杜仲總黃酮對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用*

蔣真真，袁帶秀，胡　倩，劉雯雯

(吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南　吉首　416000)

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杜仲總黃酮對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用*

蔣真真，袁帶秀，胡倩，劉雯雯

(吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南吉首416000)

研究了杜仲總黃酮對(duì)四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用。通過腹腔注射CCl4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷，檢測(cè)小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量、肝臟中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量，考察杜仲總黃酮的保肝作用。結(jié)果表明：杜仲總黃酮能顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的ALT、AST活性與肝臟中的MDA含量，并能提高肝臟中的SOD與GSH活性。杜仲總黃酮對(duì)CCl4引起的急性肝損傷小鼠具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與抗氧化作用有關(guān)。

杜仲總黃酮；四氯化碳(CCl4)；保肝；急性肝損傷

杜仲屬杜仲科植物，為我國特有的單科目、單屬科、單種屬植物，在秦嶺以南山地、四川、貴州、湖南、湖北、江西等省、自治區(qū)均有分布。杜仲作為中藥已有兩千多年的歷史，可補(bǔ)肝腎、益筋骨、安胎，治療腰膝酸痛、小便瀝下等。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，杜仲中含有環(huán)烯醚萜苷類、黃酮類等成分，而且黃酮類成分含量較高[1]。本課題組成員前期研究了杜仲總黃酮的提取工藝及藥理活性，發(fā)現(xiàn)杜仲總黃酮具有良好的抗腫瘤作用[2]。在此基礎(chǔ)上，我們研究了杜仲總黃酮對(duì)CCl4造成的急性肝損傷的小鼠的保護(hù)作用，并探討其可能作用機(jī)制。

1　材　料

1.1藥物

杜仲總黃酮(含黃酮83.61%)，自制，臨用時(shí)用生理鹽水溶解；聯(lián)苯雙酯滴丸，浙江萬邦藥業(yè)股份有限公司，臨用時(shí)碾成粉末制成混懸液。

1.2試劑

四氯化碳(CCl4， 分析純， 湖南匯虹試劑有限公司)，以花生油稀釋成0.1%溶液；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒， 南京建成生物技術(shù)研究所。

1.3動(dòng)物

雄性昆明小鼠，體質(zhì)量18～22 g，清潔級(jí)，合格證號(hào)：SCXK(湘)2011-0003，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。

2　方　法

2.1動(dòng)物分組和造模方法

昆明小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為正常對(duì)照組，CCl4損傷模型組，聯(lián)苯雙酯組(150 mg/kg)，杜仲總黃酮高、低劑量組(200 mg/kg、50 mg/kg)。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，杜仲總黃酮高、低劑量組分別按200、50 mg/kg灌胃給藥；聯(lián)苯雙酯組按150 mg/kg灌胃給藥；正常對(duì)照組及CCl4損傷模型組以等體積生理鹽水灌胃，每天1次，連續(xù)7天，于末次給藥1 h后，正常組腹腔注射0.1 mL/10 g生理鹽水，其余各組均腹腔注射10 mL/kg 的0.1% CCl4花生油溶液，16 h后眼眶取血，分離血清，測(cè)定血清中ALT、AST的活性。取適量的肝組織用預(yù)冷的生理鹽水制備成10%的勻漿液，離心，取上清液，按試劑盒上的說明測(cè)定SOD、GSH活性和MDA含量。

2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3　結(jié)　果

3.1杜仲總黃酮對(duì)CCl4誘導(dǎo)肝損傷小鼠血清ALT和AST的影響

結(jié)果如圖1所示，與正常對(duì)照組比較，小鼠經(jīng)CCl4誘導(dǎo)16 h后，模型組血清中ALT、AST的活性顯著升高(P<0.01)，說明造模成功。與模型組比較，杜仲總黃酮各劑量組和聯(lián)苯雙酯組對(duì)CCl4誘導(dǎo)的肝損傷小鼠的ALT和AST活性升高均有顯著的降低作用(P<0.05或P<0.01)，杜仲總黃酮呈現(xiàn)良好的劑量依賴性。表明杜仲總黃酮對(duì)CCl4誘導(dǎo)的肝損傷有保護(hù)作用。

圖1　杜仲總黃酮對(duì)CCl4誘導(dǎo)肝損傷小鼠血清ALT和AST的影響

3.2杜仲總黃酮對(duì)CCl4誘導(dǎo)急性肝損傷小鼠肝臟中SOD、GSH活性和MDA含量的影響

表1杜仲總黃酮對(duì)CCl4誘導(dǎo)急性肝損傷小鼠肝臟中SOD、

Table 1Effects of total flavonoids of Eucommia ulmoides on SOD、GSH activity and MDA content of liver in acute liver

組別劑量/(mg·kg-1)SOD/(U/mgprot)GSH/(U/mgprot)MDA/(nmol/mgprot)正常對(duì)照組212.8±31.33d34.07±2.39d8.44±1.13d模型組89.81±29.24b17.25±3.79b24.05±2.62b聯(lián)苯雙酯組150169.5±21.51c29.75±4.16d12.15±1.73d杜仲總黃酮200148.1±26.9625.81±2.78ac14.90±1.89ad5094.70±24.14b21.42±2.90b19.45±2.93b

注：與正常組比較，aP<0.05，bP<0.01；與模型組比較，cP<0.05，dP<0.01。

由表1可知，小鼠經(jīng)CCl4誘導(dǎo)16 h后，模型組肝組織中SOD、GSH活性較正常對(duì)照組顯著降低，MDA含量顯著升高(P<0.01)；聯(lián)苯雙酯和杜仲總黃酮高、低劑量則能顯著提高CCl4誘導(dǎo)的肝損傷小鼠肝組織中SOD、GSH活性和降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)。

