紅皮、黑皮花生莖葉對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠作用的對(duì)比研究*

李欣芮，陸永攀山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355；2山東中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

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紅皮、黑皮花生莖葉對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠作用的對(duì)比研究*

李欣芮1，陸永攀2△
1山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355；2山東中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

目的：探討紅皮、黑皮花生莖葉水提物對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠的作用。方法：將SPF級(jí)K M種小鼠隨機(jī)分為8組，分別為：生理鹽水組、地西泮陽(yáng)性對(duì)照組，紅皮花生莖葉高、中、低劑量組及黑皮花生莖葉高、中、低劑量組，每組8只；采用水提及超聲輔助的方法充分提取兩種花生莖葉的有效成分，灌胃給藥7天，1次/d。觀察小鼠自主活動(dòng)次數(shù)、對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉所致小鼠的睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間及對(duì)抗3-M P誘導(dǎo)驚厥程度。結(jié)果：紅皮花生莖葉高、中劑量組與黑皮花生莖葉高劑量組均能顯著降低小鼠自主活動(dòng)次數(shù)（P＜0.01）；紅皮及黑皮花生莖葉高、中、低劑量組均能延長(zhǎng)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠的睡眠時(shí)間（P＜0.01）；除黑皮花生莖葉低劑量組外，其余組均能降低小鼠驚厥率（P＜0.05）。結(jié)論：紅皮花生與黑皮花生莖葉水提物對(duì)小鼠均具有鎮(zhèn)靜催眠作用，其中紅皮花生莖葉水提物的鎮(zhèn)靜催眠作用略高于黑皮花生。

紅皮花生；黑皮花生；莖葉水提物；鎮(zhèn)靜催眠

隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，失眠的發(fā)病人數(shù)日趨增多，許多人需要服用藥物來改善睡眠質(zhì)量。然而，國(guó)內(nèi)外常用的唑吡坦、扎來普隆及佐匹克隆等［1］鎮(zhèn)靜安眠藥均存在不同程度的副作用和藥物依賴性，尤其對(duì)兒童危害嚴(yán)重［2］，因此，尋找天然藥物滿足臨床需要顯得格外重要。

花生(Arachis hypogaea L.)出自《滇南本草》，其莖葉具有“晝開夜合”的特性，符合中醫(yī)“天人相應(yīng)”和陰陽(yáng)消長(zhǎng)規(guī)律理論［3］，與人體“入夜則寐，入晝則寤”“晝精夜暝”相一致。而皂苷類成分在一些研究中被認(rèn)為是鎮(zhèn)靜催眠的有效成分［4］，在花生莖葉中含量也相對(duì)較高，筆者曾就“花生莖葉有效成份具有鎮(zhèn)靜催眠作用”［5］做了初探，其水提物鎮(zhèn)靜催眠的效果相對(duì)較好。黑皮花生是由花生遺傳性變異選育而成的新品種，其莖葉也可能與鎮(zhèn)靜催眠作用存在密切關(guān)聯(lián)性。但在現(xiàn)有文獻(xiàn)中并沒有關(guān)于黑皮花生莖葉鎮(zhèn)靜催眠作用的報(bào)道，亦無與紅皮花生莖葉鎮(zhèn)靜催眠效果的優(yōu)劣比較。為此，本研究采用紅、黑皮花生莖葉水提物在鎮(zhèn)靜催眠效果方面進(jìn)行對(duì)比研究，以便對(duì)“新品種”黑皮花生莖葉鎮(zhèn)靜催眠成分的含量進(jìn)行初步分析，比較兩種花生莖葉水提物鎮(zhèn)靜催眠作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)KM種小鼠，體質(zhì)量(20±2)g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：H 20013147，實(shí)驗(yàn)前均先禁食、不禁水過夜。

1.2 儀器 儀表恒溫水浴鍋(黃驊市綜合電器廠)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；中藥粉碎機(jī)(山東臨清運(yùn)河制藥機(jī)械有限公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海陽(yáng)光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；小鼠自主活動(dòng)記錄儀(安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司)；電子天平PTF-A600(福州華志科學(xué)儀器有限公司)；KQ-500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.3 藥品與試劑 紅皮花生、黑皮花生莖葉均采自山東德州郊區(qū)，由生藥系李峰教授鑒定為豆科落花生屬植物花生的莖葉；戊巴比妥鈉(北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)：120812)；3-巰基丙酸(3-M P，Si gm a公司，批號(hào)：BR058712)；地西泮注射液(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：115-9302)。

1.4 方法

1.4.1 花生莖葉水提物的制備 取兩種紅、黑皮花生莖葉生藥材各1kg，粉碎，20 kH z超聲提取15分鐘后加入12倍量的蒸餾水，100℃回流2次，2 h/次，過濾，合并2次濾液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至浸膏，加水稀釋成相當(dāng)于花生莖葉生藥材60、30、15g/kg的給藥量備用。

