黃地吉仙湯對(duì)2型糖尿病大鼠FBG及HbA1c影響的實(shí)驗(yàn)研究*

楊麗娜，羅志紅，欒曉文，寧鈺清，李富強(qiáng)，寧亞功

（成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院附屬中醫(yī)醫(yī)院，昆明 650032）

Abstract:［Objective］To investigate the effect of simvastatin on atherosclerotic plaque instability model of thrombosis in rabbits.［Methods］Male New Zealand rabbits were randomly divided into 2 groups.One group（sham group）was always given a normal diet.Another group was fed high-fat diet for four weeks，and then abdominal aortic endothelium was damaged by using 4F Forgarty catheter.The rabbits were replaced for normal diet until being sacrificed，and were randomly divided into model group and simvastatin group.Simvastatin group received simvastatin ［10 mg/（kg·d）］for 4 weeks.Sham group and model group were given an equal volume of normal saline.Rabbits were sacrificed after 4 weeks of drug intervention in each group.Rabbits plaque rupture were triggered by giving intraperitoneal injections of venom under（0.15 mg/kg）and the ear vein injection of histamine（0.02 mg/kg）in 48 h and 24 h twice before sacrifice.Rabbits abdominal aortic thrombosis were observed in the stereo microscope after sacrifice.Rabbits were detected vWF and D-Dimer by ELISA，and were detected concentration of TXB2 and 6-keto-PGF1α by radioimmunoassay，and were calculated the ratio of TXB2/6-keto-PGF1α.［Results］After four weeks of treatment with simvastatin，simvastatin group were observed to reduce plaque site thrombosis under stereo microscope，and there was a significant difference compared with the model group（P＜0.01）.Plasma levels of vWF：Ag and D-Dimer were lower in the simvastatin group，and there was a significant difference compared with the model group（P＜0.01）.Plasma concentration of TXB2 was lower and plasma concentration of 6-keto-PGF1α was higher，and there was a significant difference compared with the model group（P＜0.05）.The ratio of TXB2/6-keto-PGF1α was lower，and there was a significant difference compared with the model group（P＜0.01）.［Conclusion］Simvastatin can repair damaged endothelial cells and improve blood hypercoagulable state，inhibition of platelet aggregation，and thus play a role in anti-thrombosis.This study provides experimental evidence that simvastatin prevents thrombosis in the clinical for patients with AS unstabled plaque.
Key words:simvastatin；atherosclerosis；plaque instability；thrombosis

黃地吉仙湯對(duì)2型糖尿病大鼠FBG及HbA1c影響的實(shí)驗(yàn)研究*

楊麗娜，羅志紅，欒曉文，寧鈺清，李富強(qiáng)，寧亞功

（成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院附屬中醫(yī)醫(yī)院，昆明 650032）

［目的］觀察“補(bǔ)瀉同施，調(diào)節(jié)平衡”法指導(dǎo)組方的經(jīng)驗(yàn)方黃地吉仙湯對(duì)2型糖尿病大鼠空腹血糖（FBG）、糖化血紅蛋白（HbA1c）的影響。［方法］將清潔級(jí)雄性SD大鼠60只，隨機(jī)抽取10只設(shè)置為空白對(duì)照組，其余50只給予高脂高糖飼料加一次性小劑量腹腔注射鏈脲菌素（STZ）與精神緊張法誘發(fā)2型糖尿病大鼠模型。造模成功后隨機(jī)分為模型組、西藥治療組、中藥治療低、中、高劑量組，每組10只。除空白對(duì)照組外，其余5組分別喂藥觀察8周，給藥前后觀察大鼠一般情況、測(cè)定體質(zhì)量、FBG、HbA1c指標(biāo)。［結(jié)果］西藥治療組、中藥高、中、低劑量組大鼠經(jīng)給藥治療后，一般情況均有不同程度的改善，中藥高劑量組體質(zhì)量與其他4組比較明顯升高（P＜0.05）；西藥治療組、中藥高、中劑量組與模型組比較血糖明顯減低（P＜0.05）；中藥高劑量組具有明顯降低HbA1c的作用。［結(jié)論］黃地吉仙湯可以明顯改善糖尿病大鼠的一般情況，對(duì)糖尿病大鼠的體質(zhì)量減輕具有緩解作用，能顯著降低血糖及HbA1c，有效治療2型糖尿病。

