肺癌組織中骨橋蛋白的表達(dá)及意義

謝寶杰，朱麗娜，趙京旗，劉光輝，王秋香，艾寧，趙瑜

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊050011)

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肺癌組織中骨橋蛋白的表達(dá)及意義

謝寶杰，朱麗娜，趙京旗，劉光輝，王秋香，艾寧，趙瑜

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊050011)

目的觀察骨橋蛋白(OPN)在肺癌組織中的表達(dá),并探討其意義。方法選擇84例原發(fā)性肺癌患者，采用SP免疫組化法檢測(cè)肺癌組織及癌旁組織OPN表達(dá)，并分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果84例患者腫瘤組織中OPN陽(yáng)性表達(dá)率為83.3%(70/84)，癌旁組織為16.7%(14/84)。OPN的表達(dá)與臨床病理類型、TNM分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及CT顯示分葉征、胸膜凹陷征、胸膜浸潤(rùn)、血管支氣管集中征有關(guān)(P均<0.05)。結(jié)論OPN在肺癌組織中呈高表達(dá)，可能參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展。

肺癌；骨橋蛋白;影像學(xué)；腫瘤分期

肺癌是發(fā)生于支氣管黏膜、細(xì)支氣管、腺體或者肺上皮的惡性腫瘤[1]，為臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，多發(fā)于中老年吸煙男性。臨床TNM分期對(duì)惡性腫瘤的治療、預(yù)后評(píng)估具有重要的指導(dǎo)意義，但目前臨床仍然不清楚肺癌形態(tài)學(xué)與預(yù)后之間的關(guān)系[2]。骨橋蛋白(OPN)是一種分泌型的磷酸化蛋白，可促進(jìn)細(xì)胞的趨化、遷移和黏附，對(duì)評(píng)估肺癌的預(yù)后及術(shù)后復(fù)發(fā)具有重要意義[3]。2012年9月～2014年10月，我們檢測(cè)了84例肺癌患者腫瘤組織OPN的表達(dá)，并探討其在肺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《常見(jiàn)惡性腫瘤診治規(guī)范》[4]中原發(fā)性支氣管肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡25～85歲；患者以及家屬對(duì)本研究具體情況了解知情并自愿參與，簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神、神志異常不能配合者；②患有嚴(yán)重心、肝、腎、肺、腦疾病者；③患有肝癌、腎癌等其他惡性腫瘤者；④患有艾滋病、梅毒、病毒性肝炎、結(jié)核等傳染病者；⑤患有再障、白血病等血液性疾病者；⑥近3個(gè)月接受過(guò)化療、放療、介入治療者。研究對(duì)象為我院診斷為原發(fā)性肺癌患者84例。其中男47例、女37例，年齡30～78(55.2±7.7)歲。均經(jīng)支氣管鏡或者經(jīng)皮穿刺組織活檢確診，其中鱗癌24例、腺癌21例、大細(xì)胞癌19例、小細(xì)胞癌20例；根據(jù)美國(guó)聯(lián)合癌癥分類委員會(huì)和國(guó)際抗癌聯(lián)盟確定的臨床分期標(biāo)準(zhǔn)[5]分為Ⅰ期21例、Ⅱ期20例、Ⅲ期23例、Ⅳ期20例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例，未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例；CT顯示分葉征46例、胸膜凹陷征45例、胸膜浸潤(rùn)42例、血管支氣管集中征41例。本研究已獲得本院倫理學(xué)相關(guān)機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)授權(quán)。

1.2腫瘤組織及癌旁組織OPN檢測(cè)采用免疫組化SP法。CT定位下對(duì)入選者行肺部腫塊組織活檢，4%甲醛固定、石蠟包埋，連續(xù)4 μm切片；脫蠟后水化，放入pH 6 .0的檸檬酸鹽緩沖液中加熱2 min，室溫冷卻后PBS沖洗；加入OPN一抗(1∶50)，4 ℃過(guò)夜，PBS沖洗3次；加入生物素化一抗加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記過(guò)的親和素(1∶50)，溫室培育1 h，PBS沖洗3次；然后加入非生物素化一抗加兔Envinsion試劑，培育0.5 h后PBS沖洗3次。DAB顯色后置顯微鏡下觀察，所有操作嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。每張切片選取5個(gè)高倍視野，觀察每個(gè)視野100個(gè)細(xì)胞染色程度，計(jì)算陽(yáng)性染色細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，并以著色細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)進(jìn)行計(jì)分。0分：著色細(xì)胞<10%；1分：著色細(xì)胞≥10%且<40%；2分：著色細(xì)胞≥40%且<70%；3分：著色細(xì)胞≥70%。根據(jù)著色的深淺進(jìn)行計(jì)分。0分：無(wú)著色；1分：著色為淡黃色；2分：著色為棕黃色。以上兩項(xiàng)計(jì)分的乘積，其中陰性分為0，弱陽(yáng)性為1～3，強(qiáng)陽(yáng)性總計(jì)分>4,弱陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性均判為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

