膀胱黏膜毒蕈堿型膽堿能受體密度與前列腺術(shù)后膀胱痙攣的相關(guān)性研究

廖彬，黃世旺，蔡旌槐，陳偉義，陳益民

（廣東省潮州市人民醫(yī)院 泌尿外科，廣東 潮州 521000）

膀胱黏膜毒蕈堿型膽堿能受體密度與前列腺術(shù)后膀胱痙攣的相關(guān)性研究

廖彬，黃世旺，蔡旌槐，陳偉義，陳益民

（廣東省潮州市人民醫(yī)院 泌尿外科，廣東 潮州 521000）

目的探討膀胱黏膜毒蕈堿型膽堿能受體（M受體）M 2、M 3亞型的密度與前列腺電切術(shù)后膀胱痙攣的相關(guān)性。方法選取2012年5月-2015年5月醫(yī)院收治的良性前列腺增生（B P H）患者作為研究對(duì)象，將其分為合并膀胱過度活動(dòng)癥（OA B）觀察組和不合并OA B對(duì)照組，再將觀察組分為發(fā)生膀胱痙攣組及不發(fā)生膀胱痙攣組，比較各組M 2、M 3受體的密度及其相關(guān)性。結(jié)果觀察組術(shù)后膀胱痙攣的發(fā)生率高于對(duì)照組；觀察組M 2、M 3受體密度均低于對(duì)照組；觀察組中發(fā)生膀胱痙攣患者的M 3受體密度低于不發(fā)生膀胱痙攣患者的M 3受體密度。結(jié)論膀胱黏膜M 3受體密度與前列腺術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣存在相關(guān)性，提示M 3受體可能參與膀胱痙攣的發(fā)病機(jī)制。

毒蕈堿型膽堿能受體；膀胱黏膜；膀胱痙攣；良性前列腺增生；膀胱過度活動(dòng)癥

良性前列腺增生（beni g n prostatic hyperplasia，B P H）是引起中老年男性排尿障礙最為常見的一種良性疾病。經(jīng)尿道前列腺電切術(shù)（trans u rethral resection o f the prostate，T U R P）是治療B P H的金標(biāo)準(zhǔn)［1］。然而T U R P術(shù)后患者容易發(fā)生膀胱痙攣，膀胱痙攣會(huì)加重術(shù)后出血及患者痛苦，如何預(yù)防及控制術(shù)后膀胱痙攣是困擾泌尿外科醫(yī)生的難點(diǎn)。膀胱痙攣癥狀屬于膀胱過度活動(dòng)癥（o v eracti v e bladder，O A B）范疇，有研究顯示，約50%的B P H患者同時(shí)伴有O A B癥狀［2-3］，而B P H合并O A B患者行T U R P術(shù)后膀胱痙攣發(fā)生率高達(dá)20%～25%［4-5］。

目前毒蕈堿型膽堿能受體（以下簡(jiǎn)稱M受體）阻滯劑是治療O A B的一線用藥，能夠改善B P H患者的O A B癥狀，然而M受體阻滯劑如何緩解O A B癥狀的作用機(jī)制至今仍未明確［6］。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，B P H合并O A B患者膀胱黏膜的M受體中M2、M3亞型受體密度比無O A B癥狀的B P H患者明顯降低，且與其發(fā)生O A B癥狀的嚴(yán)重程度存在相關(guān)性［7］。那么，膀胱黏膜M2、M3亞型受體的密度是否與T U P R術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣存在相關(guān)性，M受體阻滯劑能否改善術(shù)后出現(xiàn)的膀胱痙攣癥狀，目前的相關(guān)報(bào)道較少。

1　資料與方法

1.1臨床資料

回顧性分析本院2012年5月-2015年5月收治的B P H患者共80例。將其分為B P H合并O A B組（觀察組）40例和B P H組（對(duì)照組）40例，使用O A B評(píng)分表，將尿急癥狀項(xiàng)目大于或等于2分定義為B P H合并O A B組，尿急癥狀項(xiàng)目0分者定義為B P H組。將觀察組中術(shù)后突然出現(xiàn)陣發(fā)性恥骨上區(qū)及尿道疼痛，膀胱沖洗管一過性受阻，伴或不伴有膀胱內(nèi)液體返流至沖洗管或從尿道管周圍流出（排除膀胱血塊堵塞）的患者定義為膀胱痙攣組［8］，不發(fā)生上述癥狀的患者定義為不發(fā)生膀胱痙攣組。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)①符合《2014版中國泌尿外科疾病診斷治療指南》中B P H的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②前列腺特異性抗原＜4μg/L；③膀胱殘余尿量＞100ml；④存在行前列腺電切術(shù)手術(shù)指征患者；⑤年齡60～80歲；⑥簽署知情同意書，同意加入本研究項(xiàng)目。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)①術(shù)后病理診斷考慮前列腺癌患者；②糖尿病患者；③嚴(yán)重尿路感染。尿常規(guī)白細(xì)胞≥強(qiáng)陽性（+++）或膿球≥弱陽性（+）的患者；④存在神經(jīng)源性膀胱功能障礙的患者；⑤近期曾使用M受體阻滯劑治療的患者；⑥患有精神疾病或存在語言障礙的患者。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本的獲取通過膀胱鏡活檢取得膀胱頂部的黏膜組織標(biāo)本。

