免疫熒光法檢測(cè)陰道加德納菌的方法學(xué)評(píng)價(jià)

丁亞利，梁晶晶，薛新娜，盧麗娟，曹　婷，莫紹伶

(廣東省東莞市中醫(yī)院檢驗(yàn)科　523000)

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免疫熒光法檢測(cè)陰道加德納菌的方法學(xué)評(píng)價(jià)

丁亞利，梁晶晶，薛新娜，盧麗娟，曹婷，莫紹伶

(廣東省東莞市中醫(yī)院檢驗(yàn)科523000)

目的探討運(yùn)用免疫熒光法檢測(cè)陰道加德納菌(GV)的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法選取2015年4～12月進(jìn)行細(xì)菌性陰道炎檢測(cè)的2 612例患者作為研究對(duì)象，每例患者取雙份陰道分泌物標(biāo)本，分為兩組，觀察組采用免疫熒光法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)照組采用分離培養(yǎng)法進(jìn)行檢測(cè)，分析免疫熒光法檢測(cè)GV的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度以及陽性檢出率。結(jié)果免疫熒光法檢測(cè)GV的敏感度為94.31%，特異度為90.75%，準(zhǔn)確度為91.20%；分離培養(yǎng)法陽性檢出率為34.99%，免疫熒光法陽性檢出率為39.01%，兩者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論免疫熒光法檢測(cè)GV具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、陽性檢出率高、診斷時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，適用于臨床檢測(cè)。

陰道加德納菌；免疫熒光法；分離培養(yǎng)法

細(xì)菌性陰道病(BV)是育齡婦女最常見的陰道感染性疾病，其發(fā)病率約18%[1]。Marrs等[2]研究發(fā)現(xiàn)，陰道加德納菌(GV)是引起B(yǎng)V的主要病原體之一。GV感染不僅引起陰道炎、尿道炎，還引起早產(chǎn)、低體質(zhì)量?jī)?、絨毛膜炎、羊水感染、子宮內(nèi)膜炎、急性輸卵管炎、手術(shù)后感染[3]和男性不育[4]，GV感染還可以通過性活動(dòng)傳播，被稱為第三代傳染病[5]。GV感染產(chǎn)生的不良后果，已嚴(yán)重危害婦女健康，影響家庭和諧，成為嚴(yán)重的社會(huì)問題。目前GV感染的常規(guī)檢測(cè)方法有革蘭染色找線索細(xì)胞法、分離培養(yǎng)法。因線索細(xì)胞的識(shí)別受顯微鏡的質(zhì)量、標(biāo)本的采集以及操作者的經(jīng)驗(yàn)等諸多因素影響，主觀性強(qiáng)，因此革蘭染色法準(zhǔn)確率并不高；分離培養(yǎng)法雖作為GV感染檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，但GV生長(zhǎng)緩慢，24～48 h后見針尖大小菌落，耗時(shí)長(zhǎng)，目前在臨床較少用；因此有必要對(duì)GV感染做出快速、準(zhǔn)確、有效的診斷。本研究中采用免疫熒光法與分離培養(yǎng)法進(jìn)行比較，確定免疫熒光法檢測(cè)GV的敏感度、特異度等臨床技術(shù)指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取本院2015年4～12月在本院進(jìn)行細(xì)菌性陰道炎檢測(cè)的2 612例患者作為研究對(duì)象。年齡16～71歲，平均(31.5±5.3)歲。用無菌棉拭子取女性陰道后穹隆分泌物兩份，一份采用免疫熒光法檢測(cè)，另一份采用分離培養(yǎng)檢測(cè)。

1.2儀器與試劑熒光顯微鏡(德國萊卡儀器有限公司)，水浴箱(常州中捷試驗(yàn)儀器制造有限公司)，GV選擇性平板(江門凱林)，馬尿酸鹽試劑(廣東環(huán)凱生物科技有限公司)，茚三酮試劑(廣東環(huán)凱生物科技有限公司)，GV免疫熒光法檢測(cè)試劑盒(深圳市邁科龍生物技術(shù)有限公司，批號(hào)20150321)。

1.3方法

1.3.1對(duì)照組采用分離培養(yǎng)法將采集的標(biāo)本直接涂抹接種于GV選擇培養(yǎng)基上，置CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24～48 h后觀察結(jié)果，挑取可疑菌落做革蘭染色及生化鑒定，挑取一接種環(huán)實(shí)驗(yàn)菌加入1 mL馬尿酸試劑中，37 ℃ 2 h，滴入5滴茚三酮試劑，10 min內(nèi)觀察顏色變化，變成藍(lán)色為陽性；結(jié)合涂片鏡檢找到革蘭小棒狀桿菌，臨床即可報(bào)告檢出GV[6-7]。

