• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    霉菌利用纖維質(zhì)原料產(chǎn)乙醇的研究進展

    2016-09-12 03:45:44崔田田張寶善馮亞運王金丹
    食品工業(yè)科技 2016年1期
    關(guān)鍵詞:木糖霉菌菌種

    崔田田,張寶善,馮亞運,王金丹,林 敏

    (陜西師范大學食品工程與營養(yǎng)科學學院,陜西西安 710119)

    ?

    霉菌利用纖維質(zhì)原料產(chǎn)乙醇的研究進展

    崔田田,張寶善*,馮亞運,王金丹,林敏

    (陜西師范大學食品工程與營養(yǎng)科學學院,陜西西安 710119)

    利用霉菌發(fā)酵纖維質(zhì)原料生產(chǎn)乙醇技術(shù)越來越受到人們的廣泛關(guān)注。本文列出了具有潛在產(chǎn)乙醇能力的霉菌種類,介紹了有關(guān)霉菌代謝糖類物質(zhì)的機理及霉菌產(chǎn)乙醇的特點,同時指出不同因素對霉菌發(fā)酵產(chǎn)乙醇的影響,這對探索霉菌利用纖維質(zhì)原料制備乙醇新方法具有一定的指導意義。

    纖維質(zhì)原料,霉菌,乙醇

    當前,能源危機已成為世界問題,利用微生物生產(chǎn)燃料酒精等生物能源被認為是解決能源問題的最有效、最能實現(xiàn)的方法之一。現(xiàn)在燃料酒精生產(chǎn)大多以糖類或淀粉質(zhì)原料為原料,但產(chǎn)量受到糧食資源的限制,難以長期滿足能源需求。人們在尋找新型原料時發(fā)現(xiàn)纖維質(zhì)是一種良好的可再生替代源[1],部分微生物可利用纖維質(zhì)發(fā)酵生產(chǎn)酒精和其他清潔燃料,如金花等人對Mucor indicus利用麥稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇進行了研究,結(jié)果表明M.indicus較釀酒酵母的顯著優(yōu)勢在于不僅能利用秸稈水解液中的葡萄糖,而且也能利用其中的木糖產(chǎn)生乙醇[2]。纖維質(zhì)原料主要包括農(nóng)作物秸稈、林業(yè)加工廢料、甘蔗渣及城市垃圾中所含的廢棄生物質(zhì)等[3]。一直以來,酵母被認為是生產(chǎn)乙醇的常用菌種,但酵母菌不能將纖維質(zhì)原料水解成木糖,并將其轉(zhuǎn)化為酒精,限制了其在纖維素乙醇領(lǐng)域的利用。細菌也能進行酒精發(fā)酵,但它們在產(chǎn)乙醇的同時還會產(chǎn)生副產(chǎn)物,致使乙醇的轉(zhuǎn)化率較低,經(jīng)濟成本很高[4]。霉菌屬微生物利用纖維質(zhì)原料也能產(chǎn)酒精,但很少受到關(guān)注,這是因為霉菌在傳統(tǒng)上被認為是好氧菌屬,需在有氧條件下生長,而酒精發(fā)酵是厭氧過程[5]。其中選用合適的菌種發(fā)酵纖維素生產(chǎn)酒精對工業(yè)化應(yīng)用極為重要[6]?,F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)部分霉菌具有直接把纖維素轉(zhuǎn)化為乙醇的能力,這就為我們在同一個生物反應(yīng)器中,利用同一種微生物完成酶水解纖維質(zhì)原料成多糖并發(fā)酵成酒精的全過程,從而為簡化工藝、降低成本提供了可能[7]。

    本文綜述了霉菌利用纖維素原料轉(zhuǎn)化為酒精的研究進展,列舉了幾種具潛在發(fā)酵酒精能力的霉菌種類,介紹了霉菌發(fā)酵糖類物質(zhì)的機理、霉菌產(chǎn)酒精的特點以及影響其酒精發(fā)酵的因素,同時提出了目前霉菌產(chǎn)酒精存在的問題,并對其未來的應(yīng)用進行了展望。

    1 產(chǎn)酒精的霉菌種類

    霉菌一般可在較高溫度下生存,且其產(chǎn)酒精經(jīng)常伴隨著有氧菌絲生長及無氧發(fā)酵兩個階段,且霉菌可利用多種糖類物質(zhì)尤其是酵母所不能利用的戊糖類,部分霉菌可將纖維素類物質(zhì)直接轉(zhuǎn)化為酒精。有報道能產(chǎn)乙醇的霉菌包括尖鐮孢菌(Fusarium)、根霉屬(Rhizopus)、毛霉屬(Mucor)、粗糙脈孢菌(Neurospora)、念珠菌屬(Monilia)、擬青霉屬(Paecilomyces)、和曲霉屬(Aspergillus)等。

    表1 產(chǎn)乙醇霉菌種類及其特點

    Lubbehusen等人研究了Mucorcircinelloides采用液態(tài)深層分批發(fā)酵方式,利用多種碳源產(chǎn)酒精的情況,結(jié)果表明M.circinelloides在不限氧條件下可利用葡萄糖產(chǎn)生酒精,而其轉(zhuǎn)化半乳糖及木糖產(chǎn)酒精能力相對較弱[8]。Goshadrou等人采用Mucorhiemalis作為發(fā)酵菌種對不同預(yù)處理的甘蔗渣進行發(fā)酵,其中利用堿液輔助超聲破碎法處理后的甘蔗渣水解物M.hiemalis具有較高的酒精轉(zhuǎn)化率,發(fā)酵24h酒精產(chǎn)率達到0.70g/L(h[9]。美國人Stevenson在農(nóng)場的奶牛尿中分離出一株菌,在厭氧的條件培養(yǎng),能直接將纖維素發(fā)酵成酒精,產(chǎn)量為0.4g/L,經(jīng)鑒定此菌株為木霉[17]。張志華對N.crassa AS3.1602好氧產(chǎn)酶和厭氧直接發(fā)酵產(chǎn)生酒精的過程進行了代謝分析,以20g/L的微晶纖維素為碳源進行產(chǎn)酶培養(yǎng),好氧發(fā)酵3d時菌體處于穩(wěn)定期,所產(chǎn)生的酶活性都處于較高水平。厭氧條件下直接轉(zhuǎn)化20g/L的微晶纖維素,發(fā)酵96h時酒精濃度可達到6.3g/L[18]。Gong等人發(fā)現(xiàn)Monilia sp.能夠?qū)⒏哂?0%的濾渣和60%的微晶纖維素轉(zhuǎn)化為酒精,并且乙醇產(chǎn)量分別達到16、12g/L[21]。研究表明Monilia sp.還可以利用半纖維素及果膠,由于農(nóng)業(yè)殘渣的主要成分是半纖維素因而提高了該菌種工業(yè)化應(yīng)用的潛在能力。表1列出了可以產(chǎn)乙醇的霉菌種類及其特點。

