蛋白基因產(chǎn)物9.5與宮頸癌臨床病理表現(xiàn)的關(guān)系及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究*

靳 榮， 李紅芳， 張立東

(1天津市第五中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，天津300450;2蘭州市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，甘肅蘭州730050;3天津市第五中心醫(yī)院病理科，天津300450)

蛋白基因產(chǎn)物9.5與宮頸癌臨床病理表現(xiàn)的關(guān)系及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究*

靳 榮1△， 李紅芳2， 張立東3

(1天津市第五中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，天津300450;2蘭州市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，甘肅蘭州730050;3天津市第五中心醫(yī)院病理科，天津300450)

目的:研究蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)在宮頸癌病理標(biāo)本中的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，并初步探討利用PGP9.5-siRNA靶向治療宮頸癌的潛在價(jià)值。方法:回顧性分析2008年1月～2015年6月在天津市第五中心醫(yī)院婦科及天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院接受手術(shù)治療并經(jīng)病理確診的180例宮頸癌患者臨床資料。所有患者宮頸癌病理標(biāo)本制作病理切片并進(jìn)行SP法免疫組化染色。以PGP9.5染色后評(píng)分為依據(jù)將患者分為PGP9.5高表達(dá)組和PGP9.5低表達(dá)組。觀察2組患者年齡、HPV感染、病理分級(jí)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、累及脈管和臨床分期等臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系。采用Kaplan-Meier法和log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析。采用PGP9.5-siRNA、NC-siRNA、PGP9.5真核表達(dá)質(zhì)粒和對(duì)照空質(zhì)粒按照脂質(zhì)體載體試劑說明書轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞，設(shè)立si-PGP9.5組、NC組、PGP9.5組和vector組。同時(shí)設(shè)立SiHa細(xì)胞空白對(duì)照(control)組。分別采用Western blot實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)分析5組細(xì)胞PGP9.5蛋白的表達(dá)水平、克隆形成能力和侵襲能力。結(jié)果: 2組患者病理分級(jí)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、累及脈管和臨床分期等臨床病理參數(shù)與PGP9.5表達(dá)水平有關(guān)。PGP9.5高表達(dá)組患者3、5年總體生存率明顯低于PGP9.5低表達(dá)組患者。與control組相比，si-PGP9.5組Si-Ha細(xì)胞中PGP9.5蛋白的表達(dá)量明顯降低，克隆形成數(shù)量明顯減少，過膜細(xì)胞數(shù)量明顯減少;PGP9.5組SiHa細(xì)胞中PGP9.5蛋白的表達(dá)量明顯升高，克隆形成數(shù)量明顯增多，過膜細(xì)胞數(shù)量明顯增加。結(jié)論:PGP9.5蛋白高表達(dá)預(yù)示宮頸癌患者預(yù)后不良，可能成為預(yù)測宮頸癌患者預(yù)后的良好指標(biāo)，對(duì)其表達(dá)進(jìn)行抑制可能實(shí)現(xiàn)對(duì)宮頸癌的有效基因治療。

宮頸癌;克隆形成;細(xì)胞侵襲;小干擾RNA;蛋白基因產(chǎn)物9.5

宮頸癌是婦產(chǎn)科最常見惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害患者健康［1］。雖然宮頸細(xì)胞學(xué)篩查的普遍應(yīng)用使宮頸癌的發(fā)病率和死亡率明顯下降，但宮頸癌的死亡率仍占據(jù)婦科惡性腫瘤首位［2］。因此，積極探索宮頸癌相關(guān)的致病基因，以發(fā)現(xiàn)有效的早期診斷和基因治療指標(biāo)是目前研究的重要內(nèi)容［3］。研究發(fā)現(xiàn)，泛素水解酶家族成員蛋白基因產(chǎn)物9.5(protein gene product 9.5，PGP9.5)在多種惡性腫瘤中出現(xiàn)異常高表達(dá)，抑制其表達(dá)水平可能實(shí)現(xiàn)對(duì)相應(yīng)腫瘤生長的抑制［4-6］。然而，PGP9.5表達(dá)水平與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系及其意義之間的關(guān)系尚未見報(bào)道。本研究采用免疫組化法檢測PGP9.5在宮頸癌病理標(biāo)本中的表達(dá)情況，研究其與宮頸癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，并初步探討利用PGP9.5 siRNA靶向治療宮頸癌的潛在價(jià)值。

