系統(tǒng)性硬化癥和混合性結(jié)締組織病活動期血清中LOXL-2的比較

程　瑤，王曉非，張曉莉，張　娜，張新剛

（中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院風濕免疫科，沈陽110004）

系統(tǒng)性硬化癥和混合性結(jié)締組織病活動期血清中LOXL-2的比較

程瑤，王曉非，張曉莉，張娜，張新剛

（中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院風濕免疫科，沈陽110004）

目的比較賴氨酰氧化酶樣蛋白2（LOXL-2）在系統(tǒng)性硬化癥（SSc）和混合性結(jié)締組織?。∕CTD）活動期患者血清中的表達情況。方法用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測20例SSc和20例MCTD患者中LOXL-2的濃度，進行統(tǒng)計分析。結(jié)果在活動期MCTD和SSc患者血清中LOXL-2的蛋白表達量高于對照組（均P＜0.05），且在SSc患者中LOXL-2濃度與患者皮膚病變評分（mRSS）呈正相關（r=0.982 P=0.001）。結(jié)論LOXL-2在SSc和MCTD活動期患者的血清中高表達，可能與LOXL-2促進組織纖維化及血管炎的發(fā)生相關。

系統(tǒng)性硬化癥；混合性結(jié)締組織??；賴氨酰氧化酶樣蛋白2；纖維化

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系統(tǒng)性硬化癥（systematic sclerosis，SSc）是一種病因不明的以皮膚或內(nèi)臟器官纖維化、閉塞性血管病變及免疫系統(tǒng)紊亂為主要特征的自身免疫性疾?。?-2］，其他結(jié)締組織病也會出現(xiàn)血管損害等臨床表現(xiàn)，以混合性結(jié)締組織?。╩ixed connective tissue disease，MCTD）最為明顯，其以血清中出現(xiàn)抗U1-RNP抗體及同時具備系統(tǒng)性紅斑狼瘡、皮肌炎、系統(tǒng)性硬化癥等相似的臨床表現(xiàn)為主要特點［3-5］，MCTD從基因遺傳角度似乎區(qū)別于其他的結(jié)締組織?。?］，但關于MCTD應該分類為一種獨立的疾病、重疊綜合征或者是一個未分化的結(jié)締組織病正在進行著激烈的討論［7］。

賴氨酰氧化酶家族是一種廣泛分布于多種組織器官的銅依賴性氨基酸氧化酶，可催化膠原和彈性蛋白中賴氨酸殘基形成分子內(nèi)和分子間的共價交聯(lián)，這種交叉連接將膠原和彈性蛋白中的可溶性單體轉(zhuǎn)變?yōu)榧毎饣|(zhì)中穩(wěn)定性較強的不溶性纖維［8］，但賴氨酰氧化酶樣蛋白2（lysyl oxidase like protein-2，LOXL-2）和SSC、MCTD的關系還不清楚。本研究通過比較SSc和MCTD活動期患者血清中LOXL-2的表達情況，初步探討LOXL-2在血管、皮膚及臟器纖維化中的作用。

1　材料與方法

1.1臨床資料

隨機選取20例SSc患者（SSc組，所有患者均符合2013年EULAR/ACR診斷標準［9］），20例MCTD患者（MCTD組至少符合3個診斷標準中的一個，包括修訂的1987年Sharp's診斷標準、Alarcón-Segovia或Kasukawa診斷標準［10］，并且排除其他結(jié)締組織?。?，20例正常對照組患者。研究已獲得本單位倫理委員會批準，取得受試者的知情同意。記錄患者有無肺間質(zhì)纖維化（根據(jù)患者胸部HRCT結(jié)果判斷肺間質(zhì)纖維化嚴重程度）、有無指趾端潰瘍、有無雷諾現(xiàn)象等指標。同時記錄SSc患者的皮膚病變評分（modified rodnan skin score，mRSS）。

1.2標本采集

血液標本在室溫下離心30 min并且儲存于-70°C冰箱。用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中LOXL-2含量，試劑盒購自R&D生物公司。實驗步驟按照說明書進行，酶標儀450 nm處測OD值，繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線計算出LOXL-2濃度。

1.3統(tǒng)計學分析

數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析，以x±s表示。多組間計量資料比較采用單因素方差分析；2組間計量資料比較采用獨立樣本t檢驗；LOXL-2水平與臨床相關指標之間的關系采用直線相關分析并計算Pearson相關系數(shù)（r），P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1LOXL-2在SSc組的表達

LOXL-2在SSc組濃度為（0.32±0.11）ng/mL，在正常對照組為（0.16±0.03）ng/mL，SSc組濃度高于正常對照組（P＜0.001），見圖1。

2.2LOXL-2在MCTD組的表達

LOXL-2在MCTD組濃度為（0.47±0.17）ng/mL，MCTD組濃度高于SSc組（P=0.014），正常對照組LOXL-2濃度為（0.16±0.03）ng/mL，MCTD組濃度高于正常對照組（P＜0.001），見圖1。

圖1　SSc組和MCTD組患者與對照組血清LOXL-2的表達Fig.1 Comparison of serum LOXL-2 levels among the patients groups and control group

