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    金盞菊不同提取液體外抑菌作用初步研究

    2016-09-16 09:17:30鄭佳盧先明鄧晶晶
    中藥與臨床 2016年3期
    關(guān)鍵詞:金盞提物含藥

    鄭佳,盧先明,鄧晶晶

    金盞菊不同提取液體外抑菌作用初步研究

    鄭佳1,盧先明2,鄧晶晶2

    目的:考察金盞菊水提物和醇提物的體外抑菌作用。方法:采用2倍遞增稀釋濃度法檢測金盞菊對金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、沙門氏菌5種菌最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果:金盞菊醇提物在10倍稀釋濃度時對大腸桿菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌有抑菌作用,最低抑菌濃度(MIC)為0.1 g·mL-1;金盞菊水提物在10倍稀釋濃度時對大腸桿菌有抑菌作用,最低抑菌濃度(MIC)為0.1 g·mL-1,其余稀釋倍數(shù)均無抑菌作用。結(jié)論:金盞菊提取液對這5種細(xì)菌的抑制效果較差,可能與金盞菊藥用部位、提取溶劑及生長環(huán)境有關(guān)。

    金盞菊;體外抑菌作用;醇提取液;水提取液

    金盞菊為菊科金盞花屬植物金盞菊Calendula officinalis L.的干燥全草。具有清熱解毒、活血調(diào)經(jīng)的功效,主治中耳炎、月經(jīng)不調(diào)等癥[1]。金盞菊不僅作為民間藥收載于《云南中草藥》、《中華本草》等著作中,更作為一種國際傳統(tǒng)藥廣泛應(yīng)用于歐洲。據(jù)文獻記載,早在歐洲12世紀(jì)的《簡單藥物》(歐洲草藥第一部準(zhǔn)藥典)以及《關(guān)于不同植物和草藥的特性的書》著作中就有關(guān)于金盞菊藥用價值的記載[2]。國外學(xué)者對其做了大量研究,表明金盞菊的花、葉均具有抗菌、消炎等藥理作用[3~4],金盞菊花在國外更是被制成各種藥膏用于皮膚病如外傷、感染等的治療[2]。課題組前期已對金盞菊抗炎、止血藥理作用方面做了基礎(chǔ)研究[5],其全草是否具有和花相同的抗菌作用目前并未見文獻報道。為了考察這一點,本實驗對金盞菊水提物和醇提物進行了體外抑菌實驗研究,為其資源開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料

    1.1藥材

    實驗用金盞菊于2013年3月21日采自四川省彭州市麗春鎮(zhèn)合江村,經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)盧先明教授鑒定為菊科金盞花屬植物金盞菊Calendula officinalis L.的干燥全草。

    1.2菌種

    金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、沙門氏菌5種菌均由成都中醫(yī)藥大學(xué)病原微生物與免疫學(xué)實驗室提供。

    2 實驗原理與方法

    2.1實驗原理

    分別將一定濃度的金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、沙門氏菌5種菌接種到不同濃度的含藥平板上,于37℃溫箱中培養(yǎng)24 h,觀察各種細(xì)菌的生長情況,從而判斷供試藥的體外抑菌效果。

    2.2實驗方法與步驟

    2.2.1實驗方法 首先用紙片擴散法進行粗篩,取直徑6 mm濾紙在各供試原液中浸泡后,分別接種在涂布有各種供試菌的平板中,于37℃溫箱中培養(yǎng)24 h,培養(yǎng)后抑菌圈無或較小(d≤10 mm),說明抑菌作用較弱;進一步采用2倍遞增稀釋濃度法檢測金盞菊最低抑菌濃度。

    2.2.2實驗步驟

    (1) 供試液的制備

    稱取金盞菊藥材適量,平均分為2份,分別用水、60%乙醇回流提取,濃縮制成含生藥1 g·mL-1的原藥液,備用。

    (2) 菌種的活化

    各供試菌種需要在營養(yǎng)肉湯中轉(zhuǎn)種、活化2~3代備用。

    (3) 供試菌液的制備

    取活化后的5種菌種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物,用滅菌生理鹽水稀釋到104~105b CFU·mL-1菌液備用。