    2 霉菌轉(zhuǎn)化纖維質(zhì)產(chǎn)乙醇的機理

    霉菌可利用纖維質(zhì)降解的糖類物質(zhì)如葡萄糖、木糖、阿拉伯糖等生產(chǎn)乙醇。到目前為止,關(guān)于霉菌直接將纖維素轉(zhuǎn)化為酒精的報道很少,而F.oxysporum[10]和N.crassa[18]被發(fā)現(xiàn)具有將水解和酒精轉(zhuǎn)化過程同時進行的能力。

    利用微生物轉(zhuǎn)化纖維質(zhì)原料產(chǎn)乙醇的步驟有兩步[6]:纖維素水解成可發(fā)酵性糖,微生物將可發(fā)酵性糖轉(zhuǎn)化為酒精。有關(guān)微生物代謝葡萄糖產(chǎn)生酒精的機制已經(jīng)很清楚,霉菌和酵母菌是通過EMP途徑將葡萄糖轉(zhuǎn)化為酒精。EMP途徑大致可分為兩個階段:第一階段只是生成兩分子的主要中間代謝產(chǎn)物3-磷酸-甘油醛;第二階段發(fā)生氧化還原反應(yīng),釋放能量合成ATP,同時形成兩分子的丙酮酸。理論上1g葡萄糖可產(chǎn)生0.51g乙醇和0.49g CO2,乙醇及CO2產(chǎn)生實際值分別為0.46、0.44g,因為有0.1g的葡萄糖轉(zhuǎn)化為生物質(zhì)。盡管微生物自身代謝機制可以促進葡萄糖進入細胞,但糖代謝過程影響因素很復雜,目前還沒完全被大家所熟知。在酵母屬中發(fā)現(xiàn)兩條主要的抑制葡萄糖代謝因素包括巴斯德效應(yīng)及葡萄糖效應(yīng)。

    對于利用木糖代謝,第一步要將木糖轉(zhuǎn)化為木酮糖,細菌可直接利用木糖異構(gòu)酶將木糖轉(zhuǎn)化為木酮糖,而對于擬青霉屬,在戊糖代謝初始階段中會檢測到一系列的酶,這些酶常見于酵母屬和霉菌屬。在該氧化還原途徑中,木糖首先在NAD(P)作為輔酶的木糖還原酶作用下變?yōu)槟咎谴?接著在木糖醇脫氫酶作用下重新氧化成木酮糖[22]。該氧化還原途徑已被證明存在于大多數(shù)常見的霉菌中,本過程中涉及到的木糖還原酶及木糖醇脫氫酶具有可誘導性,并且專一作用于D-木糖及木糖醇,但細菌中的木糖異構(gòu)酶不具有可誘導性。在木糖轉(zhuǎn)化為木酮糖后,由D-木酮糖磷酸化生成D-木酮糖-5-磷酸,之后進入磷酸戊糖途徑,以中間產(chǎn)物葡萄糖-6-磷酸和甘油醛-3-磷酸進入EMP途徑,最終在厭氧條件下生成乙醇,如圖1。戊糖代謝途徑遠比己糖代謝復雜,這也是霉菌利用戊糖產(chǎn)酒精較己糖低的原因。

    圖1 霉菌利用單糖代謝途徑Fig.1 Pathway for monosaccharide catabolismin filamentous fungi

    3 霉菌發(fā)酵產(chǎn)乙醇的特點

    3.1同步糖化和生物轉(zhuǎn)化

    纖維質(zhì)經(jīng)微生物轉(zhuǎn)化為乙醇的傳統(tǒng)工藝主要包括兩步:首先在酶解糖化作用下將多糖降解為單糖;其次將單糖轉(zhuǎn)化為乙醇。為了提高工業(yè)效率,有研究者采用不同的纖維素酶產(chǎn)生菌與酒精發(fā)酵菌種共同培養(yǎng),使酶解與產(chǎn)酒精過程在同一反應(yīng)器中進行。采用同步糖化發(fā)酵法可以緩解終產(chǎn)物抑制作用,因為水解后產(chǎn)生的葡萄糖在該系統(tǒng)中可以很快轉(zhuǎn)化為乙醇。

    F.oxysporum因其具有產(chǎn)多糖酶及發(fā)酵糖類物質(zhì)產(chǎn)酒精能力而使它成為同步糖化與生物轉(zhuǎn)化的理想菌種。Panagiotou等人將F.oxysporumF3置于30℃,pH6的培養(yǎng)液中孵育72h,該階段為菌種的生長產(chǎn)酶期,通過調(diào)節(jié)攪拌速率將氧濃度控制在30%;之后將菌種接入濃度為20g/L的纖維素漿液中進行厭氧發(fā)酵。結(jié)果表明F.oxysporumF3在纖維素基質(zhì)中最大比生長速率達到0.023h-1,且產(chǎn)內(nèi)切葡聚糖酶、β-葡聚糖酶及纖維二糖酶活性分別為55、1.25、0.43U/mL,其發(fā)酵纖維素生成乙醇得率為0.35g/g[23]。近年來,Zerva等人實驗證明Paecilomycesvariotii可將葡萄糖、木糖轉(zhuǎn)化為乙醇,即使在有葡萄糖存在時仍優(yōu)先利用木糖,該菌種不僅能產(chǎn)生可降解纖維素的酶,并能將水解底物轉(zhuǎn)化為乙醇,且最大乙醇產(chǎn)量接近理論值[24]。

    表2 不同種類真菌產(chǎn)纖維素酶及木聚糖酶活性的比較[18]

    3.2直接生物轉(zhuǎn)化纖維素原料

    霉菌直接將纖維素原料生物轉(zhuǎn)化是一項極具潛力的產(chǎn)乙醇方法,原因在于僅利用單一菌種即可將基質(zhì)的有氧水解和半?yún)捬鯒l件下的乙醇發(fā)酵過程同時進行,既可產(chǎn)生水解酶又能進行酒精發(fā)酵。

    3.2.1多糖酶的產(chǎn)生纖維素酶是一種多組分的復合酶,現(xiàn)已確定纖維素酶含有3種主要組分,即內(nèi)切葡萄糖苷酶(EC3.2.1.4)、外切葡萄糖苷酶(EC3.2.1.91)和纖維二糖酶(EC3.2.1.21)。在纖維素水解過程中首先由內(nèi)切葡萄糖苷酶在纖維素鏈內(nèi)部水解,降低其聚合度,然后由外切葡萄糖苷酶作用于非還原性末端釋放出纖維二糖;最后由纖維二糖酶將纖維二糖水解為葡萄糖。有多種微生物能夠產(chǎn)生纖維素酶,例如細菌、放線菌、絲狀真菌、粘細菌、擔子菌和其他高等形式軟體動物等。研究發(fā)現(xiàn),某些微生物可以合成纖維素酶,但無法將水解得到的糖轉(zhuǎn)化為酒精。而某些微生物可將蔗糖轉(zhuǎn)化為酒精,但卻不能合成能夠水解纖維素的多糖酶。只有極少一部分絲狀真菌既能水解多糖又可以將水解產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為酒精,如表2所示。

