平菇子實(shí)體化學(xué)成分的分析研究

朱明洪　陳　屏　王　琦　李　玉（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心，吉林 長(zhǎng)春 130118）

平菇子實(shí)體化學(xué)成分的分析研究

朱明洪陳屏王琦李玉*
（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心，吉林 長(zhǎng)春 130118）

摘要利用正相硅膠、凝膠等分離材料結(jié)合高效液相色譜等分離技術(shù)對(duì)平菇子實(shí)體的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，并根據(jù)光譜數(shù)據(jù)分析鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。從平菇子實(shí)體中分離得到8個(gè)化合物，分別為（1）麥角甾醇、（2）麥角甾醇過氧化物、（3）22E，24R-5α，6α-環(huán)氧麥角甾-8（14），22-二烯-3β，7α-二醇、（4）煙酸、（5）腺苷、（6）D-甘露醇、（7）尿苷、（8）煙酰胺。其中化合物3和5為首次從該菌中分離得到。

關(guān)鍵詞平菇；環(huán)氧麥角甾；腺苷；煙酰胺

平菇［Pleurotus ostreatus （Jacq.） Quél.］，隸屬于 擔(dān)子 菌門 （ Basidomycota）、傘 菌綱（Agaricomycetes）、傘菌亞綱（Agaricomycetide）、側(cè)耳科（Pleurotaceae）、側(cè)耳屬（Pleurotus），英文名：Oyster Mushroom、Common Oyster Mushroom，中文別名：冬菇、北風(fēng)菌、糙皮側(cè)耳、貝形平菇、蛤蠣菇、蠔菌等［1］。在我國(guó)大陸大部分地區(qū)及臺(tái)灣、香港都有分布；在國(guó)外主要分布于歐洲、北美洲、亞洲、非洲、澳大利亞、南美洲等地［2］。

平菇子實(shí)體不僅含有蛋白質(zhì)、氨基酸、礦物質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)成分［3］，而且有抗腫瘤［4］、抗氧化活性［5］、降血糖降血脂［6］等多種功效；它還是“舒筋散”的成分之一［7，8］，可用來治療經(jīng)絡(luò)不疏、腰腿疼痛、手腳麻木等疾?。?］。合理開發(fā)這種價(jià)廉味美質(zhì)優(yōu)的食藥兼用真菌的重要意義不言而喻。國(guó)內(nèi)外對(duì)平菇的化學(xué)研究主要集中在多糖［10，11］、多酚［12］及甾類［13～15］等成分上，為深入開展平菇的化學(xué)成分研究，在前人研究的基礎(chǔ)上我們對(duì)人工栽培的平菇子實(shí)體化學(xué)成分進(jìn)行了分離及鑒定，結(jié)果如下。

1　實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1材料與試劑

平菇子實(shí)體購(gòu)自吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌高新技術(shù)園區(qū)，經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心李玉教授鑒定確證為平菇［Pleurotus ostreatus （Jacq.） Quél.］。所用試劑：石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、正丁醇、甲醇（以上試劑均為分析純，北京化工）；甲醇（色譜純，天津四友）；乙腈（色譜純，山東禹王）。

1.2儀器

KDM 調(diào)溫電熱套（山東鄄城華魯電熱儀器有限公司），RE52-AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），SHB-B95循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司），AL104電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司），WFH-203B三用紫外分析儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司），TH-Ⅱ型薄層加熱器（上?？普苌萍加邢薰荆?，shimadazuLC-6AD高效液相色譜分析儀（日本島津），shim-pack prep-ODS C18制備柱（20 mm×25 cm，15 μm），Bruker 600M AVANCEⅢ型核磁共振波普儀（瑞士Bruker公司）。

2　實(shí)驗(yàn)方法

取平菇干燥子實(shí)體5.2 kg，粉碎，95%乙醇提取3次，每次3 h，得提取液，過濾后減壓濃縮得流浸膏 496 g。將浸膏分散至水中，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各得萃取浸膏103.5 g、11.9 g和25.2 g。

