昆侖雪菊水提物對(duì)2型糖尿病小鼠血糖及胰島素水平的影響*

張邦能，舒 暢，杜 玫，劉曉富，楊麗霞，李雪英甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 70050；甘肅中醫(yī)藥大學(xué)；甘肅省建筑職工醫(yī)院；酒泉市中醫(yī)院

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昆侖雪菊水提物對(duì)2型糖尿病小鼠血糖及胰島素水平的影響*

張邦能1，舒 暢2，杜 玫3，劉曉富4，楊麗霞1，李雪英2
1甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050；2甘肅中醫(yī)藥大學(xué)；3甘肅省建筑職工醫(yī)院；4酒泉市中醫(yī)院

目的：探討昆侖雪菊水提物對(duì)2型糖尿病小鼠的降糖作用。方法：將2型糖尿病小鼠50只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為吡格列酮組、陽性對(duì)照組，昆侖雪菊高、中、低劑量組，每組10只，另設(shè)正常對(duì)照組10只。正常對(duì)照組和陽性對(duì)照組每日以0.001 m L/kg灌服0.9%氯化鈉溶液；昆侖雪菊高、中、低劑量組每日分別以0.4、0.2、0.1 g/kg濃度按0.01 m L/g體質(zhì)量灌服昆侖雪菊水溶液；吡格列酮組按每日0.01 g/kg灌服吡格列酮水溶液，1次/d，連續(xù)35天。觀察小鼠一般情況及餐前、餐后2小時(shí)血糖，血清胰島素及胰島素敏感指數(shù)。結(jié)果：昆侖雪菊可顯著降低病鼠體質(zhì)量及空腹血糖值，效果優(yōu)于吡格列酮；而在降低2小時(shí)血糖和提高胰島素敏感性方面與吡格列酮藥效相當(dāng)。結(jié)論：昆侖雪菊具有降低2型糖尿病小鼠血糖、胰島素水平及改善小鼠胰島素抵抗的作用。

2型糖尿病；血糖；昆侖雪菊；小鼠

昆侖雪菊，又名“血菊”“金雞菊”，維吾爾語“古麗恰爾”，是菊科金雞菊屬一年生草本植物兩色金雞菊(Coreopsis tinctoria N utt)干燥的花蕾，主要產(chǎn)于我國(guó)新疆和田地區(qū)［1］，長(zhǎng)期以來當(dāng)?shù)鼐用駥⒗鲅┚债?dāng)花茶飲用，新疆維吾爾醫(yī)院將其作為維藥材應(yīng)用，其具有活血化瘀、清熱解毒、和胃健脾之功效。現(xiàn)代研究表明，昆侖雪菊含有黃酮、皂苷、多糖、揮發(fā)油、氨基酸等成分，具有降血脂、降血壓［2］，抗衰老［3］降糖［4］等藥理作用。本研究采用SPF級(jí)自發(fā)性2型糖尿病KKAy小鼠模型，探討昆侖雪菊水提物對(duì)其血糖及胰島素水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物 昆侖雪菊由蘭州市藥材公司提供，采自青海。昆侖雪菊5 kg用20倍體積的水(約100 L)煮沸提取2次。合并提取液，水提液用濾布濾出殘?jiān)?，濃縮至約50L。濃縮水提液加于事先用水平衡的大孔吸附樹脂上，加載完畢后，先用水洗脫約20L，以除去多糖類化合物，再用50 L 20%乙醇溶液洗脫，收集餾分；后用50 L40%乙醇洗脫，并收集餾分。20%乙醇洗脫液濃縮至干，得到約300 g提取物；40%乙醇濃縮至干得到約200 g提取物。

1.2 試劑與儀器 羅氏血糖試紙［羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司］活力型；ALPCO小鼠ELISA胰島素試劑盒96T(美國(guó)ALPCO公司)；羅氏血糖儀［羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司］；伯樂Bi o-rad 680酶標(biāo)儀(美國(guó)伯樂公司)。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 SPF級(jí)7～8周齡2型糖尿病小鼠-KKAy小鼠50只及C57BL/6J小鼠10只，雄性，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，合格證號(hào)：SCXK(京)2009-0004，KKAy小鼠飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司提供。將小鼠飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，單籠飼養(yǎng)，每天自由飲水?dāng)z食。C57BL/6J小鼠喂普通飼料。適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后，斷尾取血測(cè)定空腹血糖，空腹血糖均在7.1 m m ol/L以上的50只用于本次實(shí)驗(yàn)。將2型糖尿病小鼠50只按隨機(jī)數(shù)字表法分為吡格列酮組、陽性對(duì)照組、昆侖雪菊高、中、低劑量組，每組10只，正常對(duì)照組為C57BL/6J小鼠10只。