    (4) 含藥平板的制備

    設(shè)定含藥平板含藥濃度分別為0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625 g·mL-1,即取2 mL、1 mL、0.5 mL、0.25 mL、0.125 mL供試原藥液分別與0、1、1.5、1.75、1.875 mL營養(yǎng)肉湯混合置于滅菌空白平皿中,將已滅菌營養(yǎng)瓊脂冷卻至50℃左右,注入18 mL/皿,充分混勻,分別得到10倍、20倍、40倍、80倍、160倍稀釋含藥平板。

    (5) 接種方法

    用移液槍量取20 μL菌液點種在普通營養(yǎng)瓊脂平板及含藥平板上,做三個重復(fù)。

    (6) 培養(yǎng)與觀察

    于37℃溫箱中培養(yǎng)24 h,觀察并記錄各類細(xì)菌的生長情況。

    3 實驗結(jié)果

    金盞菊體外抑菌結(jié)果見表1、表2。

    表1 金盞菊水提液體外抑菌效果

    表2 金盞菊醇提液體外抑菌效果

    上述結(jié)果顯示金盞菊提取液對這5種細(xì)菌的抑制效果較差。金盞菊醇提物在10倍稀釋時對大腸桿菌、金色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有抑菌作用,最低抑菌濃度(MIC)為0.1 g·mL-1;金盞菊水提物在10倍稀釋時對大腸桿菌有抑菌作用,最低抑菌濃度(MIC)為0.1 g·mL-1,其余稀釋倍數(shù)均無抑菌作用。

    4 討論

    從結(jié)果可知,金盞菊提取液對這5種細(xì)菌的抑制效果較差。金盞菊醇提物僅對大腸桿菌、金色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有較弱抑菌作用;金盞菊水提物僅對大腸桿菌有較弱抑菌作用。國外文獻報道金盞菊花、葉有較強的抑菌作用,并被制成各種軟膏用于抗菌、消炎。本次試驗所用藥材為金盞菊全草,并非單一的花和葉,且批次單一,其抑菌效果差,可能與藥用部位選擇、提取所用溶劑以及金盞菊所處生長環(huán)境等有關(guān),具體原因有待進一步研究。

    [1] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1998:751.

    [2] 江首彥.歐洲德語區(qū)草藥文獻整理及奧地利中藥處方分析[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2008:39.

    [3] Efstratiou E,Hussain AI,Nigam PS,et al.Antimicrobial activity of Calendula officinalis petal extracts against fungi, as well as Gram-negative and Gram-positive clinical pathogens[J]. Complement Ther Clin Pract,2012(18):173.

    [4] 洪文旭.止血消炎金盞菊[N].中國中醫(yī)藥報,2009-7-16(010).

    [5] 鄭佳,盧先明,徐利,等.金盞菊的安全性評價及藥效學(xué)研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2013,36(1):63.

    (責(zé)任編輯:陳思敏)

    Study on the bacteriostatic effects of Jinzhanju extract in vitro /

    ZHENG Jia1, LU Xian-ming2, DENG Jing-jing2//(1.Leshan Vocational and Technical College, Leshan 614000, Sichuan;2.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, Sichuan)

    Objective: To study the bacteriostatic effects of water extract and alcohol extract of Jinzhanju in vitro. Method: Minimal inhibitory concentrations of Jinzhanju extract were determined by double-fold dilution method on staphylococcus aureus,staphylococcus epidermidis, escherichia coli, pseudomonas aeruginosa and salmonella typhimurium. Result: The MIC of alcohol extract were 0.1 g·mL-1for E. coli, S. Aureus and S.epidermidis at 10 times diluted concentration. The MIC of water extract was 0.1 g·mL-1for E. coli at 10 times diluted concentration.Conclusion: Jinzhanju extract shows poor bacteriostatic effects on the tested bacterium which may be related to the medicinal part, extraction solvent and growth environment.

    Jinzhanju; bacteriostatic effects in vitro; alcohol extract;water extract

    R 285.5

    A

    1674-926X(2016)03-015-02

    1.樂山職業(yè)技術(shù)學(xué)院,四川 樂山 614000 2.成都中醫(yī)藥大學(xué),四川 成都 611137

    鄭佳 (1987-),女,碩士研究生,主要從事中藥品種、品質(zhì)與資源開發(fā)研究Tel:13980270251 Email:623432246@qq.com

    鄧晶晶(1982-),女,實驗師,主要從事中藥品種、品質(zhì)與資源開發(fā)研究Tel:13880652682 Email:16640545@qq.com

    2015-08-08

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