    Gong等人從甘蔗渣中分離的Moniliasp.可以利用多糖包括纖維素產(chǎn)生酒精,并產(chǎn)生纖維素酶及木聚糖酶。在菌種培育48h后可以檢測到纖維素酶的活性,當纖維素作為發(fā)酵基質(zhì)時,可以檢測到纖維素酶和木聚糖酶的活性[21]。有研究發(fā)現(xiàn)鏈霉菌屬(Streptomyces)在木聚糖作為碳源時也可以產(chǎn)生木聚糖酶,但木聚糖不是它們產(chǎn)生木聚糖酶所必需的,因為在純纖維素或葡萄糖作為碳源時檢測到高活性的木聚糖酶[25]。在同步發(fā)酵中,酒精對纖維素酶產(chǎn)生非競爭性抑制,而產(chǎn)酒精霉菌所產(chǎn)生的纖維素酶在整個生物轉(zhuǎn)化過程中都保持其穩(wěn)定性。

    3.2.2乙醇的轉(zhuǎn)化由于纖維素直接發(fā)酵法生產(chǎn)乙醇具有工藝簡單,歷時短,有望大幅度降低產(chǎn)酶成本以及纖維素乙醇生產(chǎn)總成本,近二十年來該項技術(shù)研究受到了國內(nèi)外學者的廣泛重視,有研究者報道了以嗜溫細菌(Clostridiumthermocellum)和C.thermohydrosulfuricum以及絲狀真菌N.crassa,Moniliasp.和F.oxysporum進行纖維素直接發(fā)酵生產(chǎn)乙醇[26]。

    4 影響霉菌產(chǎn)乙醇的因素

    4.1通氣量

    研究發(fā)現(xiàn)大部分霉菌在有氧情況下生長,在半?yún)捬鯛顟B(tài)下產(chǎn)乙醇。通氣量對霉菌利用基質(zhì)中的碳源及最終乙醇的轉(zhuǎn)化量具有重要影響,乙醇積累只發(fā)生在低氧條件下。在缺氧情況下,霉菌生長受到限制,隨著氧氣的限制量增加,乙醇的積累量表明氧氣利用率是決定乙醇產(chǎn)量的一個重要因素。隨著氧氣限制的增加,菌體生長能力減弱,而乙醇產(chǎn)量逐漸增加。

    Dogaris等人研究發(fā)現(xiàn)N.crassa產(chǎn)乙醇的兩個階段為:有氧生長階段,粗糙脈孢菌在有氧條件下生長,逐漸產(chǎn)生纖維素酶及半纖維素酶;厭氧發(fā)酵階段,將菌種由生長瓶轉(zhuǎn)移至特制錐形瓶中,該瓶頂部裝有針孔橡膠塞以降低氧氣的滲入同時排出CO2,該裝置同樣適用于F.oxysporum[27]。Lubbehusen等人研究發(fā)現(xiàn)卷枝毛霉不僅可以在完全厭氧條件下生長,并且能夠在葡萄糖過量時有氧條件下產(chǎn)生乙醇[28];Kurakov等人從不同地區(qū)篩選出多株霉菌在厭氧條件下利用葡萄糖發(fā)酵生產(chǎn)酒精,其最大生產(chǎn)量達到2.5%~4.7%,幾乎接近于酵母屬發(fā)酵生產(chǎn)酒精量[29]。Karimi等人發(fā)現(xiàn)在基質(zhì)葡萄糖濃度高于30g/L無氧條件下培養(yǎng)有助于提高M.indicus產(chǎn)生酒精量[30],另外由于M.indicus具有形態(tài)二相性,孢子濃度的大小以及所處環(huán)境中氧氣的含量都會對該菌形態(tài)產(chǎn)生一定的影響[31]。

    Rasika等人研究白腐菌Trametes versicolor在完全缺氧及低氧含量兩種條件下利用木糖與己糖混合物發(fā)酵產(chǎn)乙醇,結(jié)果表明T.versicolor低氧條件下發(fā)酵354h后酒精轉(zhuǎn)化率達到最大20g/L,而完全厭氧條件下未檢測到乙醇的產(chǎn)生[32]。Xiros和Christakopoulos以樹膠醛糖∶木糖∶葡萄糖(1∶2∶1)混合糖作為發(fā)酵基質(zhì),在通氣率分別為0、0.1、0.2及0.4vvm時觀察F. oxysporum利用混合糖產(chǎn)乙醇的情況。結(jié)果顯示在所有通氣條件下,乙醇產(chǎn)量72h時達到最大,而在完全厭氧條件下乙醇轉(zhuǎn)化較慢,120h后乙醇量才達到最大值;當通氣率為0.1、0.2 vvm,發(fā)酵72h后基質(zhì)中檢測不到木糖,而在完全缺氧條件下F. oxysporum對木糖的吸收較慢,這說明少量通氣對F. oxysporum利用木糖發(fā)酵產(chǎn)乙醇是極為必要的[33]。由此可見通氣量是影響霉菌生物轉(zhuǎn)化乙醇的一個重要因素,通過調(diào)節(jié)氣體比例可獲得較高產(chǎn)量的乙醇。

    4.2碳源

    到目前為止,生產(chǎn)乙醇主要采用傳統(tǒng)的釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae),然而Saccharomycescerevisiae并不能很好的適用于木質(zhì)纖維原料的發(fā)酵,它只能發(fā)酵葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖,不能轉(zhuǎn)化半纖維素中的戊糖。由于在木質(zhì)纖維素原料中存在大量的半纖維素,所以這一點限制了酵母菌的應(yīng)用[1]。

    研究發(fā)現(xiàn)部分霉菌可產(chǎn)生降解纖維素酶,并將水解產(chǎn)物中的所有糖類物質(zhì)轉(zhuǎn)化為乙醇。N.crassa是一種能夠利用多種碳源包括纖維素、木糖、樹膠醛糖、甘露糖、半乳糖以及葡萄糖生產(chǎn)酒精的霉菌,該菌種現(xiàn)以被廣泛應(yīng)用于基因?qū)W、生物化學以及分子生物學[34]。Dogaris等人采用經(jīng)稀酸前處理的甘蔗渣,分別以N.crassa、S.cerevisiae以及二者混合菌種作為發(fā)酵菌,結(jié)果表明N.crassa乙醇轉(zhuǎn)化能力高于S.cerevisiae,混合菌種發(fā)酵反而降低了乙醇產(chǎn)量[27]。另外,Paecilomycessp.NF1也可以利用多種糖作為碳源產(chǎn)生乙醇,Zhang等人通過研究發(fā)現(xiàn)P.chrysosporium是目前利用木糖產(chǎn)生乙醇量最大的菌種,產(chǎn)酒精量可高達73g·L-1/200g·L-1木糖,且只產(chǎn)生痕量的其他副產(chǎn)物[35]。