1.3.2 給藥方法 正常對(duì)照組和陽性對(duì)照組每日以0.001m L/kg灌服0.9%氯化鈉溶液。昆侖雪菊高、中、低劑量組每日分別以0.4，0.2，0.1g/kg濃度按0.01 m L/g體質(zhì)量灌服昆侖雪菊水溶液，吡格列酮組按每日0.01 g/kg灌服吡格列酮水溶液，1次/d，連續(xù)35天。

1.4 指標(biāo)及檢測(cè)方法。

1.4.1 小鼠一般情況 觀察小鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)狀況、毛色等。

1.4.2 生化指標(biāo)的檢測(cè)及方法 每天稱體質(zhì)量、每周測(cè)鼠尾餐前及餐后2小時(shí)血糖，35天后禁食8小時(shí)，麻醉，取小鼠眼眶內(nèi)靜脈血液及其他組織標(biāo)本。血液靜置2小時(shí)后以4℃、3 500 r/m i n，20分鐘分離血清，-20℃冰箱內(nèi)保存，血清胰島素濃度采用雙抗夾心酶免法(ELISA)，嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行測(cè)定。

1.4.3 血清胰島素及胰島素敏感指數(shù) 給藥35天禁食4小時(shí)后摘眼球取血，分離血清，用ELISA法測(cè)定血清胰島素。胰島素敏感指數(shù)的計(jì)算［5］：空服血糖與空服胰島素乘積的倒數(shù)，再取自然對(duì)數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以(±s)表示，組內(nèi)給藥前后比較用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠的一般情況 正常對(duì)照組C57BL/6J小鼠的精神狀態(tài)較好，皮毛光澤，反應(yīng)靈敏，活動(dòng)如常。陽性對(duì)照組小鼠逐漸出現(xiàn)精神不振，反應(yīng)遲鈍，皮毛欠光澤，活動(dòng)度差。昆侖雪菊各劑量組和吡格列酮組以上情況有不同程度改善。

2.2 昆侖雪菊對(duì)各組小鼠體質(zhì)量的影響 每天在飼食小鼠前測(cè)其體質(zhì)量1次，昆侖雪菊低、中、高劑量組、陽性對(duì)照組及吡格列酮組與正常對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 昆侖雪菊對(duì)各組小鼠體質(zhì)量的影響(±s)

表1 昆侖雪菊對(duì)各組小鼠體質(zhì)量的影響(±s)

注：*表示與昆侖雪菊低、中、高劑量組，陽性對(duì)照組及吡格列酮組比較，P＞0.05。

組別 只數(shù) 劑量/（g·kg-1） 體質(zhì)量/g 0 d 7 d 14 d 21 d 35 d正常對(duì)照組 10- 24.50±1.80*24.20±0.90*24.90±1.10*25.20±1.30*24.90±1.00*陽性對(duì)照組 10- 35.20±1.90 33.90±4.30 33.90±3.90 34.30±4.20 34.30±4.10昆侖雪菊低劑量組 10 0.1 35.90±2.67 30.80±2.74 31.70±2.62 32.40±2.50 32.50±2.47昆侖雪菊中劑量組 10 0.2 38.20±3.07 34.70±2.29 34.90±2.32 35.50±2.36 34.70±2.41昆侖雪菊高劑量組 10 0.4 35.20±2.86 31.90±2.04 32.40±2.31 32.80±2.46 32.10±2.41吡格列酮組 10 0.01 37.20±3.85 34.80±3.22 35.50±2.87 36.50±3.00 36.40±3.18

2.3 昆侖雪菊對(duì)2型糖尿病小鼠空腹血糖（FBG）的影響 正常對(duì)照組小鼠5周內(nèi)血糖值均低于陽性對(duì)照組，昆侖雪菊低、中、高劑量組在第5周時(shí)低于陽性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

2.4 昆侖雪菊對(duì)2型糖尿病小鼠餐后2小時(shí)血糖（PBG）的影響 正常對(duì)照組小鼠5周內(nèi)血糖值低于陽性對(duì)照組；昆侖雪菊低、中、高劑量組在實(shí)驗(yàn)第5周時(shí)血糖值高于陽性對(duì)照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表3。

表2 昆侖雪菊對(duì)各組小鼠空腹血糖的影響(±s)

表2 昆侖雪菊對(duì)各組小鼠空腹血糖的影響(±s)