2型糖尿病；黃地吉仙湯；空腹血糖；糖化血紅蛋白

糖尿?。―M）是由于胰島素分泌不足或胰島素作用低下而引起的一種代謝性疾病，以慢性高血糖為主要特征，是僅次于心血管疾病和惡性腫瘤的致死性疾?。?］。目前中國(guó)DM的診斷指標(biāo)為空腹血糖（FBG）和口服糖耐量（OGTT），只能反映即時(shí)血糖水平，受進(jìn)食、應(yīng)激反應(yīng)和降血糖藥物等相關(guān)因素的影響［2］。糖尿病一旦明確診斷，首先要控制血糖。近年來(lái)，血糖控制的情況多以糖化血紅蛋白（HbA1c）來(lái)評(píng)估。HbA1c是指血中葡萄糖與紅細(xì)胞的血紅蛋白經(jīng)非酶促反應(yīng)形成的酮胺化合物［3］，其含量與血糖濃度成正比，在血中濃度穩(wěn)定，可作為早期診斷DM、控制血糖的一項(xiàng)敏感而準(zhǔn)確的檢測(cè)指標(biāo)，從而評(píng)估DM并發(fā)癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)［4］。HbA1c對(duì)糖尿病的診斷已引起醫(yī)學(xué)衛(wèi)生界的高度關(guān)注，2010年美國(guó)ADA糖尿病協(xié)會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)中，明確規(guī)定HbA1c是國(guó)際公認(rèn)的糖尿病檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”［5］，在對(duì)糖尿病早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療中起到重要作用。本課題在前期的臨床研究中發(fā)現(xiàn)黃地吉仙湯具有降低2型糖尿病患者FBG及HbA1c的作用，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制2型糖尿病大鼠模型，以期進(jìn)一步驗(yàn)證黃地吉仙湯的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量140～160 g，5周齡，60只。購(gòu)自昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)SYXK（滇）2005-0008；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK（滇）2008-0005。動(dòng)物共分12籠飼養(yǎng)，每籠5只。屏障環(huán)境飼養(yǎng)，環(huán)境溫度為20～25℃，濕度為40%～60%，每天光照12 h，自由進(jìn)食進(jìn)水，飼養(yǎng)籠每日清潔，墊料每日更換1次。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物的制備及給藥劑量設(shè)定

1.2.1 黃地吉仙湯藥液的制備及給藥劑量設(shè)定 中藥飲片由成都軍區(qū)解放軍昆明總醫(yī)院附屬中醫(yī)醫(yī)院中藥房提供。主要由黃芪、太子參、生地、玄參、石膏、知母、桔梗、黃連、菟絲子、山茱萸、丹參、土鱉蟲(chóng)、仙鶴草、桑白皮、甘草等藥物組成。將中藥飲片加5倍量水浸泡0.5 h，煎煮3次，每次5倍量水煎煮30 min，合并3次煎液為黃地吉仙湯原液，再參照《實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)》進(jìn)行濃縮，濃縮至實(shí)驗(yàn)所需的不同濃度的觀察劑量，分別為低、中、高劑量的黃地吉仙湯藥液。參照《實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)》［16］，利用體質(zhì)量換算法，將實(shí)驗(yàn)用藥的劑量換算成大鼠的服用劑量，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察。體質(zhì)量換算法：已知A種動(dòng)物（60 kg成人）1 kg體質(zhì)量用藥劑量，欲估算B種動(dòng)物（200 g大鼠）1 kg體質(zhì)量用藥劑量時(shí)，可查表找出折算系數(shù)W（W=6.25），再按照公式計(jì)算即可。計(jì)算公式：B種動(dòng)物的用藥劑量（mg/kg）=W×A種動(dòng)物的用藥劑量（mg/kg）。（用藥比例：成人單劑黃地吉仙湯生藥總量為366 g，每日量為183 g，按照成人標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量60 kg計(jì)算，每人每日量為生藥3.05 g/（kg·d）。再按照體質(zhì)量換算法，大鼠1 kg體質(zhì)量用藥劑量為成人的6.25倍，即為生藥19.06 g/（kg·d），約為生藥19 g/（kg·d）。低劑量：大鼠每日正常劑量的50%，即生藥9.5 g/（kg·d）。中劑量：大鼠每日正常劑量，即生藥19g/（kg·d）。高劑量：大鼠每日正常劑量的2倍，即生藥38 g/（kg·d）。

