氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定燕窩氨基酸組成

◎黃永連，陳曉嘉，韓秋珍（1.廣東省食品工業(yè)研究所，廣東 廣州 510308；2.廣東省質(zhì)量監(jiān)督食品檢驗(yàn)站，廣東 廣州 510308）

氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定燕窩氨基酸組成

◎黃永連1，2，陳曉嘉1，2，韓秋珍1，2
（1.廣東省食品工業(yè)研究所，廣東 廣州 510308；2.廣東省質(zhì)量監(jiān)督食品檢驗(yàn)站，廣東 廣州 510308）

本文通過(guò)鹽酸水解法處理燕窩樣品，通過(guò)日立L-8900氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定氨基酸含量，分析不同燕窩中氨基酸的含量及其組成。結(jié)果顯示：干燕窩的氨基酸總含量大概在43 g/100 g～49 g/100 g，新鮮的冷凍燕窩在8 g/100 g左右，燕窩中氨基酸組成相對(duì)穩(wěn)定，其氨基酸比值的極差均小于1.0％。因此，氨基酸含量和氨基酸比值可為建立系統(tǒng)的氨基酸監(jiān)測(cè)技術(shù)體系提供理論依據(jù)。

燕窩；氨基酸；氨基酸自動(dòng)分析儀

多年以來(lái)，燕窩一直被認(rèn)為是高檔滋補(bǔ)品，在一些燕窩出產(chǎn)地區(qū)，由于對(duì)燕窩的采摘，造成金絲燕瀕臨滅絕，加上現(xiàn)在環(huán)境破壞，燕子種類和數(shù)量都在減少，燕窩產(chǎn)量也就越來(lái)越少，物以稀為貴，造成燕窩價(jià)格高，為了牟取更多利益，有些商家在燕窩中摻雜使假、以次充好，使燕窩質(zhì)量參差不齊，給市場(chǎng)和消費(fèi)者造成了一定的混亂［1-4］。因此，有必要建立一個(gè)有效的手段對(duì)燕窩品質(zhì)進(jìn)行監(jiān)控。

由于氨基酸是組成蛋白的基本單位，相同類型的物質(zhì)蛋白和氨基酸具有相似性，通過(guò)檢測(cè)燕窩中的氨基酸，分析其中的規(guī)律建立質(zhì)控的方法。氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定不同產(chǎn)地燕窩中氨基酸組成的方法的研究，本法操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、專一性強(qiáng)，可適用性強(qiáng)［5-7］。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑

日立L-8900氨基酸自動(dòng)分析儀、AG204電子天平、HHS-2電熱恒溫水浴鍋以及電熱恒溫干燥烘箱等。濃鹽酸、苯酚、茚三酮等：均為分析純。

1.2色譜條件

色譜柱規(guī)格：4.6×60 mm，填料為3 μm磺酸型陽(yáng)離子樹脂分離柱，泵1流速0.40 mL/min，泵2流速0.35 mL/min，柱溫57 ℃，檢測(cè)器溫度135 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：第一通道570 nm，第二通道440 nm，進(jìn)樣量20 μL，每個(gè)樣品分析時(shí)間約53 min。

1.3實(shí)驗(yàn)方法-氨基酸的測(cè)定

（1）樣品前處理。準(zhǔn)確稱取0.5 g（精確至0.000 1 g）燕窩樣品于水解管中，加6 mol/L鹽酸10～15 mL（視試樣蛋白質(zhì)含量而定），加入新蒸餾的苯酚3～4滴，再將水解管放入冷凍劑中，冷凍3～5 min，再接到真空泵的抽氣管上，抽真空（接近0 Pa），然后充入高純氮?dú)?；再抽真空充氮?dú)?，重?fù)3次后，在充氮?dú)鉅顟B(tài)下封口，將已封口的水解管放在（110±1）℃的恒溫干燥箱內(nèi)，水解22 h后，取出冷卻。

打開水解管，將水解液過(guò)濾后，用去離子水多次沖洗水解管，將水解液全部轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶?jī)?nèi)用去離子水定容。吸取濾液2 mL于50 mL燒杯中，水浴蒸干，殘留物用1～2 mL水溶解，再干燥，反復(fù)進(jìn)行兩次，最后蒸干，用10 mL pH 2.2的緩沖液溶解，混勻壓濾，供儀器測(cè)定用。

（2）定量分析。準(zhǔn)確吸取0.200 mL混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)，用pH 2.2的緩沖液稀釋到5 mL，此標(biāo)準(zhǔn)稀釋液濃度為2.0 nmol/20 μL，作為上機(jī)測(cè)定用的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)，用氨基酸自動(dòng)分析儀以外標(biāo)法測(cè)定試樣測(cè)定液的氨基酸含量。

2 結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精確吸取18種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.5 μmol/mL）20、40、80、160 μL和320 μL分別加入到5 mL容量瓶中，用0.02 mol/L鹽酸溶液定容至刻度，氨基酸分析儀分析，以峰面積和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線可知：以蛋氨酸（Met）為例，線性回歸方程y=1.5×106x+15 848；相關(guān)系數(shù)：R2=1.000 0。其他16種氨基酸相關(guān)系數(shù)R2均在0.999 0～1.000 0。在氨基酸濃度為0.2～3.2 nmol/20 μL范圍內(nèi)，氨基酸的質(zhì)量濃度與峰面積之間具有良好的線性關(guān)系，其最低檢出限為10 pmol（見(jiàn)圖1）。