    Sharifia采用M.indicus作為發(fā)酵菌種,分別利用不同的糖類物質(zhì)作為碳源,結(jié)果表明M.indicus可以利用糖漿中的葡萄糖、果糖產(chǎn)生乙醇,而不能直接利用蔗糖發(fā)酵產(chǎn)生酒精[14]。Millati 等人對Rhizopus,Rhizomucor,及Mucor分別利用葡萄糖、木糖和稀酸水解物作為碳源進行乙醇發(fā)酵,結(jié)果表明其中兩株毛霉M.hiemalis和M.indicus產(chǎn)酒精量較高,其他菌種代謝除產(chǎn)生乙醇外,還會產(chǎn)生乳酸、丙三醇等副產(chǎn)物[36]。Colabardini 等人將A.nidulans的木糖轉(zhuǎn)運蛋白基因?qū)虢湍笇龠M行表達,提高了酵母屬對戊糖的利用率[37]。Rasika等人用Trametesversicolor發(fā)酵木質(zhì)素降解的己糖和木糖,結(jié)果表明在以己糖和木糖單獨作為碳源時產(chǎn)酒精量分別為20.0、9.02g/L,當葡萄糖與木糖等比例時,總糖發(fā)酵產(chǎn)乙醇可達到80%[32]。

    4.3氮源

    有關(guān)氮元素對霉菌的生長及代謝的影響已經(jīng)為大家熟知,銨離子可以通過ATP抵消對磷酸果糖激酶的抑制作用,進而促進糖酵解,其還可以刺激微生物生長,降低細胞內(nèi)的NADH水平,阻遏6-磷酸葡萄糖脫氫酶,從而促進了磷酸戊糖途徑的進行。很多學者對一系列的有機氮和無機氮進行了研究,如表3所示,Asachi等人利用M.indicus的菌體自溶物代替酵母膏,結(jié)果顯示當添加菌體自溶物10g/L時,乙醇得率為0.47g/g,產(chǎn)率達到0.71g/L·h,相比于添加酵母膏的乙醇得率及產(chǎn)率分別為0.45、0.67g/L·h,乙醇產(chǎn)量明顯提高[33]。

    表3 霉菌生物轉(zhuǎn)化過程中利用的含氮化合物[39]

    Zerva和Savvides采用尿素、NaNO3、NH4NO3、(NH4)2HPO4、(NH4)2SO4、蛋白胨及酵母膏作為氮源,以Paecilomyces variotii為發(fā)酵菌種利用等濃度葡萄糖、木糖作為發(fā)酵基質(zhì),結(jié)果表明以硝態(tài)氮作為氮源產(chǎn)乙醇量明顯較高[16]。

    4.4礦物質(zhì)及維生素

    有關(guān)礦物質(zhì)及微量元素對微生物代謝物的生物合成影響早有報道,但對霉菌產(chǎn)酒精的影響鮮有研究。有研究發(fā)現(xiàn)微量元素如Fe、Zn、Cu和Mn可以促進Polyporusanceps的生長,而鈷在濃度為1~100mg/L時產(chǎn)生毒性,鉬對霉菌生長基本無影響。另外發(fā)現(xiàn),硫胺素對P.anceps的生長起著至關(guān)重要的作用,隨著基質(zhì)中硫胺素濃度的增加,菌絲的重量增加,同時葡萄糖消耗量及乙醇產(chǎn)生量也隨之增加[40]。Marzieh等人研究了磷酸鹽對M.indicus產(chǎn)酒精量的影響,在基質(zhì)中添加0.5g/L的KH2PO4,不僅提高了葡萄糖胺的產(chǎn)量,同時也增加了乙醇產(chǎn)量[41]。

    4.5接種期

    接種期是影響纖維質(zhì)轉(zhuǎn)化為乙醇的一個重要因素,研究發(fā)現(xiàn)將菌種在營養(yǎng)液中搖床培養(yǎng)一段時間后獲得菌體懸浮液接種至發(fā)酵基質(zhì),相比于直接從瓊脂斜面中獲得的菌體,前者所產(chǎn)生的乙醇量明顯較高。Goshadrou等人在研究M.hiemalis利用甘蔗渣發(fā)酵產(chǎn)乙醇情況時,前期要進行接種準備,主要包括在營養(yǎng)瓊脂上的活化以及在合適條件下進行搖床培養(yǎng)以獲得孢子懸浮液,之后接種至發(fā)酵基質(zhì)中進行發(fā)酵[9]。另外,接種量會通過改變生物過程的延遲期,進而影響發(fā)酵過程中的乙醇產(chǎn)量。Molaverdi等人研究了不同接種量對M.indicus固態(tài)發(fā)酵高粱秸稈產(chǎn)酒精的影響,當初始菌種濃度為0.001、1及5g/L對乙醇發(fā)酵的影響表現(xiàn)為隨著濃度的增加,乙醇產(chǎn)量也隨之增加[42]。Dogaris等人在利用N.crassa將高粱渣轉(zhuǎn)化乙醇實驗中,將菌種在有氧條件下培養(yǎng)48h后獲得高濃度孢子懸浮液,取一定量的孢子液接入高粱渣水解液中,結(jié)果表明隨接種量的增加,酒精產(chǎn)生量也增加[27]。

    4.6pH

    最初學者們選取霉菌發(fā)酵產(chǎn)酒精的pH一般為5.0~6.0,Xiros和Christakopoulos利用F.oxysporum產(chǎn)乙醇最適pH為5.5,而當pH為6.0時,會產(chǎn)生較多的乳酸[33];N.crassa產(chǎn)乙醇最適pH范圍在5~6之間,這也是纖維素酶作用的最適pH[28];Paecilomycessp. NF1發(fā)酵最適pH范圍較廣,當pH在2.2~7.0時,可產(chǎn)生相同量的乙醇[16];而對于F.oxysporumF3,pH對其酒精產(chǎn)量的影響,在有氧和無氧情況下,最適pH分別為5.5和6.0。有氧條件下,低pH會導致酒精產(chǎn)量下降,因而調(diào)整最初pH在最適條件下既有利于β-葡萄糖苷酶的活性又有利于乙醇的產(chǎn)生[23]。

    4.7溫度

    乙醇發(fā)酵溫度一般在25~37℃,如表4所示,研究發(fā)現(xiàn)不同菌種的最佳發(fā)酵溫度不一致。N.crassa利用葡萄糖發(fā)酵生產(chǎn)乙醇時的最適溫度為28~37℃,而其利用纖維質(zhì)原料發(fā)酵產(chǎn)乙醇時的最佳溫度為37℃,該溫度下90%的纖維素在4天后轉(zhuǎn)化為乙醇[28]。同樣,Paecilomycesp.發(fā)酵最適溫度范圍是30~37℃[16],而M.indicus發(fā)酵高粱秸桿產(chǎn)乙醇最適溫度為32℃[42]。

