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    不同營養(yǎng)液配方對山葡萄幼苗生長的影響

    2016-08-29 09:08:48王紅霞
    安徽農(nóng)業(yè)科學 2016年19期
    關(guān)鍵詞:繁殖系數(shù)莖段外植體

    王紅霞,廉 博

    (呼倫貝爾市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務中心,內(nèi)蒙古海拉爾 021008)

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    不同營養(yǎng)液配方對山葡萄幼苗生長的影響

    王紅霞,廉 博

    (呼倫貝爾市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務中心,內(nèi)蒙古海拉爾 021008)

    [目的] 研究山葡萄嫩莖段愈傷組織離體培養(yǎng)最佳配方。[方法]以山葡萄優(yōu)良母株新生枝條嫩梢為外植體,觀察山葡萄在IAA和NAA不同濃度下芽的分化、繼代與生根情況。[結(jié)果]在相同條件下,不同濃度IAA和NAA對山葡萄的芽分化、繼代與生根影響顯著。芽分化NAA濃度為0.05 mg/L的時候效果最好,愈傷組織中等,分化出的芽較多。繼代IAA濃度為 0.10 mg/L的時候效果最好,生長旺盛,繁殖倍數(shù)較高。生根NAA濃度為 0.10 mg/L的時候效果最好,根粗壯,生根率高。[結(jié)論]該研究結(jié)果可為山葡萄離體培養(yǎng)奠定基礎。

    山葡萄;IAA;NAA;芽分化

    山葡萄是葡萄科葡萄屬落葉藤本植物,其含有豐富的碳水化合物、蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì),生食可口,味酸甜,富含漿汁,是美味的山間野果[1]。山葡萄可作為葡萄酒釀造的原料,用其所釀的葡萄酒深紅艷麗,風味品質(zhì)甚佳。我國自20世紀50年代開始研究山葡萄人工馴化栽培并獲得成功。山葡萄苗木常規(guī)的繁殖方法有嫁接繁殖、壓條繁殖和扦插繁殖,但嫁接繁殖受接穗來源限制,壓條繁殖系數(shù)低,扦插繁殖不易生根[2]。筆者擬采用組織培養(yǎng)的手段來繁殖和培育山葡萄[3-10],篩選出適合的培養(yǎng)基,以期為山葡萄進一步快繁和大規(guī)模工廠化繁殖提供有效途徑。

    1 材料與方法

    1.1材料以野生山葡萄為材料,取其優(yōu)良母株新生枝條嫩梢作為外植體材料。

    1.2方法

    1.2.1外植體消毒。于2014年5月18日在中國農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院組培實驗室對野生山葡萄優(yōu)良母株新生枝條嫩梢進行愈傷組織誘導試驗,先用清水洗去外植體表面的殘留,再浸泡1~2 h,裝到無菌瓶中,放到無菌工作臺上,用70%酒精浸泡15 s,無菌水沖洗2~3次,用0.1%HgCl2進行表面消毒8~10 min,無菌水沖洗4~5次,在無菌條件下剝?nèi)[片與幼葉,切取0.3~0.5 m長的莖尖,接種于培養(yǎng)瓶中。

    1.2.2培養(yǎng)條件?;九囵B(yǎng)基為MS,加20 g/L蔗糖、720 g/L瓊脂,pH 5.6~5.8,培養(yǎng)溫度24 ℃,每日光照16 h,光強2 000 lx,濕度70%~80%。

    1.3試驗設計

    1.3.1不定芽誘導培養(yǎng)。 該試驗設4個處理:I.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.010 mg/L +LH 100 mg/L;II.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.005 mg/L +LH 100 mg/L;III.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.020 mg/L +LH 100 mg/L;IV.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.050 mg/L +LH 100 mg/L,每個處理重復3次,每次重復20瓶,每瓶接6個外植體。

    為了促進愈傷組織的形成和芽分化,可將接種于培養(yǎng)基I~IV上的外植體先放置于黑暗中處理48~60 h,然后置于2 000 lx光照下,經(jīng)35~40 d愈傷組織誘導出芽。