圖1　蛋氨酸（Met）濃度與峰面積曲線圖

2.2儀器精密度

配制氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0 nmol/20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。峰面積RSD％均≤1.02％，符合儀器要求。

2.3試驗(yàn)方法精密度

取適量的燕窩樣品，按1.3的方法處理，分別測(cè)定其氨基酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　精密度實(shí)驗(yàn)表

2.4燕窩中氨基酸的分析研究

先對(duì)燕窩樣品進(jìn)行酸水解，再通過(guò)氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)天冬氨酸（Asp）、蘇氨酸（Thr）、絲氨酸（Ser）、谷氨酸（Glu）、脯氨酸（Pro）、甘氨酸（Gly）、丙氨酸（Ala）、纈氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、異亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、酪氨酸（Try）、苯丙氨酸（Phe）、賴氨酸（Lys）、組氨酸（His）和精氨酸（Arg）等16種氨基酸進(jìn)行測(cè)定，并算出氨基酸總量。圖中VIS2（440 nm）用于檢測(cè)脯氨酸，VIS1（570 nm）用于檢測(cè)除脯氨酸以外的其他氨基酸（見(jiàn)圖2和圖3）。

圖2　18種氨基酸混標(biāo)的分離色譜圖

圖3　燕窩中各氨基酸的分離色譜圖

在圖2中，將原裝氨基酸液體混標(biāo)稀釋后直接上機(jī)測(cè)定，可使其中的18種氨基酸（包括NH3）在32 min內(nèi)得到十分理想的分離效果。在圖3中，燕窩經(jīng)鹽酸水解后，其待測(cè)液中幾乎沒(méi)有雜質(zhì)干擾，且各氨基酸的峰形良好，出峰時(shí)間與峰形與標(biāo)準(zhǔn)均較一致，且各種氨基酸的分離效果良好，說(shuō)明此法可以較準(zhǔn)確地獲得各種水解氨基酸含量。利用氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)鹽酸水解后的8個(gè)樣品進(jìn)行分析測(cè)定，對(duì)其獲得的結(jié)果進(jìn)行整理，得到燕窩中各種氨基酸含量占氨基酸總量的比值及比值范圍，干燕窩的氨基酸含量大概在43 g/100 g～49 g/100 g，新鮮的冷凍燕窩在8 g/100 g左右。在各氨基酸組分中，天冬氨酸的含量最高，約占總量的11％；蛋氨酸的含量最低，約占0.8％；其他氨基酸的含量均在3％～9％的范圍里［5］（見(jiàn)表2和表3）。

表2　燕窩樣品中各氨基酸含量及總量表

表3　燕窩樣品中各氨基酸含量占氨基酸總量的比值及范圍表

3 結(jié)論

干燕窩的氨基酸總含量大概在43～49 g/100 g，新鮮的冷凍燕窩在8 g/100 g左右，因此可以通過(guò)檢測(cè)燕窩中氨基酸的含量初步判斷燕窩中是否添加非蛋白成分，過(guò)低或過(guò)高的含量都說(shuō)明存在異常情況。燕窩中各氨基酸比值的極差均小于1.0％，說(shuō)明燕窩中氨基酸組成相對(duì)穩(wěn)定。因此可以根據(jù)燕窩中各氨基酸的比值判斷燕窩中是否添加其他氨基酸或者蛋白質(zhì)成分。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB/T 5009.124-2003 食品中氨基酸的測(cè)定［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

［2］馮志強(qiáng)，周興起，莊俊鈺.氨基酸分析儀測(cè)定含乳飲料中游離甘氨酸的方法研究［J］.現(xiàn)代食品科技，2007，23（7）：89-91.

［3］王洪健，周興起，馮志強(qiáng)，等.氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定食品中?；撬岬姆椒ńⅲ跩］.現(xiàn)代食品科技，2012，28（3）：348-350.

［4］林潔茹，周 華，賴小平.燕窩研究概述［J］.中藥材，2006，29（1）：85-90.

［5］朱春紅，雍 韋，徐 厲，等.燕窩真假鑒定技術(shù)研究［J］.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2007，19（3）：206-208.

［6］馮志強(qiáng)，許銀葉，黃永連，等.氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定膠原蛋白保健品中羥脯氨酸的含量［J］.食品工業(yè)，2014，35（5）：248-250.

［7］林 丹，莊俊鈺，黃永連，等.白燕窩的氨基酸指紋圖譜構(gòu)建及識(shí)別研究［J］.食品工業(yè)，2014，36（7）：269-272.

Comparative Studies of Protein and Amino Acid Composition in the Cubilose

Huang Yonglian1，2， Chen Xiaojia1，2， Han Qiuzhen1，2
（1.Guangdong Food Industry Institute， Guangzhou 510308， China；2.Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station， Guangzhou 510308， China）

This article through the hydrochloric acid hydrolysis method to deal with samples of the cubilose by Hitachi L-8900 automatic amino acid analyzer to determine the amino acid content， analysis of different amino acid content in the cubilose and its composition. The res μLts showed that the total amino acid content of dry cubilose around 43 g/100 g ～49g/100 g， fresh frozen cubilose is controlled in 8 g/100 g，cubilose is relatively stable， the amino acid composition of the amino acid ratio， the poor are less than 1.0％. Therefore， the amino acid content and amino acid ratio can provide theoretical basis for the establishment of the system of amino acid monitoring technology system.

Amino acid； Protein； Cubilose

TS252.7

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.12.036