石油醚層浸膏采用硅膠柱層析，用石油醚:乙酸乙酯（25︰1、9︰1、9︰1.5、9︰2、7︰3、6︰4、1︰1、0︰1）溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，分離得到5個(gè)部分Fr.1～5。Fr.2經(jīng)甲醇反復(fù)重結(jié)晶得化合物1（45 mg）。Fr.4經(jīng)石油醚︰二氯甲烷︰乙酸乙酯5︰4︰1硅膠柱洗脫后，再經(jīng)凝膠柱甲醇反復(fù)純化得化合物2（23 mg）。Fr.5經(jīng)石油醚︰乙酸乙酯6︰4→4︰6洗脫后再通過HPLC純化得化合物3（7.6 mg）。

乙酸乙酯層萃取浸膏采用三氯甲烷︰甲醇（200︰1、100︰1、50︰1、20︰1、10︰1、5︰1、2︰1、1︰1、0︰1）溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，分離得到8個(gè)部分Fr.1～8。Fr.6凝膠柱甲醇洗脫，HPLC純化得化合物4（12 mg）。

正丁醇層浸膏用乙酸乙酯、甲醇（1︰0→2 ︰1→1︰1→0︰1）溶劑系統(tǒng)梯度洗脫得到 6個(gè)部分Fr.1～6。Fr.3經(jīng)凝膠柱甲醇洗脫后，甲醇反復(fù)重結(jié)晶得化合物5（13.3 mg）。Fr.4經(jīng)凝膠柱甲醇洗脫，得化合物6（8.6 mg）。Fr.2經(jīng)凝膠柱甲醇洗脫，HPLC純化得化合物7（15.5 mg）和化合物8（8.6 mg）。

3　結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：無色針狀結(jié)晶（三氯甲烷）。1H-NMR （600 MHz，CDCl3） δ: 5.58 （1H，dd，J=5.27，1.88Hz，H-6），5.37-5.46（1H，m，H-7），5.21-5.26（1H，m，H-23），5.16-5.27（1H，m，H-22），3.65（1H，tt，J=11.25，4.19Hz，H-3），1.05 （3H，d，J=6.40Hz，H-21），0.96 （3H，s，H-19），0.93 （3H，d，J=6.78Hz，H-28），0.85（3H，d，J=6.78Hz，H-26），0.83（3H，d，J=6.78Hz，H-27），0.63（3H，s，H-18）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ: 39.34（C-1），32.23（C-2），70.68 （C-3），37.25 （C-4），140.10（C-5），119.81（C-6），116.52 （C-7），141.65 （C-8），46.51 （C-9），38.61（C-10），21.35 （C-11），40.53 （C-12），41.03（C-13），54.80（C-14），23.21 （C-15），28.46（C-16），56.01（C-17），12.26（C-18），16.50（C-19），40.57（C-20），21.30（C-21），135.78（C-22），132.23（C-23），43.05（C-24），33.31（C-25），19.84（C-26），20.13（C-27），17.80（C-28）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［16］，故鑒定此化合物為麥角甾醇［（22E，24R）-ergosta-5，7，22-trien-3β-ol］。

化合物1　麥角甾醇化學(xué)結(jié)構(gòu)式

化合物 2：無色針狀結(jié)晶（三氯甲烷）。1H-NMR （600 MHz，CDCl3） δ: 6.51 （1H，d，J=8.66Hz，H-7），6.24 （1H，d，J=8.66Hz，H-6），5.20-5.25 （1H，m，H-22），5.13-5.18（1H，m，H-23），3.97（1H，dt，J=11.11，5.65Hz，H-3），1.20-1.26（3H，m，H-19），1.00（3H，d，J=6.78Hz，H-21），0.91（3H，d，J=7.15Hz，H-28），0.89 （3H，s，H-18），0.83（3H，d，J=3.01Hz，H-26），0.82（3H，s，H-27）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3） δ: 37.19（C-1），30.35（C-2），66.65（C-3），34.92（C-4），82.34（C-5），135.40（C-6），130.94（C-7），79.61（C-8），51.36（C-9），37.17（C-10），20.83（C-11），39.58（C-12），44.77（C-13），51.91（C-14），23.61（C-15），28.80（C-16），56.45（C-17），13，07（C-18），18.36（C-19），39.87（C-20），21.07（C-21），135.62（C-22），132.54（C-23），43.00（C-24），33.27（C-25），19.82（C-26），20.12（C-27），17.74（C-28）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［17］，故鑒定此化合物為麥角甾醇過氧化物［24R-5α，8α-epidioxyergosta-6，22-dien-3β-ol］。

