栗屬植物總苞鞣質(zhì)含量的測(cè)定*

張小慧　劉　霞　牛艷艷　席嘯虎

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【方藥縱橫】

栗屬植物總苞鞣質(zhì)含量的測(cè)定*

張小慧1劉霞1牛艷艷2席嘯虎1

目的測(cè)定栗屬植物干燥總苞的鞣質(zhì)含量。方法收集不同產(chǎn)地的栗屬植物總苞如板栗殼、茅栗殼、錐栗殼、日本栗殼，根據(jù)《中國(guó)藥典》附錄ⅩA磷鉬鎢酸-干酪素法測(cè)定鞣質(zhì)含量，采用紫外-可見分光光度法，在760nm波長(zhǎng)處測(cè)定總酚與不被吸附的多酚的吸光度。結(jié)果板栗殼和茅栗殼鞣質(zhì)含量較高，日本栗殼及錐栗殼鞣質(zhì)含量較低。結(jié)論建立的鞣質(zhì)含量測(cè)定方法準(zhǔn)確，可為栗屬資源總苞利用提供依據(jù)。

栗屬；板栗殼；鞣質(zhì)；含量測(cè)定

栗屬(Castanea Miller)是殼斗科(Fagaceae)中較小的屬，全世界有7種，廣泛分布于北半球溫帶地區(qū)[1]。其中，亞洲分布有4種：板栗(C.mollissima Bl.)、茅栗(C.seguinii Dode)和錐栗(C.henryi Rehd.& Wils.)分布在中國(guó)大陸，日本栗(C.crenata Sieb. &Cuce)分布在日本和朝鮮半島，在中國(guó)有引種。我國(guó)栗屬資源豐富，其果實(shí)及加工品享譽(yù)海內(nèi)外，而留下的帶刺總苞卻成廢棄物，未有效利用。古籍記載栗殼治消渴、痰火頭疬、火核、丹毒紅腫及小兒百日咳，《中藥辭海》記載，栗屬植物總苞有2種能入藥[2]，做為藥材使用的主要為板栗總苞(即板栗殼)。1977年版《中國(guó)藥典》首次收載板栗殼，并記載其性味歸經(jīng)為：甘、澀，平，歸肺經(jīng)。板栗殼化學(xué)成分主要有黃酮(或其苷類)、鞣質(zhì)、糖、多糖(或苷類)、有機(jī)酸等，其中黃酮類成分如棕色素有抗氧化和清除自由基作用[3]。板栗殼還具有降血糖功能[4]，改善高脂糖尿病模型大鼠的糖脂代謝紊亂[5]，有抗菌活性[6]，這些活性多認(rèn)為與鞣質(zhì)類物質(zhì)有關(guān)，有文獻(xiàn)報(bào)道從板栗殼分離出的鞣質(zhì)為沒(méi)食子酸及其乙酯[7]，而鞣質(zhì)一般認(rèn)為與“澀”味相關(guān)，符合中醫(yī)學(xué)對(duì)板栗殼的性味歸經(jīng)。因鞣質(zhì)具有多方面生物活性，如抗腫瘤、止血、止瀉、治燒傷等，鞣質(zhì)具有多方面的重要活性，而栗屬植物總苞的鞣質(zhì)含量未見報(bào)道，鑒于此，筆者收集了不同產(chǎn)地的栗屬植物總苞，按照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄ⅩB方法測(cè)定其鞣質(zhì)含量，為進(jìn)一步研究利用栗屬資源總苞提供依據(jù)。

1　材料

1.1藥材板栗殼、茅栗殼、錐栗殼、日本栗殼各2批，分別為秋季果實(shí)成熟時(shí)采摘。本文樣品的收集根據(jù)栗殼總苞基底疤痕數(shù)目：板栗殼斗多縱向裂開成2～4瓣，基底有2～3個(gè)堅(jiān)果脫落后的疤痕；茅栗殼斗較小，基底有2～3個(gè)堅(jiān)果脫落后的疤痕；錐栗殼基底有1個(gè)堅(jiān)果脫落后的疤痕；日本栗殼總苞有3～7個(gè)堅(jiān)果脫落后的疤痕，日本栗殼較板栗殼大，其橫切面厚度較板栗殼小。樣品信息見表1。

1.2試劑沒(méi)食子酸：中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0831-9501；干酪素：中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)：98032；碳酸鈉、鎢酸鈉、 鉬酸鈉、硫酸鋰、鹽酸、磷酸、溴均為分析純。

1.3儀器752N紫外可見分光光度計(jì)：上海精密科學(xué)儀器有限公司。

2　方法與結(jié)果

2.1試劑配制①磷鉬鎢酸試液：取鎢酸鈉100 g，鉬酸鈉25 g，加水700ml使溶解，加鹽酸100ml、磷酸50ml，加熱回流10小時(shí)，放冷，再加硫酸鋰150 g，水50ml和溴0.2ml，煮沸除去殘留的溴(約15分鐘)，冷卻，加水稀釋至1000ml，濾過(guò)，即得。本液不得顯綠色(如放置后變?yōu)榫G色，可加溴0.2ml，煮沸除去多余的溴即可)。②10% ( 質(zhì)量濃度) Na2CO3溶液：取無(wú)水碳酸鈉10.5 g，加水使溶解成100ml，即得。