材料和方法

1 材料來源

1.1 病理標(biāo)本及臨床資料來源 回顧性分析2008 年1月～2015年6月在天津市第五中心醫(yī)院婦科及天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院接受手術(shù)治療并經(jīng)病理確診的180例宮頸癌患者臨床資料。所有患者均簽署由醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的患者知情同意書，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)規(guī)定。患者平均年齡(49±16)歲，均有3年以上性生活史，其中鱗癌128例，腺癌52例。腫瘤分期FIGO早期(Ⅰ～ⅡA期)115例，F(xiàn)IGO晚期(ⅡB～Ⅳ期)65例［7-8］。對(duì)FIGO早期患者采用根治性手術(shù)治療，術(shù)式采用次廣泛或廣泛子宮切除加盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù);對(duì)FIGO晚期患者進(jìn)行輔助放療，同步放化療等治療［9］。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)局限于宮頸部位的宮頸癌，未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶;(2)標(biāo)本切取前未接受放療、化療等治療;(3)心肺等重要臟器功能可以耐受手術(shù);(4)術(shù)后堅(jiān)持接受隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)術(shù)前曾接受放療、化療;(2)病歷資料不完全，或不能配合隨訪。所有患者術(shù)后均接受2個(gè)月1次的電話或門診隨訪，隨訪截止日期為2015年9月30日或失訪、死亡。

1.2 細(xì)胞及主要試劑 宮頸癌SiHa細(xì)胞株購自ATCC，由天津市第五中心醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室保存。兔抗人PGP9.5抗體和β-actin蛋白抗體購自Novus Biologicals;EnVision免疫組化試劑盒和組織HE染色試劑盒購自Gene Tech。PGP9.5小分子干擾RNA (PGP9.5-siRNA)、陰性對(duì)照(negative control，NC) siRNA(NC-siRNA)、PGP9.5真核表達(dá)質(zhì)粒及其對(duì)照空質(zhì)粒由廣州愛科生物技術(shù)有限公司合成。

2 研究方法

2.1 免疫組化法檢測PGP9.5的表達(dá) 將所有患者宮頸癌病理標(biāo)本及癌旁正常宮頸組織制作4 μm厚度病理切片，嚴(yán)格按照Gene Tech的EnVision免疫組化試劑盒和HE染色試劑盒說明書進(jìn)行SP法免疫組化染色。每張免疫組化切片在光鏡下(×400)隨機(jī)選取3個(gè)視野拍照保存后，根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分率對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析。由2位病理學(xué)醫(yī)生獨(dú)立進(jìn)行免疫組化染色評(píng)分后取均值。以PGP9.5染色后細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆?；驁F(tuán)塊判斷為染色陽性［10］。綜合染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行評(píng)分:染色強(qiáng)度未著色者計(jì)0分，著色淺者計(jì)1分，中度著色者計(jì)2分，強(qiáng)染色者計(jì)3分;陽性細(xì)胞數(shù)＜25%計(jì)0分，25%～50%計(jì)1分，51%～75%計(jì)2分，＞75%為3分。每張切片計(jì)分=染色強(qiáng)度+陽性細(xì)胞百分率。每張切片3個(gè)視野的平均分?jǐn)?shù)作為該切片的最終評(píng)分。以評(píng)分＞3.5的患者作為PGP9.5高表達(dá)組，以評(píng)分為0或≤3.5的患者作為PGP9.5低表達(dá)組。

