紅砂葉片和長葉紅砂葉片中總黃酮含量測定△

鈕樹芳　石松利　楊　丹（包頭醫(yī)學院藥學院　包頭　014040）

紅砂葉片和長葉紅砂葉片中總黃酮含量測定△

鈕樹芳石松利*楊丹（包頭醫(yī)學院藥學院包頭014040）

目的：提取紅砂葉片和長葉紅砂葉片中總黃酮并測定含量。方法：采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法顯色，蘆丁為對照，紫外-可見分光光度法在510nm處測定。結果：紅砂葉片和長葉紅砂葉片中總黃酮的含量分別為19.72mg/g和17.69mg/g?；貧w方程為A= 12.935c+0.0003，相關系數(shù)r為0.9995，在0～60μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好，回收率為95.83%～104.2%（n=9），精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好。結論：該法簡便，準確，可作為紅砂葉片和長葉紅砂葉片中總黃酮的含量測定方法。

紅砂葉片 長葉紅砂葉片 總黃酮 含量測定

紅砂（Reaumuria Soongorica）又名琵琶柴，長葉紅砂（Reaumuria trigyna）又名黃花紅砂、黃花琵琶柴，是檉柳科（Tamaricaceae）紅砂屬（Reaumuria）的耐鹽強旱生小灌木［1］，亞洲中部亞區(qū)東阿拉善-西鄂爾多斯特有種［2］，起源于第三紀，為古地中海變遷的殘遺珍稀植物，學術界稱為“活化石”，我國特有，被列為國家重點保護植物［3］和內(nèi)蒙古自治區(qū)珍稀瀕危植物［4］。它們在植物分類、植物區(qū)系及系統(tǒng)演化［5］、生物學和生態(tài)學［6～8］等的研究上具有重要的價值，是集藥用、飼用、生態(tài)、經(jīng)濟、社會效益為一體的優(yōu)良的木本植物，青綠時粗蛋白質和粗脂肪含量較高，枝葉和果實可入藥，有祛濕止癢的功效，用于治療濕疹-皮炎，植叢是有“沙漠人參”之稱的鹽生肉蓯蓉的主要寄主之一。

濕疹皮炎病因復雜，病情易反復。近年來，對抗菌治療濕疹皮炎進行了研究，免疫調(diào)節(jié)劑的使用有顯著療效［9］。但是傳統(tǒng)用藥易引起局部皮膚萎縮、色素異常等不良反應［10］。黃酮類化合物廣泛存在于植物的花、葉和果實中，具有抗菌抗病毒、免疫激活等多種生物活性［11］。研究表明治療濕疹皮炎的中草藥中黃酮［12］具有抗菌、消炎、抗過敏及增強免疫力的作用。紅砂和長葉紅砂長期以來作為治療濕疹皮炎的單味中草藥使用，目前鮮見黃酮含量測定的報道。因此，本文采用紫外-可見分光光度法，對中藥材紅砂和長葉紅砂中總黃酮進行提取和含量測定，為其治療濕疹皮炎的藥效成分、藥理機制研究以及對藥材的質量評價提供科學依據(jù)。

1　儀器、藥品和試劑

1.1儀器：T6-新悅紫外可見分光光度計（SHIMADZUCorporation）；數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-6（常州澳華儀器有限公司）；JYI201電子天平（上海明橋精密科學儀器有限公司）；索氏提取器。

1.2藥品和試劑：紅砂和長葉紅砂（采自內(nèi)蒙古烏海市）；蘆丁標準品（MUST-13040302）；石油醚，乙醇，亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉（所有試劑為分析純）；水為去離子水。

2　方法和結果

2.1供試品溶液的制備：將紅砂葉片和長葉紅砂葉片置于60℃烘箱中烘干至恒重，研細，分別精密稱取3g，用濾紙包好，置于索氏提取器中，用石油醚80mL，60℃～90℃水浴回流脫脂2次，每次2h，棄石油醚提取液，揮干石油醚后，用80%乙醇回流提取2次，每次2h，至溶液無色，另用少量80%乙醇多次洗滌，并入提取液中，轉移至200mL容量瓶中，加80%乙醇，定容，搖勻，即得紅砂和長葉紅砂總黃酮供試品溶液。

2.2對照品溶液的制備：精密稱取蘆丁標準品20mg，用80%乙醇溶解并定容至100mL容量瓶中，配制成0.2mg/mL溶液，作為標準品備用。

2.3測定波長的確定：精密移取蘆丁標準品溶液和兩種總黃酮樣品溶液各1mL，分別置于10mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加4%氫氧化鈉4mL，然后加蒸餾水定容至刻度，搖勻，放置15min。以相應試劑為空白，在波長200～600nm范圍內(nèi)掃描。圖譜顯示在510nm處蘆丁標準品溶液有最大吸光度值，兩種總黃酮樣品溶液均有吸收，因此確定510nm為最大吸收波長。

2.4標準曲線的繪制：精密移取蘆丁對照品0.0、0.4、1.0、1.4、1.8、2.4、3.0mL分別置于10mL容量瓶中，按照“2.3”項下方法顯色，在510nm波長下測定各溶液吸光度，以溶液濃度（c）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標繪制標準曲線，如圖1?；貧w方程為A= 12.935c+0.0003，相關系數(shù)r為0.9995。