1.2.2 二甲雙胍片藥液制備及給藥劑量設(shè)定 每片250 mg，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H11020541。灌胃前將二甲雙胍片用雙蒸水配制成25g/L的懸濁液待用。成人每日二甲雙胍的常用劑量為500～2 000 mg，按照成人標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量60kg計(jì)算，每人每日量為8.33～33.3mg/（kg·d），換算成大鼠每日量為51.4～205.5 mg/（kg·d）。經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定劑量為200 mg/（kg·d）。

1.3 動(dòng)物模型的建立及分組給藥 本實(shí)驗(yàn)在成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心完成。普通飼料：由昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。高脂高糖飼料：由昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心按照配方制備，配方為：動(dòng)物脂肪15%、蔗糖20%、蛋黃粉5%、普通飼料60%。將60只SD大鼠以普通飼料喂養(yǎng)1周，1周后采取隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)抽取10只大鼠作為空白對(duì)照組，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程均以普通飼料喂養(yǎng)。其余50只大鼠改為高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周后，禁食不禁水12h，用電子天平給大鼠稱重，稱重后按30 mg/kg劑量一次性腹腔注射鏈脲菌素（STZ）。注射后開(kāi)始觀察并記錄其飲水量、攝食量、大便量、尿量、體質(zhì)量、活動(dòng)、死亡等變化，3 d后尾靜脈取血，血糖儀測(cè)定隨機(jī)血糖，凡隨機(jī)血糖≥16.7 mmol/L為造模成功者，不成功者給予STZ 10～20 mg/kg進(jìn)行二次造模。造模期間，除空白對(duì)照組10只大鼠外，其余大鼠每日給予2次驅(qū)趕和驚嚇，造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物精神緊張狀態(tài)。

將造模成功的50只糖尿病大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行第2次隨機(jī)分組，分為模型組、西藥治療組、中藥治療低、中、高劑量組，每組10只，共50只。空白對(duì)照組不予任何處理，模型組給予灌服蒸餾水［5 mL/（kg·d）］，中藥治療低、中、高劑量組分別灌服低、中、高劑量的中藥黃地吉仙湯，西藥治療組灌服確定劑量的二甲雙胍片配制液。成模次日即開(kāi)始給藥，連續(xù)觀察8周。治療期間均以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.4.1 一般情況觀察 對(duì)各組大鼠的飲水量、攝食量、尿量、大便量、精神狀態(tài)、毛發(fā)、行為活動(dòng)等進(jìn)行觀察。

1.4.2 體質(zhì)量 分別于給藥前、給藥后2、4、6周及實(shí)驗(yàn)結(jié)束前對(duì)大鼠進(jìn)行稱重，觀察大鼠的體質(zhì)量變化情況。

1.4.3 血糖測(cè)定 分別在給藥前后采用尾尖采血法測(cè)微量血糖。采血前禁食不禁水8 h，固定好大鼠，用碘酒及乙醇棉球?qū)⑽膊肯静⒉粮珊?，取采血針刺穿尾靜脈，然后從尾根向尾尖部按摩擠壓，使血從尾尖流出，滴于已準(zhǔn)備好的血糖試紙條上，即可測(cè)定。

1.4.4 HbA1c檢測(cè) 給藥8周后從心臟處取血，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)HbA1c，并進(jìn)行組間比較。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，各組間觀察指標(biāo)計(jì)量資料采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間差異比較若方差齊采用LSD法，若方差不齊采用Dunnett's T3法，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察 在給藥治療期間，空白對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)良好，活動(dòng)自如，反應(yīng)靈敏，毛發(fā)光澤，無(wú)三多一少癥狀，飲水、進(jìn)食及大小便正常。模型組大鼠一般情況較差，精神萎靡，動(dòng)作遲緩，拱背蜷臥，反應(yīng)遲鈍，毛發(fā)稀少欠光澤，三多一少癥狀明顯。西藥治療組、中藥高、中、低劑量組大鼠經(jīng)給藥治療后，一般情況均有不同程度的改善。在實(shí)驗(yàn)期間，模型組有3只大鼠死亡，西藥治療組與中藥高、中、低劑量組各有2只大鼠死亡，其死亡原因可能與灌胃誤傷肺臟、感染導(dǎo)致血糖升高等有關(guān)。