化合物2　麥角甾醇過氧化物化學(xué)結(jié)構(gòu)式

化合物3：白色針狀結(jié)晶（丙酮）。1H-NMR（600 MHz，CD3OD） δ: 5.23-5.25 （2H，m，H-22，23），4.41 （1H，d，J=1.83Hz，H-7），3.74-3.77（1H，m，H-3），3.05（1H，d，J=2.93Hz，H-6），0.90-0.91（3H，m，H-28），0.84-0.88（12H，m，H-18，26，27）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ: 32.13（C-1），28.66（C-2），69.46（C-3），40.61（C-4），68.19（C-5），62.84（C-6），66.06（C-7），126.78（C-8），40.91（C-9），38.09（C-10），20.55（C-11），37.30（C-12），44.36（C-13），153.07（C-14），25.89（C-15），33.61（C-16），58.39（C-17），18.77（C-18），17.09（C-19），40.76（C-20），21.99（C-21），137.07（C-22），133.57（C-23），44.61（C-24），34.59（C-25），20.31（C-26），20.70（C-27），18.43（C-28）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［18］，故鑒定此化合物為22 E，24 R-5α，6α-環(huán)氧麥角甾-8（14），22-二烯-3 β，7α-二醇［22E，24R-5α，6α-epoxyergosta-8（14），22-diene-3β，7α-diol］。

化合物 3　22E，24R-5α，6α-環(huán)氧麥角甾-8（14），22-二烯-3β，7α-二醇化學(xué)結(jié)構(gòu)式

化合物4　煙酸化學(xué)結(jié)構(gòu)式

化合物4：無色針狀結(jié)晶（甲醇）。1H-NMR （600 MHz，CD3OD） δ: 9.01 （1H，s，H-2），8.67 （1H，d，J=4.77Hz，H-6），8.28 （1H，d，J=7.70Hz，H-5），7.53（1H，dd，J=7.70，5.14Hz，H-4）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ: 167.95（-COOH），153.84 （C-2），128.89（C-3），139.43（C-4），125.43（C-5），151.45（C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［19］，故鑒定此化合物為煙酸（nicotinic acid）。化合物5：白色粉末（二甲基亞砜）。1H-NMR （600 MHz，DMSO） δ: 8.36（1H，s，H-8），8.15（1H，s，H-2），7.36（2H，br.s.，NH2-6），5.88（1H，d，J=6.24Hz，H-1'），5.46（2H，d，J=6.24Hz，-OH），5.21（1H，d，J=4.77Hz，-OH），4.62（1H，q，J=5.87Hz，H-2'），4.15（1H，d，J=3.30Hz，H-3'），3.97（1H，d，J=2.93Hz，H-4'），3.68（1H，dt，J=12.01，3.53Hz，H-5'），3.57（1H，td，J=7.79，3.48Hz，H-5'）；13C-NMR （150 MHz，DMSO） δ: 152.43（C-2），149.09（C-4），119.39（C-5），156.20（C-6），139.98（C-8），87.94（C-1'），73.46（C -2'），70.71（C -3'），85.94（C -4'），61.72（C -5'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［20］，故鑒定此化合物為腺苷（adenosine）。

化合物5　腺苷化學(xué)結(jié)構(gòu)式

化合物6　D-甘露醇化學(xué)結(jié)構(gòu)式

化合物6：無色簇狀結(jié)晶（水）。13C-NMR （150 MHz，D2O） δ: 63.2（C-1，6），70.7（C-2，5），69.2 （C-3，4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［21，22］，故鑒定此化合物為D-甘露醇（Mannitol）。化合物7：白色粉末（水）。1H-NMR （600 MHz，D2O） δ: 7.77（1H，d，J=7.91，H-6），5.84（1H，d，J=3.76Hz，H-1'），5.80（1H，d，J=7.91Hz，H-5），4.24-4.29（1H，m，H-2'），4.15（1H，t，J=5.08Hz，H-3'），4.05（1H，br.s.，H-4'），3.83（1H，d，J=12.42Hz，H-5'a），3.72（1H，dd，J=12.80，3.76Hz，H-5'b）；13C-NMR （150 MHz，D2O） δ: 153.00（C-2），168.04（C-4），102.33（C-5），141.58（C-6），89.43（C-1'），73.59（C-2'），69.41（C-3'），84.08（C-4'），60.75（C-5'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［23］，故鑒定此化合物為尿苷（uridine）。