2.3LOXL-2血清濃度與SSc和MCTD臨床參數(shù)的相關分析

SSc和MCTD患者臨床參數(shù)中最有意義和價值的判斷指標是肺間質(zhì)纖維化，SSc患者組間比較發(fā)現(xiàn)有肺間質(zhì)纖維化組與無肺間質(zhì)纖維化組的血清LOXL-2濃度平均值分別為0.39 ng/mL和0.22 ng/mL，而MCTD患者組間比較發(fā)現(xiàn)有肺間質(zhì)纖維化組與無肺間質(zhì)纖維化組的血清LOXL-2濃度平均值分別為0.53 ng/mL和0.34 ng/mL，組間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

分析SSc患者的mRSS評分，發(fā)現(xiàn)mRSS評分越高，血清中LOXL-2濃度越大（r=0.982，P=0.001），見圖2。SSc和MCTD患者其他臨床參數(shù)如血沉、C-反應蛋白、ANA滴度、免疫球蛋白A、G、M、補體C3、C4等指標與LOXL-2濃度之間均無相關性（P均＞0.05）。

表1　血清LOXL-2表達與SSc和MCTD臨床特征的關系Tab.1 Correlations between serum LOXL-2 levels and clinical manifestations of systemic scleroderma and mixed connective tissue disease

圖2　LOXL-2表達與mRSS評分的關系Fig.2 Correlation between the expression of LOXL-2 and mRSS scores

3　討論

LOXL-2是存在于哺乳動物中的銅依賴性氨基酸氧化酶，LOXL-2作為促進膠原蛋白和纖維蛋白共價交聯(lián)的關鍵酶，能夠催化細胞外基質(zhì)蛋白，如膠原和彈性蛋白中賴氨酸殘基ε-氨基的氧化脫氨，產(chǎn)生的醛基通過Schiff′s堿的形成或者丁醛醇的縮合反應形成分子內(nèi)和分子間共價交叉連接，這種交叉連接將膠原和彈性蛋白的可溶性單體轉(zhuǎn)變?yōu)榧毎饣|(zhì)中穩(wěn)定性較強的不溶性纖維，LOXL-2還具有影響細胞增殖和細胞趨化以及抑制或促進腫瘤形成等功能［11］。

MCTD和SSc都屬于自身免疫性疾病，且病理共同涉及臟器受累、血管病變及皮膚纖維化，但這2種病具有不同的臟器受累和皮膚纖維化程度，且MCTD血清學化驗中出現(xiàn)高效價斑點型抗核抗體及抗U1-RNP抗體，并具有多種結(jié)締組織?。ㄏ到y(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、多發(fā)性肌炎等）的混合臨床表現(xiàn)。

本研究結(jié)果顯示LOXL-2在SSc及MCTD中濃度顯著高于正常對照組，提示在皮膚及內(nèi)臟纖維化的過程中LOXL-2可能通過作用于膠原蛋白和纖維蛋白的共價交聯(lián)發(fā)揮重要作用。進一步研究發(fā)現(xiàn)LOXL-2濃度在MCTD組高于SSc組、肺間質(zhì)纖維化組LOXL-2水平明顯高于無肺間質(zhì)纖維化組，在SSc患者中LOXL-2水平與硬皮病患者皮膚病變嚴重程度成正相關，由此可推測LOXL-2可作為評價疾病嚴重程度及患者預后的關鍵因素，推測可能與LOXL-2酶的參與有關。LOXL-2作為促進膠原蛋白和纖維蛋白共價交聯(lián)的關鍵酶，尚未查閱到LOXL-2在SSc及MCTD中相關文獻報道。因SSc和MCTD發(fā)病率低、患病人數(shù)少，研究呈現(xiàn)一定局限性，統(tǒng)計學意義有限，有待擴大樣本量。LOXL-2在SSc及MCTD發(fā)病及病程中的具體作用和機制還需進一步研究。

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（編輯于溪）

Comparison ofLOXL-2 Expression between Active Systematic Scleroderma and Active Mixed Connective Tissue Disease

CHENG Yao，WANG Xiaofei，ZHANG xiaoli，ZHANG Na，ZHANG Xingang
（Department of Rheumatology and Immunology，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110004，China）

Objective To investigate the expression of lysyloxidase like protein-2（LOXL-2）in the sera of patients with active systemic scleroderma（SSc）and mixed connective tissue disease（MCTD）.Methods An enzyme-linked immunosorbent assay was adopted to measure LOXL-2 in the serum of20 patients with active SSc，20 patients with active MCTD，and 20 healthy controls.The measurements among different groups was compared，and correlations between LOXL-2 levels and clinical manifestations of SSc and MCTD were examined.Results The levels of LOXL-2 expression in MCTD and SSc groups were significantly higher than those in control group（P＜0.05 for all groups）.LOXL-2 expression is also related to the presence of skin lesions in SSc（r=0.982 P=0.001）.Conclusion High serum level of LOXL-2 in these patients with active SSc and active MCTD suggests that LOXL-2 may be involved in the process of fibrosis and the resulting vasculitis in multiple organs.

systematic scleroderma；mixed connective tissue disease；lysyl oxidase like protein-2；fibroblast

R593.25

A

0258-4646（2016）05-0414-04

10.12007/j.issn.0258-4646.2016.05.008

遼寧省科學技術(shù)計劃（2014225017）；遼寧省博士科研啟動基金（20141043）；沈陽市科學技術(shù)計劃（F12-193-9-41）

程瑤（1989-），女，碩士研究生.

王曉非，E-mail：wangxf@sj-hospital.org

2015-11-12

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