2.2 觀察患者PGP9.5表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系 觀察2組患者年齡、HPV感染、病理分級(jí)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、累及脈管和臨床分期等臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系?；颊咝g(shù)后接受隨訪并記錄存活情況。隨訪截止日期為2015年9月30日或失訪、死亡。

2.3 SiHa細(xì)胞的培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及分組 復(fù)蘇培養(yǎng)SiHa宮頸癌細(xì)胞株，用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長期的SiHa細(xì)胞，采用PGP9.5-siRNA(si-PGP9.5)、NC-siRNA、PGP9.5真核表達(dá)質(zhì)粒和對(duì)照空質(zhì)粒(vector)按照脂質(zhì)體載體試劑說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染，設(shè)立si-PGP9.5組、NC組、PGP9.5組和vector組。同時(shí)用未轉(zhuǎn)染的SiHa細(xì)胞設(shè)立空白對(duì)照(control)組。

2.4 蛋白印跡法檢測5組細(xì)胞中功能蛋白的表達(dá)

分組轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞48 h后收集細(xì)胞提取蛋白，按照常規(guī)方法進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)，分析PGP9.5和β-actin蛋白的表達(dá)。每組細(xì)胞實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.5 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測克隆形成能力 取分組轉(zhuǎn)染48 h后的SiHa細(xì)胞。各組SiHa細(xì)胞制備單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度，分別取400個(gè)細(xì)胞接種于6孔板中，并均勻分散細(xì)胞。于常規(guī)培養(yǎng)條件中培養(yǎng)14 d后固定克隆，結(jié)晶紫染色。光鏡下計(jì)數(shù)每孔形成的細(xì)胞克隆數(shù)。設(shè)定細(xì)胞數(shù)大于60個(gè)為1個(gè)有效克隆。每組細(xì)胞實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.6 Transwell法檢測細(xì)胞侵襲能力 Transwell小室每室中加入50 μL預(yù)稀釋的Matrigel。在溫箱中37℃孵育2 h使其凝固。取分組轉(zhuǎn)染48 h后的Si-Ha細(xì)胞，接種入Transwell小室上室。下室加入含血清培養(yǎng)基380 μL。常規(guī)培養(yǎng)10 h后取出小室，去除未過膜細(xì)胞后多聚甲醛固定。使用結(jié)晶紫對(duì)過膜細(xì)胞進(jìn)行染色，以穿過小孔的細(xì)胞數(shù)量代表侵襲能力。每組細(xì)胞實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，各組均數(shù)間的兩兩比較采用SNK法。2組患者的年齡、HPV感染、病理分級(jí)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、累及脈管和臨床分期等數(shù)據(jù)的比較采用2檢驗(yàn);生存分析采用Kaplan-Meier法和log-rank檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 宮頸癌組織PGP9.5的表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

高、低表達(dá) PGP9.5組患者宮頸癌組織的PGP9.5免疫組化染色結(jié)果及其對(duì)應(yīng)標(biāo)本的HE染色結(jié)果如圖1所示，典型高表達(dá)組宮頸癌標(biāo)本可見腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)棕色染色，而低表達(dá)組標(biāo)本棕色或黃色染色不明顯。本研究同時(shí)對(duì)正常宮頸癌組織進(jìn)行PGP9.5免疫組化染色，均為染色陰性或黃色染色不明顯。由表1可見2組患者病理分級(jí)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、累及脈管和臨床分期等臨床病理參數(shù)與PGP9.5表達(dá)水平有關(guān)(P＜0.05)。

Figure 1.Immunohistochemical(IHC)staining and hematoxylin-eosin(HE)staining in cervical cancer tissues of PGP9.5 high expression group and PGP9.5 low expression group(×400).圖1 高表達(dá)PGP9.5組和低表達(dá)PGP9.5組宮頸癌組織免疫組化染色和HE染色結(jié)果