注：*表示與陽性對(duì)照組第5周時(shí)比較，P＜0.05。

組別 只數(shù) 劑量/（g·kg-1） 血糖/（m m ol·L-1）0 d 7 d 14 d 21 d 35 d正常對(duì)照組 10- 6.58±0.62*6.00±0.95*5.99±0.47*6.91±1.20*5.04±0.99陽性對(duì)照組 10- 12.40±2.40 8.90±1.66 11.00±2.18 11.20±2.78 9.10±2.37昆侖雪菊低劑量組 10 0.1 12.90±2.99 9.30±2.40 9.71±2.62 11.30±1.95 6.55±1.02*昆侖雪菊中劑量組 10 0.2 14.20±4.40 10.30±3.39 10.90±2.19 11.72±2.84 7.40±1.70*昆侖雪菊高劑量組 10 0.4 12.40±2.88 8.40±1.60 10.70±1.93 11.70±2.84 7.03±1.49*吡格列酮組 10 0.01 16.30±5.12 11.70±1.50 12.20±1.27 12.60±1.62 8.00±1.15*

表3 昆侖雪菊對(duì)各組小鼠餐后2小時(shí)血糖的影響(±s)

表3 昆侖雪菊對(duì)各組小鼠餐后2小時(shí)血糖的影響(±s)

注：*表示與昆侖雪菊低、中、高劑量組及吡格列酮組比較，P＞0.05。

組別 只數(shù) 劑量/（g·kg-1） 餐后2小時(shí)血糖/（m m ol·L-1）0 d 7 d 14 d 21 d 35 d正常對(duì)照組 10- 12.80±1.80*13.00±1.80*11.60±1.00*10.60±0.91*12.00±1.42*陽性對(duì)照組 10- 19.90±5.44 17.60±5.96 19.80±2.31 23.80±3.68 20.30±5.28*昆侖雪菊低劑量組 10 0.1 15.30±4.61 15.30±5.29 19.10±2.55 19.90±4.92 19.20±5.40昆侖雪菊中劑量組 10 0.2 26.40±3.61 20.70±3.23 21.10±2.03 25.50±3.97 20.90±4.59昆侖雪菊高劑量組 10 0.4 24.96±3.77 18.30±3.73 20.30±2.29 23.90±3.00 20.30±2.20吡格列酮組 10 0.01 25.00±3.77 18.80±4.20 19.70±1.03 22.80±4.92 20.20±5.04

2.5 昆侖雪菊對(duì)2型糖尿病小鼠胰島素水平及胰島素敏感指數(shù)的影響 小鼠給藥第5周后，正常對(duì)照組與昆侖雪菊中劑量組胰島素含量低于陽性對(duì)照組，昆侖雪菊中劑量組胰島素敏感指數(shù)高于陽性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。昆侖雪菊低、中劑量組胰島素含量與敏感指數(shù)與模型組相近，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表4。

表4 昆侖雪菊對(duì)各組小鼠胰島素水平及胰島素敏感指數(shù)影響(±s)

表4 昆侖雪菊對(duì)各組小鼠胰島素水平及胰島素敏感指數(shù)影響(±s)

注：與陽性對(duì)照組比較，*表示P＜0.05，△表示P＞0.05。

組別 只數(shù) 劑量/（g·kg-1） 胰島素/（ng·m L-1） 胰島素敏感指數(shù)正常對(duì)照組 10- 0.31±0.05-1.19±0.18陽性對(duì)照組 10- 0.39±0.13-0.55±0.21昆侖雪菊低劑量組 10 0.1 0.44±0.12-0.46±0.25昆侖雪菊中劑量組 10 0.2 0.29±0.01*-0.31±0.24△昆侖雪菊高劑量組 10 0.4 0.42±0.08-0.47±0.31吡格列酮 10 0.01 0.44±0.09-0.55±0.35

3 討論

3.1 昆侖雪菊水提物研究基礎(chǔ) 昆侖雪菊水提物為紅色粉末狀物質(zhì)，具有特殊濃郁的香味，含有多種揮發(fā)油成份，包括芳香類、酚類、醇類、酮類、烯類、萜類、酮類和烷烴化合物，其中烯類成分占多數(shù)。張彥麗等［6］從中檢測(cè)出了23個(gè)色譜峰，并初步鑒定了22種化合物，相對(duì)含量較高的為苧烯(63.23%)、3-蒈烯(7.05%)、β-對(duì)繖花烴(5.23%)等。趙軍等［7］分離得到了7個(gè)黃酮類化合物，分別為異奧卡寧7-O-β-吡喃葡萄糖苷、櫟草亭7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、馬里苷、奧卡寧、木犀草素、槲皮素和8-羥基黃顏木素。此外，昆侖雪菊的分光光度法、高效液相色譜法等測(cè)定法及水提、醇提、浸漬、回流等提取法也相對(duì)成熟［8-10］。這對(duì)昆侖雪菊成分及藥用價(jià)值的研究提供了一定的理論基礎(chǔ)。