    1.3.2繼代培養(yǎng)。該試驗設4個處理:V.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.10 mg/L +GA 30.2 mg/L;VI.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.05 mg/L +GA 30.2 mg/L;VII.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.20 mg/L +GA 30.2 mg/L;VIII.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.50 mg/L +GA 30.2 mg/L,每個處理重復3次,每次重復20瓶。將高5 cm以上的山葡萄試管苗切段(帶1~2個側(cè)芽)接種于繼代培養(yǎng)基V~VIII上進行繼代增殖。當芽分化較多時,會影響莖的伸長,成苗率會降低,此時宜先將叢生芽切下接種于繼代培養(yǎng)基上,使其成苗后再進行切段培養(yǎng)。

    1.3.3生根培養(yǎng)。選擇NAA和IAA作為誘導生根的因素,該試驗設5個處理:IX.1/2 MS+NAA 0.10 mg/L;X.1/2 MS+NAA 0.20 mg/L;XI.1/2 MS+NAA 0.05 mg/L;XII.1/2 MS+IAA 0.10 mg/L;XIII.1/2 MS+IAA 0.05 mg/L,每個處理重復3次,每次重復20瓶。

    在繼代培養(yǎng)中,切下莖段可接種于生根培養(yǎng)基IX~XIII上進行生根培養(yǎng)。

    1.4調(diào)查指標及方法接種后,每隔5~8 d觀察并統(tǒng)計愈傷組織分化情況,生根數(shù)、生根率、根生長等指標。

    2 結(jié)果與分析

    2.1芽分化情況由表1可知,接種于培養(yǎng)基IV上的莖尖,愈傷組織中等,平均分化出芽5.0個;接種于培養(yǎng)基I上的莖尖,愈傷組織較大,平均分化出芽0.5個;接種于培養(yǎng)基III上的莖尖,愈傷組織過大,平均分化出芽1.5個;接種于培養(yǎng)基II上的外植體形成愈傷組織很小,外植體啟動困難,沒有分化出芽。

    表1不同營養(yǎng)液配方對芽分化的影響

    Table 1Effects of different nutrient solution formulas on the bud differentiation ofV.amurensis

    培養(yǎng)基Medi-um芽分化情況Buddifferentiation愈傷組織情況CallusI++ 較大II- 無 III+ 過大IV++++中等

    注:- 沒有生長;+生長緩慢;++生長較顯著;++++生長旺盛。

    Note:-,+,++,and ++++ mean not growing,growing slowly,growing obviously,and growing luxuriantly respectively.

    2.2莖段增殖從生長情況看,接種于培養(yǎng)基V上莖段或芽生長快,且同時生出粗壯根系,根與莖同時生長,苗形態(tài)正常,生長健壯,繁殖系數(shù)可達3.5~4.0;接種于培養(yǎng)基VII上的莖段或芽也長出較多根系,生長情況較好;接種于培養(yǎng)基VIII上的莖段或芽生長較差,繁殖系數(shù)較低。

    表2不同營養(yǎng)液配方對莖段生長情況的影響

    Table 2Effects of different nutrient solution formulas on the growth ofV.amurensis

    培養(yǎng)基Medium生長情況Growthstate繁殖系數(shù)ReproductioncoefficientV++++3.5~4.0VI+ 無VII+++ 2.0~3.0VIII++ 1.0~2.0

    注:- 沒有生長;+生長緩慢;++生長較顯著;++++生長旺盛。

    Note:-,+,++,and ++++ mean not growing,growing slowly,growing obviously,and growing luxuriantly respectively.