    表4 霉菌產(chǎn)乙醇的最適溫度及pH

    5 霉菌產(chǎn)乙醇存在問題及展望

    利用霉菌以纖維質(zhì)原料生產(chǎn)乙醇是緩解化工原料消耗的一種有效手段,具有成本低、生產(chǎn)設(shè)備簡單以及可再生性等優(yōu)點,對未來燃料酒精的生產(chǎn)發(fā)展具有無限潛力。但目前利用霉菌生產(chǎn)酒精仍未投入工業(yè)化生產(chǎn),原因在于該方法生產(chǎn)酒精仍存在一些問題:第一,纖維素生物質(zhì)中除了含有大量的纖維素外,還有大約20%~30%的半纖維素,而半纖維素水解成分組成中含有五碳糖(主要為木糖),霉菌利用木糖發(fā)酵酒精的效率仍相對較低。第二,半纖維素經(jīng)預(yù)處理和水解過程后還產(chǎn)生了小分子酸、醛類、酚類等發(fā)酵抑制劑,更加大了發(fā)酵難度。第三,所采用的同步糖化發(fā)酵法還存在一定的缺點,例如最佳的水解和最佳的發(fā)酵需要不同的溫度,最佳水解溫度為45~50℃,而最佳的發(fā)酵溫度為28~35℃。SSF常在35~38℃下操作,這一折中處理使酶的活性和發(fā)酵的效率都不能達到最大[44]。

    到目前為止,盡管還沒找到完全令人滿意的將纖維質(zhì)轉(zhuǎn)化為乙醇的菌種,但利用一些霉菌將纖維素、淀粉以及戊糖轉(zhuǎn)化為酒精仍給生產(chǎn)化工原料帶來了經(jīng)濟效益。此外,通過對比不同因素對霉菌發(fā)酵乙醇的影響可知,嚴格控制通氣量相較于其他因素對乙醇產(chǎn)量的影響顯著,因而需在進一步工業(yè)化生產(chǎn)乙醇產(chǎn)業(yè)中通過調(diào)節(jié)氣體比例以提高酒精產(chǎn)量。目前生產(chǎn)燃料酒精是以玉米為原料,但原料成本占總成本的70%~80%。纖維素是地球上最豐富、最廉價可再生資源,因此研究開發(fā)纖維素轉(zhuǎn)化技術(shù),將秸稈、蔗渣、廢紙、垃圾纖維等纖維素類物質(zhì)高效轉(zhuǎn)化為糖,進一步發(fā)酵成乙醇,對開發(fā)新能源,保護環(huán)境,具有非常重要現(xiàn)實意義。

    [1]陰春梅,劉忠,齊宏升.生物質(zhì)發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的研究進展[J]. 釀酒科技,2007(1):87-90.

    [2]金花,陸軍,李濤,等.麥稈水解液發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇的研究[J].釀酒科技,2007,162(12):25-27.

    [3]張寧,蔣劍春,等.木質(zhì)纖維生物質(zhì)同步糖化發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的研究進展[J].化工進展,2010,29(2):238-242

    [4]賈莉華.木質(zhì)纖維素生產(chǎn)乙醇的研究進展[J]. 林產(chǎn)工業(yè),2007,34(5):10-12.

    [5]Carmen Sánchez. Lignocellulosic residues:Biodegradation and bioconversion by fungi[J]. Biotechnology Advances,2009(27):185-194.

    [6]孫逸,賀稚非.纖維素發(fā)酵生產(chǎn)酒精的研究進展[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工,2009(4):70-73.

    [7]Nanda Sonil,Mohammad Javeed,Reddy S N,et al. Pathways of lignocellulosic biomass conversion to renewable fuels[J]. Biomass Conv Bioref,2014,4:157-191.

    [8]Lubbehusen T L,Nielsen J,McIntyre M. Aerobic and anaerobic ethanol production byMucorcircinelloidesduring submerged growth[J]. Appl Microbiol Biotechnol,2004(63):543-548.

    [9]Goshadroua Amir,Karimi Keikhosro,Taherzadeh M J. Bioethanol production from sweet sorghum bagasse byMucorhiemalis[J].Indstrial Crops and Products,2011,34:1219-1225.

    [10]Ruiz E,Romero I,Moya M,et al. Sugar fermentation byFusariumoxysporumto produce ethanol[J]. World J Microbiol Biotechnol 2007,23:259-267.

    [11]Wang Li-Sen,Ge Xiang-Yang,Zhang Wei-Guo. Improvement of ethanol yield from raw corn flour byRhizopussp.[J]. World J Microbiol Biotechnol,2007,23:461-465.

    [12]Thongchul N,Navankasattusas S,Yang Shang-Tian. Production of lactic acid and ethanol byRhizopusoryzaeintegrated with cassava pulp hydrolysis[J]. Bioprocess Biosyst Eng,2010,33:407-416.

    [13]Karimi Keikhosro,Emtiazi Giti,Taherzadeh M J. Ethanol production from dilute-acid pretreated rice straw by simultaneous saccharification and fermentation withMucorindicus,Rhizopusoryzae,andSaccharomycescerevisiae[J]. Enzyme and Microbial Technology,2006,40:138-144.

    [14]Sharifia Mahnaz,Karimi Keikhosro,Taherzadeh M J. Production of ethanol by filamentous and yeast-like forms ofMucorindicusfrom fructose,glucose,sucrose,and molasses[J]. J Ind Microbiol Biotechnol,2008,35:1253-1259.

    [15]Okamoto K,Uchii A,Kanawaku R,et al. Bioconversion of xylose,hexoses and biomass to ethanol by a new isolate of the white rot basidiomyceteTrametesversicolor[J]. SpringerPlus,2014,3:121.

    [16]Zerva A,Savvides AL,Katsifas EA,et al. Evaluation ofPaecilomycesvariotiipotential in bioethanol production from lignocellulose through consolidated bioprocessing[J].Bioresource Technology,2014,163:294-299.

    [17]Stevenson D M,Weimer P J. Isolation and characterization of aTrichodermastrain capable of fermenting cellulose to ethanol[J].Appl Microbiol Biotechnol,2002,59:721-726.

    [18]張志華. 粗糙脈孢菌AS3.1602乙醇發(fā)酵的代謝研究[D].山東:山東大學,2007.

    [19]Yang Siyoung,Choi Seung Jun,Kwak Jungki,et al.AspergillusoryzaeStrains Isolated from Traditional Korean Nuruk:Fermentation Properties and Influence on Rice Wine Quality[J]. Food Sci Biotechnol,2013,22(2):425-432.

    [20]Almeida M N,Guimar?es V M,Falkoski D L,et al. Optimization of Endoglucanase and Xylanase Activities fromFusariumverticillioidesfor Simultaneous Saccharification and Fermentation of Sugarcane Bagasse[J]. Appl Biochem Biotechnol,2014,172:1332-1346.