3.2 昆侖雪菊對(duì)糖脂代謝研究（國(guó)內(nèi)） 韓雪等［11］通過研究新疆金雞菊乙酸乙酯提取物對(duì)2型糖尿病小鼠FBG、TC和TG的影響，發(fā)現(xiàn)新疆金雞菊提取物具有良好的降糖調(diào)脂作用，與本研究相符。張燕等［12］從昆侖雪菊中提取了雪菊乙酸乙酯提取物、雪菊正丁醇提取物、雪菊總黃酮、雪菊水提物和雪菊中性黃酮5種提取物，該提取物對(duì)-葡萄糖苷酶活性有較強(qiáng)的抑制作用，其中4種提取物的抑制率高于阿卡波糖且以中性黃酮活性最強(qiáng)，表明昆侖雪菊提取物可能會(huì)改善餐后血糖。樊利娜等［13］認(rèn)為昆侖雪菊能顯著改善糖脂代謝，降低2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖及糖化血清蛋白的含量，對(duì)糖耐量異常有改善作用，能降低血清總膽固醇、甘油三酯的含量。

3.3 金雞菊對(duì)胰島β細(xì)胞的作用研究（國(guó)外） 國(guó)外有研究認(rèn)為氧化應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的高血糖可以破壞胰島β細(xì)胞［14］，因此，抗氧化治療被假定為可能延緩糖尿病及其并發(fā)癥發(fā)展的干預(yù)措施［15］，故Di as T等［16］通過金雞菊注射液對(duì)糖尿病大鼠糖耐量異常影響的研究，認(rèn)為金雞菊注射液可通過清除自由基的抗氧化過程，恢復(fù)胰島β細(xì)胞功能，起到改善糖耐量異常的效果。此后Di as T等［17］從細(xì)胞學(xué)角度研究認(rèn)為金雞菊提取物可防止TBPH和細(xì)胞因子誘導(dǎo)細(xì)胞損傷，進(jìn)而通過抑制細(xì)胞凋亡通路而起到保護(hù)細(xì)胞的作用，特別是金雞菊中的黃酮類可保護(hù)胰島β細(xì)胞并減少其損傷。

本研究表明昆侖雪菊水提物在降低2型糖尿病小鼠空腹血糖方面較吡格列酮組好，餐后2小時(shí)血糖與吡格列酮組相當(dāng)，提高胰島素敏感性與吡格列酮組接近，且高濃度組效果較好，因此，昆侖雪菊水提物對(duì)降低2型糖尿病小鼠的體質(zhì)量、血糖及提高其胰島素敏感性有較為顯著的作用。本研究雖然觀察到昆侖雪菊對(duì)降糖及改善胰島素敏感性有較好作用，但其作用機(jī)制尚不明確，且僅限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，故對(duì)昆侖雪菊作用機(jī)制及臨床應(yīng)用的深入研究，將成為本課題以后的研究重點(diǎn)，希望能夠?yàn)橹委熖悄虿≈委熖峁┬滤悸贰?/p>

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Impact of Aqueous Extract from KunLun Snow Chrysanthemum on the Levels of Blood Glucose and Insulin of the Mice with Type Two Diabetes Mellitus

ZHANG Bangneng1，SHU Chang2，DU Mei3，LIU Xiaofu4，YANG Lixia1，LI Xueying2
1 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China；2 Gansu University of Traditional Chinese Medicine；3 Gansu Provincial Construction Worker's Hospital；4 Jiuquan Municipality TCM Hospital

Objective：To explore the effects of Kunlun snow chrysanthemum on decreasing blood glucose of type two diabetes mellitus（T2DM）mice.Methods：Fifty T2DM mice were divided into pioglitazone group，positive control group，high，moderate and low doses groups of Kunlun snow chrysanthemum according to random number table，ten mice each group，ten mice in the normal control group were established.Normal control group and positive control group accepted intragastric administration of 0.9%sodium chloride solution by standard of 0.001 mL/kg each day；high，moderate and low doses groups of Kunlun snow chrysanthemum lavaged aqueous solution of Kunlun snow chrysanthemum in the concentrations of 0.4，0.2 and 0.1 g/kg by standard of 0.01 mL/g；pioglitazone group aqueous solution of pioglitazone by standard of 0.01g/kg，once per day，for 35 consecutive days.General condition，preprandial blood glucose，2hours postprandial blood glucose，serum insulin and insulin sensitivity index（ISI）were observed.Results：Kunlun snow chrysanthemum could significantly decrease body weight and fasting blood glucose of the mice，and its effects were superior to these of pioglitazone；while equivalent to pioglitazone in decreasing 2hours postprandial blood glucose and improving ISI.Conclusion：Kunlun snow chrysanthemum could decrease blood glucose and the levels of insulin of T2DM mice，and improve insulin resistance of the mice.

type two diabetes mellitus；blood glucose；Kunlun snow chrysanthemum；the mice

張邦能（1970—），男，副主任檢驗(yàn)師。研究方向：糖尿病分子機(jī)制研究。

R587

A

1004-6852（2016）01-0026-04

2015-02-27

2013年甘肅省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào)1308RJZA 106）。