    2.3生根情況從生根情況看,以接種于培養(yǎng)基X上的莖段生根最多,但根細長,試管苗移栽時不易成活;接種于培養(yǎng)基XI、XII和XIII上的莖段生根數(shù)較少,根細弱;接種于培養(yǎng)基IX上的莖段生根數(shù)適中,根粗壯,生根率也高,該培養(yǎng)基為最佳配方,即莖段生根以1/2 MS+NAA 0.10 mg/L為宜。

    表3不同營養(yǎng)液配方對生根情況的影響

    Table 3Effects of different nutrient solution formulas on the root growth ofV.amurensis

    培養(yǎng)基Medium生根數(shù)Numberofroots∥條生根率Rootingrate∥%生長情況GrowthstateIX3~7100粗壯X10以上85細長XI2~575細長或粗壯XII2~370細、短XIII1~245細、短

    3 結(jié)論

    用莖尖組織培養(yǎng)方法進行山葡萄快速繁殖,可保持品種優(yōu)良性狀,縮短推廣時間。在進行莖尖誘導時,6-BA單獨使用效果要好。在1/2 MS+6-BA l.0 mg/L+NAA 0.050 mg/L+LH 100 mg/L培養(yǎng)基中,愈傷組織中等,分化出的芽較多。為了提高莖尖成活率,可適當將莖尖切至0.5~1.0 mm,但莖尖切取過大,繁殖系數(shù)會降低。繼代培養(yǎng)以1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 0.10 mg/L+GA 30.2 mg/L(肌醇用量為50 mg/L)為宜,此時生長旺盛,繁殖系數(shù)較高。生根培養(yǎng)以1/2 MS+NAA 0.10 mg/L為宜,此時根粗壯,生根率高。繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)同時進行,這樣可縮短試管苗培養(yǎng)時間,移栽易成活,繁殖系數(shù)一般很高。

    [1] 高金輝,王玲,張厚良,等.山葡萄組織培養(yǎng)方法[J].東北林業(yè)大學學報,2007,35(7):37-39.

    [2] 王軍,宋潤剛.野生果樹栽培及加工技術(shù)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)技術(shù)出版社,2001:13-14.

    [3] 王軍,葛玉香,包怡紅.東北山葡萄品種特性比較[J].東北林業(yè)大學學報,2004,32(1):29-31.

    [4] 鞏振輝,申書興.植物組織培養(yǎng)[M].北京:化學工業(yè)出版社,2007:68-69.

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    [8] 張炳華,張宏,孫連玉,等.葡萄組織培養(yǎng)快速繁殖的研究[J].煙臺果樹,1995(1):11-12.

    [9] 張劍俠,王賀飛,徐炎,等.中國野生葡萄組織培養(yǎng)研究[J].西北植物學報,2003,23(3):460-461.

    [10] 張建華,莊天明,孫占剛,等.華佳8號葡萄離體繁殖技術(shù)的研究[J].上海交通大學學報(農(nóng)業(yè)科學版),2004,22(3):309-312.

    Influences of Different Nutrient Solution Formulas on Seedling Growth ofVitisamurensisRupr.

    WANG Hong-xia, LIAN Bo

    (Hulunbeir Agricultural Technology Extension and Service Center, Hailar, Inner Mongolia 021008)

    [Objective] To discuss the optimum formula for the in vitro culture of tender stem callus ofVitisamurensisRupr. [Method] Newborn branch tops of good maternal plants ofV.amurensiswere used as explants, and the bud differentiation, subculture and root growth ofV.amurensiswere analyzed under different concentrations of IAA and NAA. [Result] Under the same conditions, different concentrations of IAA and NAA had obvious effects on the bud differentiation, subculture and root growth ofV.amurensis. When NAA concentration was 0.05 mg/L, callus was moderate, and there were more buds. As IAA concentration was 0.10 mg/L, it grew well, and the breeding rate was high. When NAA concentration was 0.10 mg/L, its roots were thick, and the rooting rate was high. [Conclusion] The study can lay the foundation for the in vitro culture ofV.amurensis.

    VitisamurensisRupr.; IAA; NAA; Bud differentiation

    王紅霞(1981-),女,內(nèi)蒙古烏蘭察布人,農(nóng)藝師,從事農(nóng)業(yè)推廣工作。

    2016-05-09

    S 663.1

    A

    0517-6611(2016)19-263-02

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