化合物7　尿苷化學(xué)結(jié)構(gòu)式

化合物 8：白色粉末（水）。1H-NMR （600 MHz，D2O） δ: 8.82（1H，br.s.，H-2），8.61（1H，d，J=4.14Hz，H-6），8.13（1H，d，J=7.91，H-4），7.45-7.52（1H，m，H-5）；13C-NMR （150 MHz，D2O）δ: 170.72（-C=O），147.61 （C-2），129.25（C-3），136.41（C-4），124.17（C-5），151.80（C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［24］，故鑒定此化合物為煙酰胺（nicotinamide）。

4　結(jié)　論

化合物8　 煙酰胺化學(xué)結(jié)構(gòu)式

本實(shí)驗(yàn)利用正相硅膠、凝膠等分離材料結(jié)合高效液相色譜等分離技術(shù)從平菇子實(shí)體中分離得到8個(gè)化合物，其中麥角甾類化合物3個(gè)：麥角甾醇，麥角甾醇過氧化物和 22E，24R-5α，6α-環(huán)氧麥角甾-8（14），22-二烯-3β，7α-二醇。吡啶類衍生物2個(gè)：煙酸和煙酰胺。生物堿類化合物2個(gè)：腺苷和尿苷。22E，24R-5α，6α-環(huán)氧麥角甾-8（14），22-二烯-3β，7α-二醇和腺苷為首次從平菇中分離得到，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)尚未見報(bào)道。甾醇是菌物細(xì)胞膜的重要組成部分，大部分菌物中含有該類物質(zhì)，甾醇在菌物抗菌抗腫瘤等方面起到了重要作用，同時(shí)也是生產(chǎn)“可的松” “黃體酮”等藥物的前體物質(zhì)［25］。有研究發(fā)現(xiàn)22E，24R-5ɑ，6ɑ-環(huán)氧麥角甾-8（14），22-二烯-3β，7α-二醇能體外有效抑制 HCT15等癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)［26］，而煙酰胺是人體合成輔酶 I和輔酶 II的前體物質(zhì)，具有抗氧化、抗炎和DNA修復(fù)等多種功效，是細(xì)胞正常生命活動(dòng)必不可少的重要成分之一［27］。這些化合物的藥理活性表明，研究平菇對(duì)合理開發(fā)和利用該菌具有重要意義，有望從中獲得新的藥用資源。

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*為通訊作者

中圖分類號(hào)：S646

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2095-0934（2016）04-242-06

基金項(xiàng)目：公益行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)“作物秸稈基質(zhì)化利用”（201503137）；吉林省秸稈綜合利用技術(shù)創(chuàng)新平臺(tái)

作者簡(jiǎn)介：朱明洪（1990—），女，碩士，主要從事藥用真菌方面的研究，E-mail：996513924@qq.com

Research on chemical constituents of the fruiting bodies of Pleurotus ostreatus

Zhu MinghongChen PingWang QiLi Yu*
（Engineering Research Center of Chinese Ministry of Education for Edible and Medicinal Fungi，Jilin Agricultural University，Changchun，Jilin 130118，China）

AbstractTo investigate the chemical constituents of the fruiting bodies of Pleurotus ostreatus. The chemical constituents were separated and purified by chromatographic methods such as silica gel and Sephadex LH-20，HPLC etc.，and identified by spectroscopic analyses. Eight compounds were isolated and their structures were identified as （1） （22E，24R）-ergosta-5，7，22-trien-3β-ol，（2） 24R-5α，8α-epidioxyergosta-6，22-dien-3β-ol； （3） 22E，24R-5α，6α-epoxyergosta-8 （14），22-diene-3β，7α-diol； （4） nicotinic acid； （5） adenosine； （6） mannitol； （7） uridine； （8） nicotinamide. Compounds 3 and 5 were separated from the fruiting bodies of Pleurotus ostreatus for the first time.

KeywordsPleurotus ostreatus； epidioxyergosta； adenosine； nicotinamide