(biāo)準(zhǔn)的處方中五味子用70%乙醇提取，提取效率低，沒(méi)有完全將活性成分提出，導(dǎo)致制劑中含量低。建議優(yōu)化處方工藝，提高提取效率。

［1］張延妮，岳宣峰，王喆之.反相高效液相色譜同時(shí)測(cè)定五味子中五味子醇甲、五味子酯甲和五味子乙素的含量［J］.分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23（1）：41-44.

［2］何海雁，張葉，劉宏明.HPLC法同時(shí)測(cè)定五酯膠囊中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量［J］.藥學(xué)研究，2015，34（11）：652-654.

［3］史敏，林超，秦華.HPLC測(cè)定養(yǎng)肝片中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量［J］.食品與藥品，2014，16（6）：433-436.

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R927.2

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1672-8351（2016）02-0020-02