    [21]Gong CS,Mann CM,Tsao GT. Direct fermentation of cellulose to ethanol by a cellulolytic filamentous fungus,Moniliasp[J]. Biotechnol Lett,1981(3):77-82.

    [22]Jeffries T W. Utilization of Xylose by Bacteria,Yeasts,and Fungi.

    [23]Panagiotou G,Christakopoulos P,Olsson L. Simultaneous saccharification and fermentation of cellulose byFusariumoxysporumF3-growth characteristics and metabolite profiling[J]. Enzyme and Microbial Technology,2005,36:693-699.

    [24]Zerva A P,Stathopoulou P M,Katsifas E A,et al. The filamentous fungusPaecilomycesvariotiias a potential candidate for bioethanol production via consolidated bioprocessing of lignocellulosics[J]. New Biotechnology,2012,29:23-26.

    [25]Brito-Cunha C C Q,Campos I T N,Faria F P. Screening and Xylanase Production by Streptomyces sp. Grown on Lignocellulosic Wastes Appl Biochem Biotechnol,2013,170:598-608.

    [26]Balusu R,Paduru R M R,Seenayya G.,et al. Production of Ethanol From Cellulosic Biomass by Clostridium thermocellum SS19 in Submerged Fermentation[J]. Applied Biochemistry and Biotechnology,2004,117:133-141.

    [27]Dogaris Ioannis,Gkounta Olga,Mamma Diomi,et al. Bioconversion of dilute-acid pretreated sorghum bagasse to ethanol By Neurospora crassa[J]. Appl Microbiol Biotechnol,2012,95:541-550.

    [28]Lubbehusen TL,Nielsen J,McIntyre M. Aerobic and anaerobic ethanol production byMucorcircinelloidesduring submerged growth[J]. Appl Microbiol Biotechnol,2004(63):543-548.

    [29]Kurakov AV,Khidirov KS,Sadykova VS,et al. Anaerobic Growth Ability and Alcohol Fermentation Activity of Microscopic Fungi[J]. Prikladnaya Biokhimiya Mikrobiologiya,2011,47(2):187-193.

    [30]Karimi K,Zamani A.Mucorindicus:biology and industrial application perspectives:a review[J]. Biotechnology Advances,2013(31):466-481.

    [31]Patrik RL,Keikhosro K. Effects of different growth forms ofMucorindicuson cultivation on dilute-acid lignocellulosic hydrolyzate,inhibitor tolerance,and cell wall composition[J]. Journal of Biotechnology,2009(143):255-261.

    [32]Rasika L,Kudahettige,Marie Holmgren,et al. Characterization of bioethanol production from hexoses and xylose by the White Rot Fungus Trametes versicolor[J]. Bioenergy Res,2012(5):277-285.

    [33]Xiros Charilaos,Christakopoulos Paul. Enhanced ethanol production from brewer’s spent grain by a Fusarium oxysporum consolidated system[J]. Biotechnology for Biofuels,2009,2:1-12.

    [34]Dogaris Ioannis,Mamma Diomi,Kekos Dimitris. Biotechnological production of ethanol from renewable resources byNeurosporacrassa:an alternative to conventional yeast fermentations?[J]. Appl Microbiol Biotechnol,2013,97:1457-1473.

    [35]Zhang BS. Process for preparing fuel ethanol by using straw fiber materials. 2006,Patent CN1880416.

    [36]Millati R,Edebo L,Taherzadeh M J. Performance ofRhizopus,Rhizomucor,andMucorin ethanol production from glucose,xylose,and wood hydrolyzates[J]. Enzyme and Microbial Technology,2004(2-3):294-300.

    [37]Colabardini AC,Ries LNA,Brown NA. Functional characterization of a xylose transporter inAspergillusnidulans[J].Biotechnology for Biofuels,2014(7):46-50.

    [38]Asachi Reihaneh,Karimi Keikhosro,Taherzadeh M J. Fungal autolysate as a nutrient supplement for ethanol and chitosan production byMucorindicus[J]. Biotechnol Lett,2011,33:2405-2409.

    [39]Ajay Singh,P K R. Kumar,K Schiigerl. Bioconversion of Cellulosic Materials to Ethanol by Filamentous Fungi[J]. Advances in Biochemical Engineering,1992(45):30-52.

    [40]Volz P A,Beneke E S. Nutritional regulation of basidiocarp formation and mycelial growth of Agaricales[J]. Mycopathologia et mycologia applicata 1969,37(3):225-253.

    [41]Marzieh M,Akram Z,Keikhosro K. Effect of phosphate on glucosamine production by ethanolic fungusMucorindicus[J]. Appl Biochem Biotechnol,2013,171:1465-1472.

    [42]Molaverdia Maryam,Karimi Keikhosro,Khanahmadi Morteza,et al. Enhanced sweet sorghum stalk to ethanol by fungusMucorindicususing solid state fermentation followed by simultaneous saccharification and fermentation[J]. Industrial Crops and Products,2013,49:580-585.

    [43]Acourene S,Ammouche A. Optimization of ethanol,citric acid,α-amylase production from date wastes by strains ofSaccharomycescerevisiae,Aspergillusniger,andCandidaguilliermondii[J]. J Ind Microbiol Biotechnol,2012,39:759-766.

    [44]樂易林,邵蔚藍.纖維素乙醇高溫發(fā)酵的研究進展與展望[J].生物工程學報,2013,29(3):274-284.

    Advances in bioconversion of cellulosic materials to ethanol by moulds

    CUI Tian-tian,ZHANG Bao-shan*,FENG Ya-yun,WANG Jin-dan,LIN Min

    (College of Food Engineering and Nutritional Science,Shaanxi Normal University,Xi’an 710119,China)

    Ethanol production,using cellulosic materials by moulds,has been paid more and more attention. The recent development of the ethanol production from cellulosic materials has been reviewed,including the potential fungal strains,the carbohydrate metabolism in moulds,the characteristics of ethanol producing moulds and the factors affecting ethanol production,in this paper,which has a certain guiding significance for exploring a new method to produce ethanol from cellulosic materials by moulds.