2.2 對(duì)體質(zhì)量的影響 給藥前6組大鼠的體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給藥8周后，6組大鼠的體質(zhì)量之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中，空白對(duì)照組與其余5組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）；除空白對(duì)照組外，中藥高劑量組與其他4組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；模型組與中藥高、中劑量組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01），與西藥治療組、中藥低劑量組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 治療前后各組大鼠體質(zhì)量比較（±s） g

表1 治療前后各組大鼠體質(zhì)量比較（±s） g

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與中藥高劑量組比較，△P＜0.05。

組別 n 給藥前 給藥后空白對(duì)照組 10 343.30±24.90 495.00±13.38模型組 7 330.38±48.20 262.43±58.37**西藥治療組 8 338.75±26.01 308.38±38.79*△中藥高劑量組 8 346.00±48.47 349.75±41.47*##中藥中劑量組 8 331.63±38.37 298.75±38.66*#△中藥低劑量組 8 350.38±38.45 264.88±43.17**△

2.3 對(duì)血糖的影響 喂藥前，空白對(duì)照組大鼠的血糖與其余5組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），其余5組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。喂藥8周后，空白對(duì)照組與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；模型組與中藥低劑量組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與其余3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；西藥治療組與中藥高、中劑量組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與其余組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。通過(guò)對(duì)6組大鼠的血糖進(jìn)行比較，可以看出黃地吉仙湯與二甲雙胍片均具有降低血糖的作用，但是中藥高、中、低劑量組的療效不同，隨著中藥濃度的降低，降糖效果也相應(yīng)的降低，即中藥高劑量組的降糖療效最好，而中藥低劑量組的療效甚微，因此可以說(shuō)明中藥降糖的療效與藥物濃度有關(guān)，受量效關(guān)系的影響。

表2 治療前后各組大鼠血糖比較（±s）mmol/L

表2 治療前后各組大鼠血糖比較（±s）mmol/L

注：與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別 n 給藥前血糖 治藥后血糖空白對(duì)照組 10 4.70±0.67 4.91±0.50模型組 7 24.55±5.60** 24.31±7.71**西藥治療組 8 25.68±4.27** 9.89±2.66##中藥高劑量組 8 24.88±4.04** 9.75±3.84##中藥中劑量組 8 24.52±6.66** 12.57±3.51*#中藥低劑量組 8 24.68±3.86** 20.50±9.40**

2.4 對(duì)HbA1c的影響 通過(guò)對(duì)6組大鼠的HbA1c比較說(shuō)明黃地吉仙湯與二甲雙胍片均具有顯著降低HbA1c的作用，而且經(jīng)治療后，中藥高劑量組大鼠的HbA1c已接近正常水平，但是中藥高、中、低劑量組的療效不同，隨著中藥濃度的降低，降低HbA1c的效果也相應(yīng)減退，即中藥高劑量組的療效最好，而中藥低劑量組的療效甚微，因此可以說(shuō)明中藥降低HbA1c的療效受量效關(guān)系的影響，與藥物濃度有關(guān)，需要達(dá)到一定濃度才能發(fā)揮最佳治療效果，見(jiàn)表3。

表3 治療后各組大鼠HbA1c比較（±s） %

表3 治療后各組大鼠HbA1c比較（±s） %

組別 n 治療后HbA1c空白對(duì)照組 10 4.986±0.542模型組 7 9.162±1.254西藥治療組 8 6.346±1.529中藥高劑量組 8 6.063±1.363中藥中劑量組 8 8.585±1.478中藥低劑量組 8 9.337±1.393

