新城疫病毒對雞內臟病理損傷的研究

王 強　（山東省泰安市岱岳區(qū)山口鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站　271038）霍 偉　（山東省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局）任元剛?。ㄉ綎|省濟南市商河縣現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技示范園管理委員會）

新城疫病毒對雞內臟病理損傷的研究

王 強（山東省泰安市岱岳區(qū)山口鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站271038）
霍 偉（山東省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局）
任元剛（山東省濟南市商河縣現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技示范園管理委員會）

本試驗利用病理石蠟切片技術研究新城疫病雞的免疫器官的組織病理學變化，探討新城疫病毒對雞心臟，肝臟和腸的損傷機理。結果發(fā)現(xiàn)，光鏡下的病理主要表現(xiàn)在腸、胸腺、脾臟、胰臟、盲腸扁桃體等，以消化道的出血性炎癥為主，黏膜層淋巴細胞增多，部分上皮細胞壞死、出血。

雞新城疫心臟肝臟腸光鏡觀察

新城疫（Newcastle Disease，ND）在1929年發(fā)生于印度尼西亞的爪哇［1］，同年發(fā)現(xiàn)英國的新城［2］，根據(jù)發(fā)現(xiàn)地而命名為新城疫。自從1945年我國開始報道新城疫［3］到現(xiàn)在，凡是我國養(yǎng)雞的地方就有新城疫不同程度的流行，造對養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展成影響。隨著細胞和分子生物技術的發(fā)展，組織制片技術也為原位顯示細胞內的基因和基因表達提供了基礎。做好的標本能保存較長時間，使用方便。組織制片技術在醫(yī)學教育研究中被廣泛應用。本實驗利用病理石蠟切片技術研究新城疫病雞的免疫器官的組織病理學變化，探討新城疫病毒對雞心臟，肝臟和腸的損傷機理。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1材料新城疫病雞。

1.1.2器材切片刀、切片機、恒溫箱、電爐、酒精燈、手術刀、解剖剪、解剖盤、鑷子、單面刀片、包埋紙盒、染色缸、蓋玻片、載玻片、玻片盤、樹膠、顯微鏡、水浴鍋。

1.1.3主要試劑2×PBS緩沖液：1%SDS，20mMTris-HCL （pH 7.6），0.2M NaCL，固體石蠟，蒸餾水，無水乙醇，二甲苯，甲醛，氯化鈉，氯化鉀，磷酸一氫鈉，磷酸二氫鉀，蘇木素、伊紅等。

1.1.4主要病理材料心臟，肝臟，腸。

1.2方法

1.2.1取樣（1）把病雞解剖，取心肌，肝臟和腸置于10%中性福爾馬林溶液。（2）固定：選用甲醛來作為固定液，取心肌和肝臟合腸固定于10%中性福爾馬林溶液，使組織發(fā)生硬化。固定時間為24h。（3）沖洗：將在固定過程中殘留于組織塊中的甲醛充分除去利用流水對組織塊進行沖洗，連續(xù)沖洗24h。（4）脫水：從30%或50%酒精開始，經(jīng)70%、85%、95%直至純酒精（無水乙醇），每次時間為30～90min，以2次95%酒精，2次100%酒精重復進行脫水，以保證組織的水分脫凈。（5）透明：經(jīng)純酒精和透明劑各半的混合液浸漬1～2h，再轉入純透明劑中浸漬。在透明之前利用乙醇和二甲苯1∶1的混合溶液浸泡組織塊30min，共2次，然后再用二甲苯透明5～20min。（6）浸蠟：在60℃恒溫箱內進行，將已經(jīng)透明的組織塊置于已經(jīng)融化的石蠟燒杯中，放在60℃的恒溫箱中，2h左右后取出倒入另一只含有融化的石蠟燒杯中2h。浸蠟完畢后便可包埋。（7）包埋：包埋時在恒溫箱內進行，倒入包埋盒的蠟在恒溫箱內放0.5h后取出自然冷卻，可以有效的避免蠟塊分層。（8）修塊：將已經(jīng)包埋的組織塊修理成合適的大小便于儲存和切片。