4　討　論

CCl4是一種常用的誘導(dǎo)化學(xué)性肝損傷模型的有毒類化學(xué)藥物之一，因其接觸后發(fā)病率高，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中易復(fù)制，能夠準(zhǔn)確反映肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，因而常常用來誘導(dǎo)急性肝損傷模型，篩選保肝藥物。CCl4引起肝損傷的主要作用機(jī)制是其在肝內(nèi)經(jīng)微粒體細(xì)胞色素P450分解活化，生成活潑的三氯甲基自由基和氯自由基，導(dǎo)致肝微粒體的脂質(zhì)過氧化[3]。由于脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)而抗氧化能力下降，導(dǎo)致自由基生成增加，通過氧化細(xì)胞膜脂質(zhì)，使肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受到損害[4]。文獻(xiàn)報(bào)道[5]，化合物中的酚羥基是抗脂質(zhì)過氧化作用的功能基團(tuán)，杜仲所含黃酮類化合物如山奈酚、槲皮素、紫云英甙等，均含有酚羥基結(jié)構(gòu)，因而發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物具有保肝護(hù)肝作用。

SOD是體內(nèi)清除自由基、抑制自由基反應(yīng)的物質(zhì)之一，它能抑制黃嘌呤脫氫酶轉(zhuǎn)化為黃嘌呤氧化酶，減少自由基的產(chǎn)生，減輕肝細(xì)胞的損傷，其活性降低則會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)氧自由基的積累，引發(fā)質(zhì)膜的過氧化作用，使膜結(jié)構(gòu)與功能受到損傷，最終導(dǎo)致細(xì)胞的死亡[6]。GSH是體內(nèi)一種重要的抗氧化劑，它能與體內(nèi)自由基結(jié)合生成氧化型谷胱甘肽，促進(jìn)自由基的清除。MDA是由于自由基攻擊生物膜中的多價(jià)不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過氧化，而形成的一種醛基物質(zhì)。MDA含量可反映體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，從而間接反映細(xì)胞損傷程度[7]。本實(shí)驗(yàn)中CCl4誘導(dǎo)急性肝損傷小鼠后，模型組SOD活性和GSH含量降低(P<0.01)，MDA含量升高(P<0.01)，說明小鼠肝臟受自由基攻擊后發(fā)生脂質(zhì)過氧化，并且在此過程中大量的抗氧化酶被消耗，使其抗氧化能力下降。給小鼠灌胃杜仲總黃酮后，各藥物組體內(nèi)SOD活性和GSH含量升高(P<0.01)，MDA含量降低(P<0.01)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，杜仲總黃酮具有一定的抗氧化作用，而杜仲總黃酮的保肝作用可能與這種抗氧化作用有關(guān)。

5　結(jié)　論

杜仲總黃酮可降低急性肝損傷小鼠血清中ALT和AST活性和肝組織中MDA含量，并提高肝組織中的SOD、GSH活性，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力達(dá)到保肝作用。

[1]劉靜，濮智穎，李愛玲，等.杜仲葉黃酮降血脂及抗氧化作用的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(11)：5631-5632.

[2]袁帶秀，舒麗霞，黃榮.杜仲總黃酮對(duì)荷瘤小鼠的抗腫瘤作用[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2014,19(12)：1332-1335.

[3]閆冰，蔡秀江，姚衛(wèi)峰，等.二至丸保肝活性成分群對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷保護(hù)作用研究[J].中國中藥雜志，2012,37(9)：1303-1305.

[4]Rouach H, Fataccioli V, Gentil M, et al. Effect of chronic ethanol feeding on lipid peroxidation and protein oxidation in relation to liverpathology[J]. Hepato-logy,1997,25(2):351-355.

[5]Husain S R，Cillard J，Cillard P.Hydroxy radical scavenging activity of flavonoids[J].Phytochemistry，1987，26(9)：2489-2491.

[6]孫曉晶，王允，王毅剛，等.蘇肝清對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J].中藥材，2010,33(1)：105-108.

[7]李鵬，魏曉霞，南婷婷，等.靈芝三萜酸對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J].中國醫(yī)藥藥學(xué)雜志，2013,33(23):1914-1917.

Study on the Protective Effect of Total Flavonoids of Eucommia Elmoides on Acute Liver Injury in Mice*

JIANGZhen-zhen，YUANDai-xiu，HUQian，LIUWen-wen

(College of Medicine, Jishou University, Hunan Jishou 416000, China)

To study the protective effects of total flavonoids of Eucommia ulmoides on acute liver injury in mice by CCl4, the experimental models of acute liver injury were induced by CCl4ip. The levels of ALT, AST in serum, the activities of SOD, GSH and MDA in liver homogenates were examined to observe the protective effects of total flavonoids of Eucommia ulmoides. Results showed that The total flavonoids of Eucommia ulmoides could reduce the activities of ALT, AST in serum and the contents of MDA in liver homogenate of acute liver injury mice models. It could increase the activity of SOD and GSH in liver homogenate. The total flavonoids of Eucommia ulmoides have protective effects on acute hepatic injury induced by CCl4in mice. The effects may be due to its antioxidant activity.

total flavonoids of Eucommia ulmoides; carbon tetrachloride; liver protective; acute hepatic injury

2015年生物與食品類專業(yè)大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練中心創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目(JDCX201523)資助。

蔣真真(1994-)，女，12級(jí)臨床本科生。

袁帶秀(1975-)，女，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，主要從事民族藥物藥理活性研究。

R285

A

1001-9677(2016)02-0069-02