2.2沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液的制備精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品50mg，置100ml棕色量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含沒(méi)食子酸0.05mg)

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，分別置25 ml 棕色量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1ml，再分別加水11.5、11.0、10.0、9.0、8.0、7.0 ml，用10%(質(zhì)量濃度)Na2CO3溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30 min。以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程A=120.87C+ 0.0625，r=0.998。

2.4供試品溶液的制備取栗殼粉末1 g，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加水60ml，放置過(guò)夜，超聲處理10分鐘，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置使沉淀，濾過(guò)，棄去初濾液30ml，精密量取續(xù)濾液20ml，置100ml棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5樣品測(cè)定法2批板栗殼、2批茅栗殼，2批日本栗殼，2批錐栗殼粉末，按“2.4”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液，并測(cè)定總酚和不被吸附的多酚質(zhì)量，以計(jì)算鞣質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)。每個(gè)樣品平行處理兩次，結(jié)果取平均值。

2.6總酚的測(cè)定精密量取供試品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1ml”起，加水10ml，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中沒(méi)食子酸的質(zhì)量(mg)，計(jì)算即得。

表1　栗屬植物總苞鞣質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

目前對(duì)栗屬植物帶刺總苞的研究存在化學(xué)成分研究較少、有效部位不明確、藥效研究不充分的問(wèn)題，已有的藥效研究認(rèn)為其功效主要與鞣質(zhì)有關(guān)，本文初步測(cè)定了其鞣質(zhì)含量，結(jié)果顯示栗屬植物的板栗殼與茅栗殼含有較高的鞣質(zhì)含量，這為提取純化鞣質(zhì)，用較純的部位進(jìn)一步研究該屬植物鞣質(zhì)特有的功效提供依據(jù)。

[1]Johnson G P. Revision of Castanea sect. Balanocastanon(Fagaceae)[J]. J Arn Arb, 1988, 69(1): 25-49.

[2]中藥辭海編審委員會(huì).中藥辭海第二卷[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1996:2014-2015.

[3]劉平,李云雁,羅淵,等.板栗殼棕色素對(duì)活性氧自由基的清除作用[J].食品科技，2008，2(2):175-178.

[4]劉海鑫,蔣衛(wèi)國(guó),宋成武,等.板栗對(duì)糖尿病小鼠降血糖作用的研究[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2012,25(1):57-60.

[5]陳思玉,劉玉軍.板栗殼斗總酚對(duì)高脂糖尿病大鼠血糖和血脂水平的影響[J].心理醫(yī)生雜志，2012，4(214):456-457.

[6]吳龍?jiān)?凌桂生, 許振朝.板栗殼浸膏的抗菌抗炎作用及對(duì)胃腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響[J].廣西中醫(yī)藥，2002, 25(4):54-56.

[7]吳龍?jiān)?凌桂生,許學(xué)健,等.板栗毛殼的抗菌活性成份[J].中草藥，1991,22(8):370-371.

房事不遠(yuǎn)，則耗其精。勞動(dòng)不戒，則耗其力。言語(yǔ)不省，則耗其氣，此邪之自內(nèi)受者也。起居不謹(jǐn)則風(fēng)露侵，飲食不節(jié)則腸胃損，此邪之自外入者也。健人有此，不免于病。

——明·王紹隆《醫(yī)燈續(xù)焰·病家須知》

Determination on the Content of Tannin in Castanea Mill Involucre

ZHANG XiaohuiLiu xiaNIU YanyanXi Xiaohu

(1.Pharmacy Department, Shanxi Province Hospital of Traditional Chinese Medicine, Shanxi, Taiyuan 030012, China;2.Central Laboratory, Shanxi Province Institute of Traditional Chinese Medicine, Shanxi, Taiyuan 030012, China)

ObjectiveTo determine the tannins content of dry involucre in plants of Castanea Mill. MethodsCollecting involucre of four kinds of plants C. mollissima Bl., C. seguinii Dode, C. henryi Rehd. & Wils, C. crenata Sieb. & Cuce from different growing area, visible spectrophotometry was used to determine the tannin content. ResultsC. mollissima shell and C. seguinii Dode shell had high tannin content, and C. crenata Sieb. &Cuce and C. henryi Rehd.& Wils. had low tannin content. ConclusionThe method of deterring tannin content is accurate. It can provide basis for use chestnut resources involucre.

Castanea Mill; Chestnut shell; Tannin; Content determination

山西省中藥材、中藥飲片地方標(biāo)準(zhǔn)研究(No.2013004A)

1.山西省中醫(yī)院藥劑科(太原 030012)；2.山西省中醫(yī)藥研究院中心實(shí)驗(yàn)室(太原 030012)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.14.066

1003-8914(2016)-14-2126-02

(本文校對(duì)：王世偉2015-11-14)