2 宮頸癌組織PGP9.5的表達(dá)與患者術(shù)后總體生存的關(guān)系

所有患者均接受隨訪，隨訪時(shí)間為1～30個(gè)月，中位隨訪時(shí)間27個(gè)月。PGP9.5高表達(dá)組患者3、5年總體生存率分別為71.91%和66.10%，PGP9.5低表達(dá)組患者3、5年總體生存率分別為90.84%和79.93%，PGP9.5高表達(dá)組患者的總體生存率明顯低于PGP9.5低表達(dá)組患者(P＜0.05)，見圖2。

3 SiHa細(xì)胞PGP9.5蛋白含量的比較

與control組相比，si-PGP9.5組 SiHa細(xì)胞中PGP9.5蛋白的表達(dá)量明顯降低，PGP9.5組SiHa細(xì)胞中PGP9.5蛋白的表達(dá)量明顯升高，而NC組和vector組的表達(dá)量無明顯差別?？梢妔i-PGP9.5組細(xì)胞的PGP9.5蛋白表達(dá)受到抑制，PGP9.5組細(xì)胞的PGP9.5蛋白表達(dá)受到促進(jìn)，見圖3。

4 PGP9.5對(duì)SiHa細(xì)胞克隆形成能力的影響

與control組相比，轉(zhuǎn)染48 h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的si-PGP 組SiHa細(xì)胞克隆形成數(shù)量明顯減少，且形成的克隆細(xì)胞數(shù)量普遍較少;PGP9.5組SiHa細(xì)胞克隆形成數(shù)量明顯增多，且形成的克隆細(xì)胞數(shù)量普遍較多。但是NC組和vector組的克隆形成數(shù)量與control組相比無明顯減少?？梢妔i-PGP9.5組細(xì)胞的增殖能力受到抑制，PGP組細(xì)胞的增殖能力受到促進(jìn)，見圖4。

表1 宮頸癌組織PGP9.5的表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系Table 1.The expression of PGP9.5 in cervical cancer and its relationship with clinicopathological parameters［n(%of total)］

Figure 2.Overall survival of the patients in PGP9.5 high expression group and PGP9.5 low expression group(Kaplan-Meier analysis).圖2 高表達(dá)PGP9.5組和低表達(dá)PGP9.5組的生存曲線比較

Figure 3.The protein expression of PGP9.5 in the SiHa cells with different treatments.Mean±SD.n=3.*P＜0.05 vs control group.圖3 不同處理對(duì)SiHa細(xì)胞PGP9.5蛋白表達(dá)的影響

5 PGP9.5對(duì)SiHa細(xì)胞侵襲能力的影響

如圖5所示，與control組相比，siRNA轉(zhuǎn)染48 h 后si-PGP9.5組SiHa細(xì)胞過膜細(xì)胞數(shù)量明顯減少，而PGP9.5組SiHa細(xì)胞過膜細(xì)胞數(shù)量明顯增多。但是NC組和vector組過膜細(xì)胞數(shù)量與control組相比無明顯差別?？梢妔i-PGP9.5組細(xì)胞的侵襲能力受到抑制，PGP組細(xì)胞的侵襲能力受到促進(jìn)。

Figure 4.The effect of PGP9.5 on the ability of colony formation in the SiHa cells.Mean±SD.n=3.*P＜0.05 vs control group.圖4 PGP9.5對(duì)SiHa細(xì)胞克隆形成能力的影響

Figure 5.The effect of PGP9.5 on invasion ability of SiHa cells.Mean±SD.n=3.*P＜0.05 vs control group.圖5 PGP9.5對(duì)SiHa細(xì)胞侵襲能力的影響