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用高脂高糖飼料加小劑量（30 mg/kg）腹腔注射STZ與精神緊張法誘發(fā)2型糖尿病大鼠模型。造模方法科學(xué)、新穎，造模一次成功率達(dá)90%。STZ是一種氨基葡萄糖-亞硝基脲，對(duì)胰腺β細(xì)胞具有選擇性毒性作用，可直接殺傷β細(xì)胞，從而引起胰島素合成、分泌減少，胰島功能受損，導(dǎo)致糖代謝紊亂，誘發(fā)糖尿病。該實(shí)驗(yàn)選擇高脂高糖飼料喂養(yǎng)配合小劑量注射STZ造模的方法，即先給予大鼠高脂高糖飲食，通過(guò)高脂高糖毒性作用，引起大鼠胰島素抵抗，繼而通過(guò)注射小劑量STZ造成部分β細(xì)胞破壞，引起胰島素分泌缺陷，成模大鼠即為2型糖尿病大鼠，STZ對(duì)于大鼠的影響僅局限于胰腺組織，6 h即可排出體外，故STZ一般不會(huì)直接損害其他臟器組織。情志因素是糖尿病形成與發(fā)展過(guò)程中不可忽視的因素，故該實(shí)驗(yàn)在傳統(tǒng)藥物造模的基礎(chǔ)上又加入精神緊張法，造成大鼠精神緊張狀態(tài)，更易于誘導(dǎo)2型糖尿病模型，而精神緊張法也可謂該實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)模型的創(chuàng)新之處。

黃地吉仙湯是寧亞功教授憑借30余年臨床經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出補(bǔ)瀉同施、調(diào)節(jié)平衡法治療糖尿病的經(jīng)驗(yàn)方。該方以益氣養(yǎng)陰、補(bǔ)腎健脾、潤(rùn)肺清胃、化瘀通絡(luò)為主，補(bǔ)瀉同施、寒溫并用，整體調(diào)節(jié)、標(biāo)本兼治。在前期的臨床研究中發(fā)現(xiàn)黃地吉仙湯對(duì)初發(fā)2型糖尿病患者的FBG、HbA1c都具有顯著減低作用。本課題通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究證實(shí)“補(bǔ)瀉同施、調(diào)節(jié)平衡”法指導(dǎo)組方之經(jīng)驗(yàn)方黃地吉仙湯可以明顯改善糖尿病大鼠的一般情況，對(duì)糖尿病大鼠的體質(zhì)量減輕具有緩解作用，可以起到緩解“三多一少”癥狀的作用。黃地吉仙湯與二甲雙胍片均具有明顯降低血糖和HbA1c的作用，HbA1c能夠反映過(guò)去2～3個(gè)月血糖控制的平均水平，不受偶爾一次血糖升高或降低的影響，因此HbA1c更能說(shuō)明血糖控制情況。同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)黃地吉仙湯治療組存在明顯的量效關(guān)系，高劑量組降低血糖及HbA1c的療效幾乎與西藥對(duì)照組等效，而且穩(wěn)定性較好，這為臨床單純應(yīng)用中藥治療糖尿病及黃地吉仙湯有效劑量的把握提供了寶貴的參考資料。

［1］宋 瑋.糖尿病的治療藥物與進(jìn)展［J］.天津藥學(xué)，2011，23（2）：68-71.

［2］張 健，楊 青，張進(jìn)安，等.糖化血紅蛋白在高危人群診斷2型糖尿病中的價(jià)值［J］.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，31（4）：512-514.

［3］Calisti L，Tognetti S.Measure of glycosy lated hemoglobin［J］.Acta Biomed，2005，76（Suppl 3）：59-62.

［4］賈俊梅.HbAlc檢測(cè)與糖尿病及其并發(fā)癥的關(guān)系［J］.繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2010，32（1）：43-45.

［5］Association AD.Standards of medical care for patients with diabetes mdllitus［J］.Diabetes Care，2003，26：33-50.

Experiment study of Huangdi Jixian decoction on FBG and HbA1c in type 2 diabetes

YANG Li-na，LUO Zhi-hong，LUAN Xiao-wen，NING Yu-qing，LI Fu-qiang，NING Ya-gong
（The Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of Kunming General Hospital of Chengdu Military Command，Kunming 650032，China）

R587.1

A

1673-9043（2016）01-0023-04

10.11656/j.issn.1673-9043.2016.01.07

全軍中醫(yī)藥重大專項(xiàng)課題資助項(xiàng)目（10ZY119）。

楊麗娜（1987-），女，碩士，中醫(yī)醫(yī)師，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)藥治療糖尿病的臨床和實(shí)驗(yàn)研究。

寧亞功，E-mail：kmnyg@126.com。

（2015-09-23）