    cellulosic materials;moulds;ethanol

    2014-10-27

    崔田田(1990-),女,在讀碩士,主要從事食品發(fā)酵與質(zhì)量控制研究。

    張寶善(1968-),男,教授,副院長,主要從事于食品微生物學、食品發(fā)酵學、果蔬加工學的教學、科研與生產(chǎn)服務(wù)工作。

    TS201.3

    A

    1002-0306(2016)01-0000-00

    10.13386/j.issn1002-0306.2016.01.000

    猜你喜歡
    木糖霉菌菌種
    一個空瓶
    揭示水霉菌繁殖和侵染過程
    有心的小蘑菇
    布谷鳥讀信
    螞蟻琥珀中發(fā)現(xiàn)新蘑菇菌種
    軍事文摘(2021年18期)2021-12-02 01:28:04
    低聚木糖在家禽中的應(yīng)用
    廣東飼料(2016年8期)2016-02-27 11:10:01
    手外傷感染的菌種構(gòu)成及耐藥性分析
    食用菌液體菌種栽培技術(shù)的探討
    霉菌的新朋友—地衣
    地衣和霉菌
    亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美区成人在线视频| 免费av中文字幕在线| 国产91av在线免费观看| 国产高清国产精品国产三级 | 亚洲精品第二区| 国产综合精华液| av福利片在线观看| 99热这里只有精品一区| 国内精品宾馆在线| 免费观看无遮挡的男女| 久久影院123| 国产精品免费大片| 日韩制服骚丝袜av| 美女主播在线视频| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲精品第二区| 成人漫画全彩无遮挡| 少妇人妻久久综合中文| 99热这里只有精品一区| 2021少妇久久久久久久久久久| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 精品人妻偷拍中文字幕| 18+在线观看网站| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 大香蕉97超碰在线| 美女主播在线视频| 免费人成在线观看视频色| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产精品一区二区性色av| 一个人免费看片子| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 欧美成人a在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲av二区三区四区| 秋霞在线观看毛片| 午夜福利高清视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 97精品久久久久久久久久精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 色综合色国产| av女优亚洲男人天堂| 97在线视频观看| 国产精品福利在线免费观看| 九九在线视频观看精品| 欧美成人午夜免费资源| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲,欧美,日韩| 韩国高清视频一区二区三区| 18禁在线播放成人免费| 99久久精品热视频| 国产黄片美女视频| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲第一区二区三区不卡| 精品一品国产午夜福利视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 插阴视频在线观看视频| 日本vs欧美在线观看视频 | 亚洲成人av在线免费| 一级毛片aaaaaa免费看小| 少妇人妻精品综合一区二区| 免费av中文字幕在线| 在线天堂最新版资源| 欧美日韩亚洲高清精品| 午夜老司机福利剧场| 国产精品免费大片| 亚洲av国产av综合av卡| 精品视频人人做人人爽| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产成人91sexporn| 99国产精品免费福利视频| 欧美高清性xxxxhd video| 久久午夜福利片| 99热网站在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 一区在线观看完整版| 日本欧美视频一区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品成人在线| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 波野结衣二区三区在线| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲国产成人一精品久久久| 中文字幕亚洲精品专区| 韩国av在线不卡| 国产成人精品婷婷| 久久99热这里只有精品18| 成人国产av品久久久| 99久国产av精品国产电影| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 在现免费观看毛片| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美一区二区亚洲| 国产精品三级大全| 99热网站在线观看| 视频区图区小说| 亚洲欧美日韩无卡精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 精品熟女少妇av免费看| 久久久久久九九精品二区国产| 边亲边吃奶的免费视频| 男人舔奶头视频| 日本色播在线视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 美女主播在线视频| 精品一区二区免费观看| 亚洲av国产av综合av卡| 国产精品偷伦视频观看了| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| freevideosex欧美| av在线观看视频网站免费| 日韩欧美 国产精品| h日本视频在线播放| 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久久久久久人人人人人人| 日本免费在线观看一区| 国产成人精品福利久久| www.av在线官网国产| 99视频精品全部免费 在线| 国产av码专区亚洲av| 欧美激情国产日韩精品一区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 99久久人妻综合| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲美女视频黄频| 日韩大片免费观看网站| 中国三级夫妇交换| 精品久久久久久电影网| 国产精品一及| 亚洲怡红院男人天堂| 网址你懂的国产日韩在线| 精品少妇黑人巨大在线播放| 色综合色国产| 国产免费一级a男人的天堂| 午夜福利在线在线| 精品国产乱码久久久久久小说| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产亚洲91精品色在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 久久久久国产精品人妻一区二区| 免费在线观看成人毛片| 亚洲精品第二区| 久热久热在线精品观看| 亚洲图色成人| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产欧美亚洲国产| 看十八女毛片水多多多| 精品国产露脸久久av麻豆| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 欧美精品国产亚洲| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 天堂8中文在线网| av女优亚洲男人天堂| 久久99热6这里只有精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲成色77777| av网站免费在线观看视频| 观看av在线不卡| 亚洲自偷自拍三级| 日韩成人av中文字幕在线观看| 性色avwww在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 内地一区二区视频在线| 联通29元200g的流量卡| 国产欧美亚洲国产| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲第一区二区三区不卡| 成人黄色视频免费在线看| 国产精品人妻久久久影院| av卡一久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 成年av动漫网址| 亚洲第一av免费看| 国产精品人妻久久久久久| .国产精品久久| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 日韩强制内射视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产精品99久久99久久久不卡 | 欧美成人a在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲av在线观看美女高潮| av在线app专区| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲人成网站高清观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产av码专区亚洲av| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲内射少妇av| 亚洲经典国产精华液单| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲精品国产成人久久av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 一级片'在线观看视频| 午夜日本视频在线| 精品久久久久久久久av| 亚洲自偷自拍三级| 国产精品三级大全| 亚洲欧洲日产国产| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 成人黄色视频免费在线看| 少妇被粗大猛烈的视频| 大码成人一级视频| 亚洲精品乱久久久久久| 一级a做视频免费观看| 舔av片在线| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 啦啦啦视频在线资源免费观看| videossex国产| 色婷婷久久久亚洲欧美| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产午夜精品一二区理论片| 波野结衣二区三区在线| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 美女国产视频在线观看| 97在线视频观看| 在线观看免费高清a一片| 一本一本综合久久| 妹子高潮喷水视频| av在线app专区| 国产欧美日韩精品一区二区| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产男女超爽视频在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 一本色道久久久久久精品综合| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲av免费高清在线观看| 国产成人aa在线观看| 秋霞在线观看毛片| 免费黄网站久久成人精品| 内地一区二区视频在线| 联通29元200g的流量卡| 九草在线视频观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲伊人久久精品综合| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲av男天堂| 精品久久国产蜜桃| 美女福利国产在线 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 涩涩av久久男人的天堂| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久久久久久久久久免费av| 我的老师免费观看完整版| 亚洲美女视频黄频| 国产男女内射视频| 高清不卡的av网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美成人a在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 国产淫语在线视频| 天堂中文最新版在线下载| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲真实伦在线观看| 久久久久久伊人网av| 亚洲精品国产成人久久av| 99久国产av精品国产电影| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 网址你懂的国产日韩在线| 大码成人一级视频| 美女福利国产在线 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产精品一区二区在线不卡| 久热久热在线精品观看| av专区在线播放| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲内射少妇av| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲电影在线观看av| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲欧美清纯卡通| 