討論

PGP9.5基因由2 450個(gè)堿基組成，其表達(dá)產(chǎn)物為含有212個(gè)氨基酸的蛋白，在神經(jīng)元中表達(dá)豐富，其作為泛素水解酶系統(tǒng)的重要成員，通過介導(dǎo)泛素－蛋白酶體系統(tǒng)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期［11］。在人體其它組織中，PGP9.5的異常表達(dá)影響多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲、轉(zhuǎn)移［12-13］。研究發(fā)現(xiàn)PGP9.5的表達(dá)水平與胃癌和結(jié)腸癌的發(fā)生、分化程度、侵襲程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)關(guān)系［14-17］。在胰腺癌中，PGP9.5表達(dá)水平也與胰腺癌的病理分期及進(jìn)展程度呈正相關(guān)，并與術(shù)后生存率呈負(fù)相關(guān)［18］。PGP9.5在肺癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織及良性病變組織，其異常表達(dá)在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用［19］。在皮膚鱗狀細(xì)胞癌的研究同樣發(fā)現(xiàn)，PGP9.5在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)水平明顯高于正常皮膚組，并且其在低分化鱗癌組中的表達(dá)水平明顯高于在高分化鱗癌組中的表達(dá)水平［20-21］。然而，PGP9.5與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系卻較少研究［22］。

本研究檢測分析了180例宮頸癌患者腫瘤組織標(biāo)本中PGP9.5蛋白的表達(dá)水平，以免疫組化評(píng)分為依據(jù)將患者分為PGP9.5高表達(dá)組和PGP9.5低表達(dá)組。在對(duì)2組患者的臨床病理學(xué)指標(biāo)進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)，PGP9.5高表達(dá)組患者病理分級(jí)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、累及脈管和臨床分期等臨床病理參數(shù)表現(xiàn)較差，且其術(shù)后3年和5年總體生存率較低，預(yù)后不良。說明宮頸癌患者腫瘤組織中PGP9.5表達(dá)的上調(diào)可能促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，并影響了宮頸癌患者的術(shù)后生存。國內(nèi)孔祥菊等［23］在子宮內(nèi)膜癌患者中的研究也得出相似結(jié)論，發(fā)現(xiàn)PGP9.5的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)類型無關(guān)，認(rèn)為PGP9.5可作為子宮內(nèi)膜癌的標(biāo)記物。劉立偉等［24］對(duì)乳腺癌患者所做的研究也發(fā)現(xiàn)，PGP9.5的表達(dá)與乳腺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。所以，檢測PGP9.5可能是一種有具有輔助監(jiān)測宮頸癌發(fā)生發(fā)展，并進(jìn)行預(yù)后評(píng)價(jià)的有效手段。

在臨床研究的基礎(chǔ)上，本研究應(yīng)用RNA干擾技術(shù)將合成的PGP9.5-siRNA轉(zhuǎn)染SiHa宮頸癌細(xì)胞，通過Western blot實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞中的PGP9.5蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)RNA干擾實(shí)現(xiàn)了確切的抑制PGP9.5蛋白表達(dá)的效果。本研究進(jìn)一步利用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測了沉默PGP9.5表達(dá)后對(duì)SiHa細(xì)胞的生長和侵襲能力影響。結(jié)果表明SiHa細(xì)胞在PGP9.5-siRNA干擾后，克隆形成數(shù)量和過膜細(xì)胞數(shù)量明顯減少，克隆形成能力和侵襲能力明顯減弱。相對(duì)應(yīng)地，我們?cè)O(shè)計(jì)了可以增加宮頸癌細(xì)胞內(nèi)PGP9.5蛋白表達(dá)水平的過表達(dá)質(zhì)粒，驗(yàn)證PGP9.5在宮頸癌細(xì)胞中作用，發(fā)現(xiàn)PGP9.5表達(dá)水平的增高確實(shí)與宮頸癌細(xì)胞的生長和侵襲能力呈正相關(guān)，驗(yàn)證了臨床數(shù)據(jù)的結(jié)果，并作為反向?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證了PGP9.5-siRNA作為宮頸癌治療手段的可能性。如上研究結(jié)果與臨床研究的數(shù)據(jù)共同說明了PGP9.5的表達(dá)水平與宮頸癌的增殖和侵襲相關(guān)，對(duì)其表達(dá)進(jìn)行下調(diào)可能實(shí)現(xiàn)對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖和侵襲的抑制。焉春華等［25］和張弦等［26］的研究也認(rèn)為，PGP9.5在非小細(xì)胞肺癌和胃癌侵襲及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，這些在不同類型腫瘤中的研究結(jié)果與本研究的發(fā)現(xiàn)具有一致性。所以，對(duì)PGP9.5的表達(dá)進(jìn)行抑制，有可能實(shí)現(xiàn)對(duì)宮頸癌發(fā)生發(fā)展的抑制。