1.3.2膀胱黏膜的大小及保存方法每位患者均取3塊組織，每塊組織約3mm×4 mm×4 mm（5～20 m g）。將取得的標(biāo)本放入組織凍存管，并迅速投入液氮中冷卻。手術(shù)結(jié)束后將標(biāo)本置入-80℃的冰箱冷凍保存。

1.3.3實(shí)驗(yàn)分析前的標(biāo)本處理將所有組織標(biāo)本做成病理切片，行蘇木精-伊紅染色確認(rèn)為膀胱黏膜組織。

1.3.4使用的試劑及儀器Tri z ol試劑（美國I n v itro g en公司），Thermo S cript R T-PC R S ystem（美國I n v itro g en公司），B rilliantⅡ S YB R g reen Q PC R k it（美國S trata g ene公司），實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶反應(yīng)（q R T-PC R）儀（美國S trata g ene公司），微量核酸蛋白定量?jī)x（美國Nanodrop公司），微量加樣器（德國Eppendor f公司），低溫高速離心機(jī)（德國Eppendor f公司），凝膠成像分析系統(tǒng)（法國V L公司），恒溫循環(huán)水浴箱（美國Thermo公司）等。

1.3.5q R T-P C R提取標(biāo)本總R N A，保證R N A純度及行R N A的完整性鑒定（見附圖），參照Thermoscript R T-PC R S ystem說明書，通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)獲得cDN A片段，設(shè)計(jì)好熒光定量PC R引物，在檢測(cè)M2 和M3受體的R N A的同時(shí)，利用引物對(duì)每個(gè)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，從而校正不同標(biāo)本之間因R N A總量或逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)效率差異等因素所致的數(shù)據(jù)差異。使用熒光定量?jī)x做數(shù)據(jù)分析，繪制熒光定量PC R標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)化M2、M3受體基因的拷貝數(shù)，最后將得到的標(biāo)化的M2和M3基因拷貝數(shù)作為M2和M3受體密度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4指標(biāo)觀察

附圖　RN A鑒定

測(cè)定所有患者膀胱黏膜M2、M3受體的密度及術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣的發(fā)生率，分析膀胱黏膜M2、M3受體的密度與術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣的相關(guān)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用S P SS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，M2及M3的R N A值用中位數(shù)和四分位間距表示［M（P25～P75）］，定性資料用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析，定量資料用兩獨(dú)立樣本的秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1術(shù)后膀胱痙攣發(fā)生率的比較

本研究80例手術(shù)均順利完成。觀察組與對(duì)照組術(shù)后膀胱痙攣的發(fā)生率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示B P H合并O A B患者術(shù)后更容易發(fā)生膀胱痙攣。見表1。

2.2M2、M3受體密度的比較

兩組M2、M3受體標(biāo)化的基因拷貝數(shù)應(yīng)用兩獨(dú)立樣本的秩和檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示B P H合并O A B患者M(jìn)2、M3受體密度比B P H患者降低。見表2。

2.3M 2、M 3受體密度與術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣的相關(guān)性

表1　兩組術(shù)后膀胱痙攣的發(fā)生率比較 （n=40）

表2　兩組M 2、M 3受體密度的比較?。踤=40，M（P25～P75）］

表3　觀察組中術(shù)后膀胱痙攣組與不發(fā)生膀胱痙攣組M 2、M 3受體密度比較　M（P25～P75）

為分析觀察組患者的M2、M3受體密度是否與術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣存在相關(guān)性，筆者將觀察組再分為術(shù)后膀胱痙攣組及術(shù)后不發(fā)生膀胱痙攣組，兩組的M2、M3受體密度比較見表3，B P H合并O A B患者無論術(shù)后是否發(fā)生膀胱痙攣，M2受體密度并不存在差異性，而M3受體密度卻存在差異性，提示M3受體可能參與術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣的發(fā)病機(jī)制。

3　討論

M受體分為M1～M5 5個(gè)亞型［9］。已有研究證實(shí)人類的膀胱逼尿肌中存在所有的M受體亞型，其中M2、M3受體的R N A占絕大多數(shù)［10］。既往的研究認(rèn)為，M受體阻滯劑通過阻斷膀胱逼尿肌M受體（主要是M2和M3亞型），抑制逼尿肌過度收縮［11］，從而改善B P H患者的O A B癥狀，但是無法解釋已抑制患者的逼尿肌收縮，卻很少有B P H患者因服用M受體阻滯劑而出現(xiàn)排尿困難加重甚至出現(xiàn)尿潴留。近年來的研究發(fā)現(xiàn)膀胱黏膜同樣存在M受體的5個(gè)亞型，其中主要的受體亞型仍然是M2、M3受體。那么M受體阻滯劑是否通過抑制膀胱黏膜的M受體，從而緩解O A B癥狀的呢？這是近年來研究的熱點(diǎn)。