国产午夜精品一二区理论片| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久国内精品自在自线图片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久99精品国语久久久| 午夜免费鲁丝| 国产人妻一区二区三区在| 精品一区二区三卡| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲国产色片| 成人午夜精彩视频在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲av免费高清在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲精品aⅴ在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲国产色片| 日韩视频在线欧美| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 麻豆成人av视频| 国产 一区精品| 毛片一级片免费看久久久久| 天堂俺去俺来也www色官网| 不卡视频在线观看欧美| 中国三级夫妇交换| 国产精品嫩草影院av在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一区在线观看完整版| 国模一区二区三区四区视频| 免费黄频网站在线观看国产| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美少妇被猛烈插入视频| 乱系列少妇在线播放| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲综合色惰| 日本欧美国产在线视频| 99re6热这里在线精品视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 精品人妻熟女av久视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 黑人高潮一二区| 久久久久久久大尺度免费视频| 免费观看在线日韩| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲精品第二区| 久久久久久久久久成人| 亚洲国产欧美在线一区| 99热6这里只有精品| 国产精品人妻久久久久久| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产精品嫩草影院av在线观看| 蜜桃在线观看..| 中文欧美无线码| 精品一区在线观看国产| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 日韩亚洲欧美综合| 美女中出高潮动态图| av天堂中文字幕网| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产精品国产三级国产专区5o| 老师上课跳d突然被开到最大视频| av网站免费在线观看视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美日韩综合久久久久久| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产精品一区二区性色av| 舔av片在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 蜜桃在线观看..| 国产精品偷伦视频观看了| 国产高清国产精品国产三级 | 99精国产麻豆久久婷婷| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产精品久久久久久久电影| 中国国产av一级| 久久久久国产精品人妻一区二区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 少妇人妻 视频| 免费在线观看成人毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 少妇人妻 视频| 我要看黄色一级片免费的| 伦精品一区二区三区| 亚洲国产精品专区欧美| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 九九爱精品视频在线观看| freevideosex欧美| 美女福利国产在线 | 少妇丰满av| 国产美女午夜福利| 精品熟女少妇av免费看| 欧美zozozo另类| 蜜桃在线观看..| 精品人妻视频免费看| av女优亚洲男人天堂| 欧美日韩综合久久久久久| 爱豆传媒免费全集在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产永久视频网站| 免费观看无遮挡的男女| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产有黄有色有爽视频| 成人影院久久| 国产在线一区二区三区精| 女性生殖器流出的白浆| 七月丁香在线播放| 成年人午夜在线观看视频| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产精品无大码| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲电影在线观看av| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 欧美极品一区二区三区四区| 高清视频免费观看一区二区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 老熟女久久久| 国产一区二区在线观看日韩| 日韩一区二区三区影片| 亚洲av二区三区四区| 国产亚洲最大av| 亚洲人成网站高清观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久久色成人| 女人久久www免费人成看片| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 日韩国内少妇激情av| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 大片免费播放器 马上看| 国产精品国产av在线观看| av国产免费在线观看| 99久国产av精品国产电影| 欧美最新免费一区二区三区| av一本久久久久| 亚洲人成网站在线播| 男的添女的下面高潮视频| 久久韩国三级中文字幕| 男人添女人高潮全过程视频| 99热网站在线观看| 51国产日韩欧美| 交换朋友夫妻互换小说| 国产免费一区二区三区四区乱码| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品视频人人做人人爽| 日本wwww免费看| 日本黄色片子视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 免费黄色在线免费观看| 日韩成人伦理影院| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产精品伦人一区二区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 黄色日韩在线| 精品一区在线观看国产| 99热这里只有是精品50| 看非洲黑人一级黄片| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产精品国产三级专区第一集| 国模一区二区三区四区视频| 九草在线视频观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 中文字幕免费在线视频6| 在线天堂最新版资源| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产成人一区二区在线| 夫妻午夜视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久99蜜桃精品久久| 99久国产av精品国产电影| 久久久久久久久久人人人人人人| 七月丁香在线播放| 亚洲av综合色区一区| 中文欧美无线码| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲精品自拍成人| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久精品国产亚洲av涩爱| 九色成人免费人妻av| 国产色爽女视频免费观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 日韩一区二区三区影片| 国产精品偷伦视频观看了| 少妇 在线观看| 日本免费在线观看一区| 国产在视频线精品| 亚洲,欧美,日韩| 久久影院123| 国产精品不卡视频一区二区| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲三级黄色毛片| 美女主播在线视频| 免费看日本二区| 少妇人妻 视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 边亲边吃奶的免费视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲丝袜综合中文字幕| 观看av在线不卡| 国产成人aa在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 久久久久久伊人网av| av在线app专区| 亚洲av男天堂| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 97精品久久久久久久久久精品| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲国产最新在线播放| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久久久久久久久成人| 久久影院123| 国产在线男女| 少妇的逼好多水| 男女无遮挡免费网站观看| 国产男人的电影天堂91| 国产日韩欧美在线精品| 国产男女内射视频| 久久久久国产网址| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产男女内射视频| 大香蕉久久网| 在线 av 中文字幕| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产精品欧美亚洲77777| 国产探花极品一区二区| 99久久综合免费| 高清黄色对白视频在线免费看 | 色5月婷婷丁香| 亚洲成人手机| 这个男人来自地球电影免费观看 | 男人和女人高潮做爰伦理| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲精品一区蜜桃| 国产亚洲最大av| 三级经典国产精品| 亚洲国产色片| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 日韩一区二区视频免费看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 直男gayav资源| 色哟哟·www| 岛国毛片在线播放| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲欧美成人综合另类久久久| av视频免费观看在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 国产成人午夜福利电影在线观看| 激情五月婷婷亚洲| 熟女av电影| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲欧美日韩东京热| 嫩草影院入口| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国内精品宾馆在线| 高清午夜精品一区二区三区| 99久国产av精品国产电影| av网站免费在线观看视频| 韩国av在线不卡| 亚洲欧美精品专区久久| 久久99热6这里只有精品| 国产一区二区三区av在线| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲欧洲国产日韩| tube8黄色片| 高清av免费在线| 国产av一区二区精品久久 | 国产精品久久久久久精品古装| 视频区图区小说| 97在线人人人人妻| 国产亚洲91精品色在线| 国产午夜精品一二区理论片| 青青草视频在线视频观看| 国产欧美亚洲国产| 能在线免费看毛片的网站| 国产成人精品久久久久久| 国产人妻一区二区三区在| 久久99蜜桃精品久久| 欧美极品一区二区三区四区| 久久久久久久久大av| 欧美97在线视频| 成人漫画全彩无遮挡| 伊人久久精品亚洲午夜| videossex国产| 中文天堂在线官网| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 久久综合国产亚洲精品| 看十八女毛片水多多多| 亚洲综合精品二区| 男女啪啪激烈高潮av片| a级毛色黄片| 一区在线观看完整版| 直男gayav资源| 一级片'在线观看视频| 国产又色又爽无遮挡免| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲成人av在线免费| 简卡轻食公司| 深夜a级毛片| 久久久久久久久久久丰满| 欧美日本视频| 日韩成人av中文字幕在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 久久久久网色| 国产真实伦视频高清在线观看| 99热这里只有精品一区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲色图综合在线观看| 插逼视频在线观看| 亚洲国产色片| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久久成人免费电影| 日韩一区二区视频免费看|