2.5穩(wěn)定性試驗：精密移取長葉紅砂提取液1mL，按照“2.3”項下方法顯色，于0min、15min、30min、45min、60min、70min、80min、90min、120min測定吸光度，以0～120min吸光度值計算RSD為4.59%，以40～120min吸光度值計算RSD為0.22%，結果表明，顯色后的供試液在40～120min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6精密度試驗：精密移取1mL對照品溶液，按“2.3”項下方法顯色后，在510nm處測定吸光度值，平行測定6次，以吸光度值計算RSD值為0.48%，結果表明精密度良好。

2.7重復性試驗：精密稱取長葉紅砂樣品粉末3g，6份，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，按“2.3”項下方法顯色后，在510nm處測定吸光度值，以吸光度值計算RSD值為0.67%，結果表明重復性良好。

2.8加樣回收試驗：精密移取9份長葉紅砂總黃酮提取液各1mL于10mL容量瓶中，分為3組，分別加入0.8、1.0、1.2mL對照品溶液，按照“2.3”項下方法顯色并在510nm處測量吸光度值，回收率為95.83%～104.2%。結果見表1。

2.9樣品含量測定：精密稱取3份紅砂和長葉紅砂樣品粉末各3g，按“2.1”項下方法制備供試品溶液。分別精密移取1mL，并按“2.3”項下方法顯色后，采用紫外可見分光光度法測定吸光度值（A），由回歸方程求出樣品溶液中總黃酮濃度，然后計算總黃酮含量，結果見表2。

表1　加樣回收率試驗結果

表2　紅砂葉片和長葉紅砂葉片總黃酮含量（±s）

表2　紅砂葉片和長葉紅砂葉片總黃酮含量（±s）

樣品　總黃酮含量（mg/g）紅砂葉片　19.72±0.14長葉紅砂葉片　17.69±0.16

3　討論

實驗結果表明紅砂葉片和長葉紅砂葉片中含有豐富的黃酮類化合物，含量分別為19.72mg/g和17.69mg/g。該方法操作簡單、快速、靈敏，顯色穩(wěn)定，回收率高，重復性好，為紅砂和長葉紅砂中總黃酮含量測定提供了一種可靠方法，為研究紅砂和長葉紅砂藥效與總黃酮之間的關系提供有效的數(shù)據(jù)，同時為紅砂和長葉紅砂藥材的質量評價以及資源的合理開發(fā)利用提供了參考。

［1］中國科學院內(nèi)蒙古寧夏綜合考察隊.內(nèi)蒙古植被［M］.北京：科學出版社，1985：172，647.

［2］趙一之.鄂爾多斯高原的維管植物［M］.呼和浩特：內(nèi)蒙古大學出版社，2006.

［3］傅立國.中國植物紅皮書-稀有瀕危植物（第1冊）［M］.北京：科學出版社，1992.

［4］楊持，王迎春，劉強，等.四核木保護生物學［M］.北京：科學出版社，2002：147.

［5］趙一之.長葉紅砂植物區(qū)系地理分布研究［J］.內(nèi)蒙古大學學報（自然科學版），1996，7（3）：369-370.

［6］周健華，王迎春，石松利.長葉紅砂主要水分參數(shù)隨季節(jié)和生境的變化［J］.應用生態(tài)學報，2009，20（11）：2624-2631.

［7］周紅兵，王迎春，石松利，等.NaCl脅迫對鹽生植物長葉紅砂幼苗內(nèi)源激素的影響 ［J］.內(nèi)蒙古大學學報（自然科學版），2010，41（5）：531-535.

［8］薛焱，王迎春，王同智.鹽脅迫對瀕危植物長葉紅砂抗氧化系統(tǒng)的影響［J］.中國沙漠，2012，32（6）：1669-1673.

［9］王金勇.中藥聯(lián)合復方甘草酸苷治療濕疹療效觀察［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2009，18（21）：2537-2538.

［10］訾慧.中藥降香研究進展［J］.遼寧中醫(yī)學院學報，2003，5（2）：90-91.

［11］肖省娥，林勵.不同來源的降香藥材中總黃酮含量測定［J］.基層中藥雜志，2000，14（6）：12-13.

［12］袁小英，畢淑英，馬紅雨，等.外用苦豆子油擦劑對非特應性慢性濕疹皮炎金黃色葡萄球菌及馬拉色菌的影響［J］.河北醫(yī)藥，2013，35（11）：1707.

Determination Content of the Total Flavonoids in the Leaves of Reamuria Soongorica and Reaumuria trigyna

Niu Shufang Shi Songli*Yang Dan（Department of Pharmacy，Baotou Medical College，Baotou，014040，China）

Objective:To extract and determine the content of total flavonoids in the leaves of Reaumuria Soongorica and Reaumuria trigyna.Methods:Total flavonoids of the samples were determined at 510nm by UV spectrophotometry with rutin as standard control. Results:The contents of total flavonoids in the leaves of Reaumuria Soongorica and Reaumuria trigyna were 19.72mg/g and 17.69mg/g. The regressive equation was A=12.935c+0.0003（r=0.9995），which had a good linear relationship in the range of 0～60μg/mL.The recovery were 95.83%～104.2%（n=9）.Conclusion:the method is simple，rapid，accurate and which could be used as a means to measure total content of flavonoids in the Reaumurid Soongorica and Reaumuria trigyna.

Reamuria Soongorica Reaumuria trigyna Total Flavonoids Determination of Content

R927.2

A

1672-8351（2016）02-0003-02

國家自然科學基金（81102760）資助。