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(責(zé)任編輯:陳妙玲，羅 森)

Relationship between expression of PGP9.5 and clinicopathological features of cervical carcinoma，and in vitro study of underlying mechanism

JIN Rong1，LI Hong-fang2，ZHANG Li-dong3

(1Department of Obstetrics and Gynecology，Tianjin Fifth Central Hospital，Tianjin 300450，China;2Department of Obstetrics and Gynecology，Lanzhou First People＇s Hospital，Lanzhou 730050，China;3Department of Pathology，Tianjin Fifth Central Hospital，Tianjin 300450，China.E-mail:jin.rong0815@163.com)

AIM:To detect the protein expression of protein gene product(PGP9.5)in cervical carcinoma samples，and to explore its relationship with clinicopathological features and prognosis of cervical carcinoma patients.The potential value of PGP9.5-siRNA in the treatment of cervical cancer was preliminarily investigated in vitro.METHODS: The clinical data of cervical cancer patients(n=180)who ties of colony formation and cell invasion were determined by Western blot，colony formation assay and Transwell experiment.RESULTS:The relationships between the expression level of PGP9.5 and patients’pathological characteristics including grade，tumor size，lymph node metastasis，depth of invasion，vascular involvement and clinical stage were statistically significant(P＜0.05).The overall survival rates of 3 and 5 years in PGP9.5 high expression group were significantly lower than those in PGP9.5 low expression group(P＜0.05).Compared with control group，the protein expression of PGP9.5，the number of colony formation and the number of invasive cells in si-PGP9.5 group were significantly decreased.The protein expression of PGP9.5，the number of colony formation and the number of invasive cells in PGP9.5 group were significantly increased.CONCLUSION:Over-expression of PGP9.5 protein indicates poor prognosis of cervical cancer，which may be a good predictor for the prognosis of cervical cancer patients.Inhibition of PGP9.5 expression may be an effective way of gene therapy for cervical cancer.

surgical treatment in Department of Gynecology of Tianjin Fifth Central Hospital and Tianjin Central Hospital of Gynecology and Obstetrics from January 2008 to June 2015 were retrospectively analyzed.Immunohistochemical staining for PGP9.5 in all pathological specimens from cervical cancer biopsy was performed.The patients were divided into high expression of PGP9.5 group and low expression of PGP9.5 group.The relationship between PGP9.5 expression and clinicopathological parameters，such as age，HPV infection，pathological grade，tumor diameter，lymph node metastasis，depth of invasion and clinical stage，were analyzed.The overall survival was analyzed by Kaplan-Meier method and the log-rank test.The PGP9.5-siRNA，NC-siRNA，PGP9.5 eukaryotic expression plasmid and empty vector were transfected into the SiHa cells，and the effects of PGP9.5 expression on the abili-

Cervical cancer;Colony formation;Cell invasion;Small interfering RNA;Protein gene product 9.5

R730.23

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2016.07.013

1000-4718(2016)07-1235-06

2016-03-18

2016-05-09

天津市濱海新區(qū)衛(wèi)生局科技項(xiàng)目(No.2014BWKY015)

△Tel:15122136381;E-mail:jin.rong0815@163.com