1.2.2切片用切片機將已經(jīng)包埋好的石蠟組織塊進行切片，切片厚度為5μm。切好的石蠟切片放入水浴鍋中（水溫為37）℃使其平展，再用載玻片從切片下方將切片置于在玻片上，并于50℃恒溫箱中烘干4h。

1.2.3染色和封片用HE染色法進行染色。

表1　試驗采取的脫水時間　　　　　　　 （min）

表2　試驗采取的透明時間　　　　　　　（min）

2　結果與分析

2.1剖檢癥狀

剪開嘴發(fā)現(xiàn)口腔內積有大量灰白色粘液；嗦囊空虛但是囊內有較多量液體或帶有酸臭味的液體；消化道里可見到食道與腺胃的交界處有出血點，腺胃與肌胃交界處有出血點、條或斑；腺胃乳頭出血，肌胃角質層下面可見到出血或潰瘍。腸道的漿面可見多處呈棗核狀紫紅色出血，剪開腸管在腸黏膜表面見到棗核狀出血、壞死；盲腸扁桃體腫大、出血、壞死和潰瘍；直腸及泄殖腔、黏膜出血點或條狀出血。心冠和腹部脂肪出血。

2.2腸道病理變化

腸內形成大潰瘍，腸壁深部的集合淋巴濾泡壞死，最初淋巴細胞腫大，胞漿淡染，與相鄰的細胞融合，同時核也增大，色淡，進一步這些細胞細胞輪廓模糊，變?yōu)榉奂t濃染不均勻的塊狀物，其中散在的核的殘屑，以后壞死的淋巴濾泡與周圍的壞死組織融為一體，壞死部小動脈和靜脈管壁發(fā)生纖維素樣壞死，血栓形成和血管破裂引起該部的嚴重出血與血漿浸潤，使壞死組織中出現(xiàn)大量的紅細胞和血漿凝結物。黏膜上皮變性、壞死、并大量脫落。固有膜中有大量淋巴細胞浸潤，以及漿液滲出、充血和出血等病變。

2.3心肌的病理變化

心肌顆粒變性，光鏡下細胞腫大，胞漿內出現(xiàn)多量微細顆粒，HE染色成淡紅色，胞核無明顯的變化，間質內可見滲出性變化，毛細血管充血、出血、個別部位可見心肌纖維出現(xiàn)明顯斷裂，局部有輕微的小灶狀出血等急性病理變化。

2.4肝臟的病理變化

主要表現(xiàn)肝小葉中的肝細胞可見體積腫大，胞漿內密布細小紅染的顆粒。視野中肝細胞出現(xiàn)胞核略微腫大，淡染。有的胞漿內出現(xiàn)大小不等的脂肪空泡，較嚴重時形成一個大空泡，將胞核擠向一側。新城疫，肝臟的病理變化主要表現(xiàn)為變性，顆粒變性和脂肪變性。

3　結論

新城疫病毒為細胞外播散，主要入侵呼吸道和消化道的上皮細胞，表現(xiàn)出高度的殺細胞作用。病毒感染還能引起炎癥反應導致局部組織損傷。本試驗光鏡下的病理主要表現(xiàn)心、肝、腸等，部分上皮細胞壞死、出血，這些病變主要是由于病毒直接作用和機體抗病毒反應所導致的損傷。心肌顆粒變性，肝臟的病理變化主要表現(xiàn)為變性，顆粒變性和脂肪變性，由于新城疫病毒主要侵害呼吸道和腸道上皮細胞，加之腸相關淋巴組織豐富，因而出現(xiàn)的局部損傷相應也較為嚴重。腸相關淋巴組織的陽性染色最強，組織損傷最為嚴重，這與肉眼病變的嚴重程度相吻合。

［1］林紹儀. 雞新城疫研究進展［J］. 國外獸醫(yī)學一畜禽傳染病， 1982（2）：41-43.

［2］殷震， 劉景華. 動物病毒學［Ml. 北京： 科技出版社. 1997.

［3］梁英. 雞新城疫免疫膠體金診斷技術的研究［J］. 畜牧獸醫(yī)月刊，1945（5）： 10-12.

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1007-1733（2016）08-0013-02

2016-04-25）