關(guān)于膀胱黏膜M受體的報(bào)道較多。有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)膀胱黏膜上的M受體密度與膀胱逼尿肌的M受體密度相似［12］，刺激膀胱黏膜的M受體可導(dǎo)致尿路上皮源性的抑制因子釋放，從而調(diào)節(jié)逼尿肌的收縮［13-14］，膀胱黏膜的M受體在O A B的發(fā)生機(jī)制中起著重要作用［15-16］。M受體阻滯劑不僅作用于膀胱逼尿肌的M受體，而且對(duì)膀胱黏膜M受體的抑制也起著重要作用［17］。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，M受體阻滯劑的主要作用可能是通過抑制膀胱傳入通路上傳入神經(jīng)的活性，從而減弱膀胱黏膜對(duì)乙酰膽堿的敏感性［18-20］。以上的研究結(jié)果均提示膀胱黏膜上的M受體與O A B的發(fā)生密切相關(guān)。

那么，做為屬于O A B范疇的膀胱痙攣癥狀是否與M2、M3受體密度存在相關(guān)性呢？在本研究的觀察組中筆者發(fā)現(xiàn)膀胱痙攣患者的M3受體密度明顯降低，結(jié)合既往的研究發(fā)現(xiàn)膀胱黏膜對(duì)激動(dòng)M受體引起的的逼尿肌收縮反應(yīng)存在抑制作用［14-15］，筆者認(rèn)為，膀胱黏膜可能存在一種保護(hù)作用，在B P H合并O A B的病理狀態(tài)下，膀胱黏膜發(fā)揮其保護(hù)作用，通過減少M(fèi)受體的密度，降低膀胱黏膜對(duì)乙酰膽堿的敏感性，緩解O A B癥狀，然而B P H合并O A B的患者因膀胱黏膜中M受體的過度減少，特別是M3受體亞型的減少可能導(dǎo)致術(shù)后更容易發(fā)生膀胱痙攣，M3受體在前列腺電切術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣的發(fā)病機(jī)制中可能起著重要的作用。

綜上所述，M受體阻滯劑如何緩解O A B癥狀的作用機(jī)制是相當(dāng)復(fù)雜的。本研究中B P H合并O A B行經(jīng)尿道前列腺電切術(shù)術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣的患者膀胱黏膜的M3受體密度明顯下降，至少說明M3受體密度對(duì)術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣的影響。雖然目前仍然缺乏膀胱黏膜M受體在疾病狀態(tài)下是如何發(fā)揮作用的研究，但作為與前列腺電切術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣相關(guān)的M3受體卻可以作為研發(fā)新藥的靶點(diǎn)，高選擇性的M3受體阻滯劑對(duì)預(yù)防和控制經(jīng)尿道前列腺電切術(shù)術(shù)后發(fā)生膀胱痙攣可能起著更加有效的作用。

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（申海菊 編輯）

Correlation study between density of muscarinic receptors in bladder mucosa and bladder spasm after prostate surgery

Bin Liao，Shi-wang Huang，Jing-huai Cai，Wei-yi Chen，Yi-min Chen
（Department of Urology，the People's Hospital of Chaozhou City，Chaozhou，Guangdong 521000，China）

Objective To analyze the correlation of the bladder spasm after prostate surgery and the density of M2 and M3 muscarinic receptors in bladder mucosa.M ethods Patients with benign prostatic hyperplasia（BPH）in our hospital from May 2012 to May 2015 were enrolled as research objects and divided into observation group［BPH with overactive bladder（OAB）］and control group（BPH without OAB）.And then the observation group was further divided into bladder spasm subgroup and non-spasm subgroup.The density of M2 and M3 receptors were determined and their correlations with bladder spasm were analyzed.Results The rate of bladder spasm of the observation group was higher than that of the control group.The density of M2 and M3 muscarinic receptors of the observation group was lower than that of the control group.The density of M3 muscarinic receptor in the bladder spasm subgroup was lower than that in the non-spasm subgroup. Conclusions There is a correlation between bladder spasm after prostate surgery and density of M3 muscarinic receptor in bladder mucosa，suggesting M3 receptor may be involved in the pathogenesis of bladder spasm and it can be used as a target to design drugs for prevention and control of bladder spasm.

muscarinic receptor；bladder mucosa；bladder spasm；benign prostatic hyperplasia；overactive bladder

R 697.32

B

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.020

1005-8982（2016）15-0106-04

2015-12-28