84例患者腫瘤組織中OPN陽(yáng)性表達(dá)率為83.3%(70/84)，癌旁組織為16.7%(14/84)，P<0.05。OPN的表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見(jiàn)表1。

表1　OPN表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3　討論

OPN是一種具有生物學(xué)活性的分泌型糖蛋白，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的趨化、遷移和黏附，參與骨的吸收和形成，同時(shí)還與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)系[6]。近年來(lái)，OPN在早期細(xì)胞免疫應(yīng)答、肉芽腫炎癥、腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移中的作用倍受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，OPN在多種腫瘤生長(zhǎng)、增殖、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后具有相關(guān)性[7]。OPN能夠上調(diào)VEGF活性，引起微血管外滲，激活凝血酶原，促進(jìn)血管的形成[8]；OPN能夠整合素受體，促進(jìn)細(xì)胞之間的黏附和遷移，并刺激分泌產(chǎn)生抗凋亡信號(hào)，從而導(dǎo)致細(xì)胞的無(wú)限生長(zhǎng)；OPN與整合素受體結(jié)合后會(huì)激活一系列信號(hào)通路，引起腫瘤細(xì)胞分泌產(chǎn)生降解細(xì)胞外基質(zhì)的基質(zhì)金屬蛋白酶，基質(zhì)金屬蛋白酶能夠促使腫瘤細(xì)胞突破周?chē)Y(jié)締組織，加速腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[10]；CD44v6是與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移有關(guān)的蛋白，肝癌、胃癌等腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中存在CD44v6高表達(dá)[12]。OPN可與CD44v6結(jié)合，控制細(xì)胞骨架重塑、細(xì)胞存活、增生和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力[11]。有學(xué)者通過(guò)分析不同腫瘤組織DPN mRNA的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織內(nèi)呈現(xiàn)OPN高表達(dá)[13]。Bmldrini等[14]研究發(fā)現(xiàn)，OPN高表達(dá)非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移早且預(yù)后差，反之，低表達(dá)OPN患者預(yù)后良好?？傊?，OPN在細(xì)胞的趨化、黏附、遷移以及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等等多個(gè)過(guò)程起著重要的作用，OPN的表達(dá)為評(píng)估腫瘤的惡性度和預(yù)后提供重要依據(jù)。

目前臨床上對(duì)于肺癌的治療主要采用手術(shù)為主、放化療為輔的綜合治療方法。手術(shù)治療主要適合于早期肺癌患者，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者手術(shù)切除腫瘤難度較大，且無(wú)法完全切除轉(zhuǎn)移病灶。目前臨床TNM分期的主要依據(jù)是以影像學(xué)檢查和體格檢查為主，其中影像學(xué)在診斷肺癌分期中占主要地位[6]。肺癌的分葉征是因腫瘤各個(gè)方向的生長(zhǎng)速度不一和周?chē)Y(jié)構(gòu)制約而形成的，故深分葉征對(duì)肺癌的診斷和評(píng)估更具有意義[15]。當(dāng)癌組織向鄰近的肺實(shí)質(zhì)浸潤(rùn)延伸時(shí)，CT顯示出毛刺征[16]。本研究結(jié)果顯示，CT顯示肺癌分葉征癌組織中OPN呈高表達(dá)，OPN高表達(dá)可降低腫瘤細(xì)胞之間的黏附力，釋放能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白酶，破壞細(xì)胞基底膜，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞向周?chē)M織浸潤(rùn)、生長(zhǎng)，提高腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛力；癌細(xì)胞胸膜侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移導(dǎo)致肺癌TNM分期增高，增加手術(shù)完全切除難度。本研究結(jié)果示，CT示胸膜凹陷征、胸膜浸潤(rùn)、血管支氣管集中征癌組織中OPN呈現(xiàn)高水平表達(dá)，表明OPN與肺癌的侵襲力和惡性程度密切相關(guān)。肺小細(xì)胞肺癌發(fā)病率較低，但是分化程度遠(yuǎn)低于鱗癌、腺癌和大細(xì)胞癌，惡性程度極高，生長(zhǎng)快，在早期，容易浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞和血液，發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移和血行轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差[17]。本研究中OPN在鱗癌、腺癌和大細(xì)胞癌這些非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)明顯低于小細(xì)胞癌，可能與OPN參與腫瘤細(xì)胞的趨化、黏附、遷移有關(guān)，OPN能夠增強(qiáng)惡性度高病理類型的癌細(xì)胞的侵犯和浸潤(rùn)能力，加速其轉(zhuǎn)移。研究顯示，肺癌TNM分期與OPN水平表達(dá)呈正相關(guān)，隨著TNM的分期增加，癌組織中OPN表達(dá)明顯增高[18]，故TNM分期越高OPN表達(dá)越高，同時(shí)也提示患者預(yù)后較差。

綜上所述，OPN在肺癌組織中呈高表達(dá)，可能參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展，可作為肺癌臨床TNM分期診斷的生化指標(biāo)和評(píng)估預(yù)后及術(shù)后復(fù)發(fā)的新指標(biāo)。

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