Sysmex XE-5000血液分析儀檢測血小板的應(yīng)用探討

周格琛，韋美德，賀望嬌，韋鴻健，梁委軍

(廣西醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院/柳州市工人醫(yī)院檢驗科，廣西柳州 545005)

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·經(jīng)驗交流·

Sysmex XE-5000血液分析儀檢測血小板的應(yīng)用探討

周格琛，韋美德，賀望嬌，韋鴻健，梁委軍

(廣西醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院/柳州市工人醫(yī)院檢驗科，廣西柳州 545005)

目的探討Sysmex XE-5000全自動血液分析儀(AHA)檢測血小板的準確性以及假性異常的原因和糾正措施。方法用Sysmex XE-5000 AHA以常規(guī)方法(電阻抗法即PLT-1模式)對患者血小板進行檢測，隨機選擇血小板直方圖及紅細胞(RBC)直方圖均正常的50例標本作為試驗組1，另外選擇血小板直方圖異?；?和)RBC直方圖異常的50例標本作為試驗組2，然后對試驗組2的各標本逐一在Sysmex XE-5000 AHA上以熒光染色激光散色法(光學法即PLT-O模式)檢測血小板作為試驗組3，儀器檢測的3個組數(shù)據(jù)分別與手工法進行比較。結(jié)果在試驗組1中，儀器的檢測結(jié)果與手工計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而試驗組2儀器的檢測結(jié)果與手工計數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，試驗組3儀器的檢測結(jié)果與手工計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)論Sysmex XE-5000 AHA檢測血小板的結(jié)果準確、可靠，但需要熟練掌握其影響因素和儀器的性能及檢測原理，才能為臨床提供準確、可靠的檢驗報告。

血液分析儀；血小板計數(shù)；電阻抗法；光學法

隨著科學技術(shù)的發(fā)展，各大中小型醫(yī)院的實驗室血小板計數(shù)(PLT)大多使用血液分析儀自動檢測，工作效率得以大幅度提高并減輕了勞動強度，然而其影響因素不容忽視。本文探討了Sysmex XE-5000 AHA檢測血小板的準確性以及假性異常的影響因素和糾正措施，現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1標本來源選擇2015年11月6日根據(jù)醫(yī)囑需做血細胞分析計數(shù)的住院患者296例，在凌晨6：00～7:00由病區(qū)護士抽取其靜脈血2 mL于乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)真空抗凝管中，輕輕混勻，在室溫狀態(tài)下4 h內(nèi)完成所有檢測。

1.2儀器與試劑Sysmex XE-5000 AHA及其原裝進口配套試劑；1%草酸銨血小板稀釋液(草酸銨1 g、EDTA-Na20.012 g、4%甲醛溶液0.1 mL，蒸餾水加至100 mL。配成后多次過濾，空白計數(shù)為“0”，4 ℃冰箱保存)。

1.3方法以Sysmex XE-5000 AHA對患者標本進行全血細胞計數(shù)及五分類檢測。分析前，用Sysmex公司提供的原裝高、低2種e-CHECK質(zhì)控液做室內(nèi)質(zhì)控，確認儀器和試劑處于正常狀態(tài)，嚴格按照儀器的標準操作程序(SOP)進行常規(guī)標本檢測。隨機選擇血小板直方圖及紅細胞(RBC)直方圖均正常的50例標本作為試驗組1，另外選擇血小板直方圖異?；?和)RBC直方圖異常的50例標本作為試驗組2，然后對試驗組2的各標本逐一在Sysmex XE-5000 AHA上應(yīng)用PLT-O模式檢測血小板作為試驗組3。記錄3個試驗組的血小板數(shù)值。同時讓兩名技術(shù)熟練的主管技師對以上2組標本采用雙盲法進行血小板手工計數(shù)：按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》(第3版)，以微量吸管準確吸取經(jīng)混勻的全血20 μL于0.38 mL草酸銨血小板稀釋液中，輕輕混勻，10 min后再次輕輕混勻混懸液，充入計數(shù)池，靜置15～20 min，在光學顯微鏡高倍鏡下精確計數(shù)中間大方格中5個中方格里的血小板，對于壓邊線的血小板，采取數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則，按公式(PLT/L=5個中方格里的PLT×5×10×20×106)計算出各標本的血小板數(shù)，取兩名主管技師的均值作為血小板手工計值并與儀器的檢測結(jié)果作比較。

2　結(jié)　　果

各組測定的血小板結(jié)果見表1。在試驗組1中，儀器的檢測結(jié)果與手工計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而試驗組2儀器的檢測結(jié)果與手工計數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，試驗組3儀器的檢測結(jié)果與手工計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1　　3個試驗組儀器測定的血小板數(shù)值與手工計數(shù)的比較