1.3.2觀察組采用免疫熒光法將標(biāo)本輕緩?fù)磕ㄔ谳d玻片上，充分晾干，加50 μL無水乙醇固定10 min，自然晾干，使用移液器及一次性吸嘴汲取5 μLGV免疫熒光試劑，均勻滴加在玻片涂樣處，置于37 ℃水浴箱孵育30 min，用去離子水或蒸餾水緩緩沖洗玻片多次，每次5～10 s，再將玻片自然晾干。用合適的熒光顯微鏡進(jìn)行閱片，在100×物鏡下尋找發(fā)蘋果綠色熒光的典型細(xì)桿形GV。發(fā)現(xiàn)10個(gè)及以上蘋果綠色典型細(xì)桿形GV即為陽性。發(fā)現(xiàn)完整暗紅色上皮細(xì)胞，且未發(fā)現(xiàn)可定義為陽性的典型特異性染色即為陰性[8]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用率表示，兩組間的比較采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)算免疫熒光法檢測(cè)GV的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度和陽性檢出率。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1兩種方法的檢測(cè)結(jié)果見表1。免疫熒光法陽性1 019例，假陽性157例；免疫熒光法陰性1 593例，假陰性52例。兩種方法學(xué)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1　　兩種方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比(n)

2.2免疫熒光法診斷效能本研究中，免疫熒光法診斷敏感度94.31%(862/914)，特異度90.75%(1 541/1 698)，準(zhǔn)確度91.20%(2 403/2 612)，提示此方法具有較好的診斷效能。

2.3兩種方法檢測(cè)的陽性率免疫熒光法與分離培養(yǎng)法陽性檢出率分別為39.01%(1 019/2 612)和34.99%(914/2 612)，兩種方法檢測(cè)的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明免疫熒光法具有更高的陽性檢出率。

3　討　　論

GV是一類革蘭陰性或陽性的短桿菌、厭氧、嗜血、生長(zhǎng)緩慢、培養(yǎng)困難、培養(yǎng)環(huán)境和設(shè)備要求較高，再加上臨床上不正規(guī)的應(yīng)用抗生素，導(dǎo)致細(xì)菌的生長(zhǎng)受到抑制，分離培養(yǎng)陽性檢出率較低。本次分離培養(yǎng)法陽性檢出率(34.99%)與免疫熒光法陽性檢出率(39.01%)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。因此分離培養(yǎng)法臨床一般不采用，主要用于科研和新方法的方法學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

免疫熒光法是將不影響抗體活性的異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記在GV單克隆抗體上，GV抗原與GV抗體特異性結(jié)合，形成抗原-抗體-熒光素結(jié)合物，此結(jié)合物在熒光顯微鏡495 nm波長(zhǎng)激發(fā)光照射下發(fā)出蘋果綠色熒光，檢測(cè)特異的綠色熒光[9]，此標(biāo)記技術(shù)增加了檢測(cè)的敏感度，檢測(cè)過程只需1 h，且受外界干擾少；而分離培養(yǎng)檢測(cè)過程耗時(shí)48～72 h，干擾因素較多。本研究選取國際確認(rèn)的GV檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)——分離培養(yǎng)法作為標(biāo)準(zhǔn)方法，對(duì)2 612例患者進(jìn)行雙份標(biāo)本平行試驗(yàn)，研究結(jié)果顯示：免疫熒光法敏感度高94.31%、特異度強(qiáng)90.75%、準(zhǔn)確度高91.20%。表明免疫熒光法檢測(cè)GV敏感度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)周期短，外界干擾少。此檢測(cè)技術(shù)的準(zhǔn)確性、快速性和有效性等優(yōu)點(diǎn)適合臨床診斷，具有極大推廣意義。

本研究中，采用免疫熒光法檢測(cè)GV與分離培養(yǎng)法對(duì)比，得到了較好的效果：免疫熒光法陽性1 019例，假陽性157例，免疫熒光法陰性1 593例，假陰性52例，陽性檢出率39.01%。Abdelaziz等[10]報(bào)道在BV感染患者中GV檢出率為87.45%，健康女性檢出率26.24%。國內(nèi)黃偉忠等[11]報(bào)道680例受檢婦女中，免疫熒光法GV檢出率41.92%；本研究中免疫熒光法GV檢出率39.01%(1.019/2.612)，與該報(bào)道基本相符。

總之，本研究采用免疫熒光法和分離培養(yǎng)法對(duì)BV病原菌GV進(jìn)行平行檢測(cè)，以分離培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)，驗(yàn)證了免疫熒光法檢測(cè)GV的高敏感度、高特異性強(qiáng)、高準(zhǔn)確度，證明了免疫熒光法檢測(cè)GV的準(zhǔn)確性、快速性和有效性。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.056

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1673-4130(2016)16-2337-02

2016-02-28

2016-07-17)