3　討　　論

Sysmex XE-5000 AHA有2種血小板檢測模式，即PLT-I和PLT-O。PLT-I模式的檢測原理是被稀釋的血細胞均勻混懸液在恒定負壓的作用下，以顆粒經(jīng)過RBC/PLT小孔時電阻抗脈沖信號的變化為基礎(chǔ)對血小板進行計數(shù)和體積測定，其缺點是不能完全排除體積和光學特征與血小板相似的非血小板顆粒干擾。試驗組1證實在正常情況下其檢測結(jié)果是可靠的，然而試驗組2提示其尚不能完全排除小RBC和(或)RBC碎片等的干擾，血液中RBC數(shù)量遠遠多于血小板，即使有少部分RBC或RBC碎片被儀器誤計數(shù)入血小板范圍內(nèi)，也會給檢測結(jié)果造成較大的影響，導致PLT假性增多。從試驗組3可以看出在血小板或(和)RBC直方圖異常的情況下，儀器通過PLT-O模式測定血小板的結(jié)果與手工計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，即在此模式下儀器的檢測結(jié)果依然是可靠的，這是由于PLT-O模式設(shè)置有專用的RET/PLT-O石英毛細管通道，并以Plymethine和Oxazine對血小板進行核酸熒光染色，應(yīng)用半導體激光與流式細胞技術(shù)，對各血小板逐一從高低角度進行二維激光掃描，即以低角度散射光(前向散射光)檢測顆粒的數(shù)量和體積，高角度散射光(側(cè)向散射光)的不同波長熒光散射強度反映被檢顆粒的RNA信息，最后綜合分析來自各散射光的信息，排除非血小板顆粒的干擾，從而準確檢測到血小板的數(shù)量及其各項參數(shù)[1]。因此建議發(fā)現(xiàn)血小板結(jié)果有異?；蚱渲狈綀D和(或)RBC直方圖異常時，用PLT-O模式復查，讓結(jié)果更加真實、可靠。

Sysmex XE-5000AHA以PLT-O模式檢測血小板的準確性是相對的，在實際工作中，遇到首次PLT結(jié)果減低或者驟然下降的病例應(yīng)注意觀察標本是否有凝塊，詢問臨床護士抽血是否有不順利，若回答是否定的，則需涂片染色鏡檢以排除血小板聚集或血小板衛(wèi)星現(xiàn)象，避免PLT假性減少而導致臨床誤診誤治[2]。血小板衛(wèi)星現(xiàn)象是指血小板黏附并圍繞于中性粒細胞、單核細胞或淋巴細胞表面的現(xiàn)象。該現(xiàn)象偶爾見于EDTA抗凝血中，產(chǎn)生的原因可能是EDTA與免疫球蛋白相互作用并且非特異性地結(jié)合于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，這種血小板結(jié)合的自身抗體Fc端能夠與中性粒細胞、淋巴細胞或單核細胞膜上的Fc受體相結(jié)合[3]。血小板衛(wèi)星現(xiàn)象是全自動血液分析儀檢測血小板假性減少的原因之一，而血小板大量聚集又是另外一個重要的影響因素，主要見于EDTA依賴性假性血小板減少(EDTA-PTCP)，文獻報道其發(fā)生率不到0.2‰，然而在住院患者中的發(fā)病率可高達0.8‰左右，平均為0.5‰[4]，EDTA-PTCP產(chǎn)生的原因可能與血小板表面存在的某些隱匿性抗原有關(guān)。EDTA是血常規(guī)最好的抗凝劑，但在特定環(huán)境下會導致血小板活化，使其形態(tài)由正常的圓盤形轉(zhuǎn)變?yōu)榍蛐?，從而改變了血小板膜表面上的某些隱匿性抗原的結(jié)構(gòu)，與存在于血漿中的自身抗體相結(jié)合，激活花生四烯酸(AA)、磷脂酶C(PLC)、磷脂酶A2(PLA2)、5-羥色胺(5-HT)和二磷酸腺苷(ADP)等活性物質(zhì)，進而活化血小板纖維蛋白受體(FIB-R)，促進血小板與纖維蛋白原相互聚集成團而無法隨鞘液逐一通過RET/PLT-O石英毛細管通道，導致儀器檢測結(jié)果遠低于實際數(shù)值[5]。對于血小板衛(wèi)星現(xiàn)象或EDTA-PTCP的標本該如何處理有待進一步探討。有文獻報道，在EDTA抗凝血中加入一定量的氟化鈉或者丁胺卡那霉素1 h內(nèi)可有效抑制血小板的聚集或解離已聚集的血小板,1 h后其解離效果較差[6]。筆者認為也可以采集末梢血以草酸銨法手工計數(shù)血小板或嘗試改用枸櫞酸鹽抗凝血上機檢測，目的在于為臨床檢驗工作者遇到EDTA-PTCP時提供方便、有效的解決方案。

全自動血液分析儀的應(yīng)用給繁重的醫(yī)學檢驗工作帶來了巨大的便利，但在儀器使用前應(yīng)對其進行校準和性能驗證，工作人員經(jīng)培訓后考試合格方能上崗，在日常工作中嚴格按照SOP進行操作，定期對設(shè)備進行維護和保養(yǎng)，熟練掌握血液學檢驗的相關(guān)理論知識，了解儀器的性能和檢測原理并制訂出行之有效的復檢規(guī)則，才能為臨床提供準確、可靠的檢驗報告。

[1]李勇，慕悅意，夏永輝，等．SysmexXE-5000血液分析儀對血液疾病血小板檢測的應(yīng)用價值[J]．中國血液流變學雜志，2011，21(2)：329-332,369．

[2]張蕾，李晶華，李智，等．Sysmex XE-2100全自動血液分析儀對低值血小板檢測應(yīng)用探討[J]．中華檢驗醫(yī)學雜志，2010，33(5)：457-459．

[3]劉成玉，羅春麗，吳曉蔓，等．臨床檢驗基礎(chǔ)[M]．5版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：70．

[4]鄭軍，黃秀霞．乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少癥簡易糾正方案[J]．檢驗醫(yī)學與臨床，2015，12(2)：177-178,181．

[5]鄧向海，李柯萱．過敏患者EDTA依耐性血小板假性減少癥1例[J]．國際檢驗醫(yī)學雜志，2015，36(5)：718-719．

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.058

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1673-4130(2016)16-2340-02

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