1.4.2 紅皮、黑皮花生莖葉水提物對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 小鼠64只，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成8組，分別為：生理鹽水組，地西泮(2 m g/kg)陽(yáng)性對(duì)照組，紅皮花生莖葉高、中、低劑量組(60、30、15 g/kg)，黑皮花生莖葉高、中、低劑量組(60、30、15 g/kg)，每組8只。除地西泮組和生理鹽水組外，其余各組每日灌胃給藥1次，每日灌胃量為20m L/kg，連續(xù)給藥7天（其中地西泮組前6天以生理鹽水灌胃，第7天以0.02 m g/m L地西泮灌胃），于第7天末次給藥30分鐘后，將小鼠置于自主活動(dòng)記錄儀中，適應(yīng)10分鐘后，記錄小鼠2分鐘內(nèi)自主活動(dòng)次數(shù)。

1.4.3 紅皮、黑皮花生莖葉水提物對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的影響 分組及給藥劑量同“1.4.2”項(xiàng)。末次給藥30分鐘后，各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉35 m g/kg(能引起全部小鼠發(fā)生睡眠的最小劑量)［6］，以小鼠四肢向上姿勢(shì)超過十秒為翻正反射消失的標(biāo)準(zhǔn)，消失1分鐘以上記為發(fā)生睡眠，觀察并記錄小鼠的睡眠潛伏期及睡眠持續(xù)時(shí)間。

1.4.4 小鼠鎮(zhèn)靜指標(biāo) 分組及給藥劑量同“1.4.2”項(xiàng)。末次給藥30分鐘后，腹腔注射20 μL/kg的3-M P，以是否出現(xiàn)驚厥現(xiàn)象來判斷花生莖葉水提物有無鎮(zhèn)靜作用。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以(±s)表示，采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩種花生莖葉水提物對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)、睡眠潛伏期、注射閾下劑量(35 m g/kg)戊巴比妥鈉的小鼠持續(xù)睡眠時(shí)間及驚厥程度的影響，同劑量的紅皮花生莖葉水提物與黑皮花生莖葉水提物相比較，紅皮花生組的小鼠持續(xù)睡眠時(shí)間稍長(zhǎng)，睡眠潛伏期時(shí)間較短，小鼠活動(dòng)次數(shù)較黑皮花生組少。紅皮、黑皮花生莖葉水提物高、中、低劑量組均能增加入睡小鼠的動(dòng)物數(shù)；與生理鹽水組比較，紅皮花生莖葉高、中劑量組，黑皮花生莖葉高劑量組均能顯著降低小鼠自主活動(dòng)次數(shù)(P＜0.01)，紅、黑皮花生莖葉高、中、低劑量組均能延長(zhǎng)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠的睡眠時(shí)間(P＜0.01)，除黑皮花生莖葉低劑量組外，其余組均能降低小鼠驚厥率(P＜0.05)，見表1。

表1 兩種花生莖葉水提物對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)、睡眠潛伏期、持續(xù)睡眠時(shí)間及驚厥程度的影響(±s)

表1 兩種花生莖葉水提物對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)、睡眠潛伏期、持續(xù)睡眠時(shí)間及驚厥程度的影響(±s)

注：與生理鹽水組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別 只數(shù) 劑量/（g·kg-1）活動(dòng)次數(shù)/2 m i n 睡眠潛伏期/m i n 持續(xù)睡眠時(shí)間/m i n 驚厥率/%生理鹽水組 8- 33.25±5.99 9.93±0.79 17.09±2.69 87.5地西泮陽(yáng)性對(duì)照組 8 0.002 15.50±2.45**5.91±0.73**25.08±1.93**12.5**紅皮花生莖葉高劑量組 8 60 23.50±1.85**6.88±1.58**26.95±0.46**25.0**紅皮花生莖葉中劑量組 8 30 28.00±2.62**7.15±0.71**25.86±1.33**25.0**紅皮花生莖葉低劑量組 8 15 30.25±5.70 7.97±1.04**23.02±3.21**37.5**黑皮花生莖葉高劑量組 8 60 26.00±2.07**6.14±0.95**26.03±2.81**25.0**黑皮花生莖葉中劑量組 8 30 30.25±3.33 7.84±0.41**24.82±3.26**62.5*黑皮花生莖葉低劑量組 8 15 31.50±3.07 8.15±1.27**20.63±3.46**75.0

3 討論

社會(huì)生活的緊步伐與快節(jié)奏，使現(xiàn)代人在日益加劇的競(jìng)爭(zhēng)環(huán)境中壓力遞增，思慮過重，失眠癥隨之普遍產(chǎn)生。失眠不僅影響人們的休息，還會(huì)影響正常的工作和生活，常因生活作息紊亂而處于亞健康的生活狀態(tài)。長(zhǎng)期失眠，還易使人產(chǎn)生焦慮、煩躁、抑郁等精神癥狀，反向影響人們的情緒［7-10］。肝郁氣滯、氣機(jī)不暢、郁而化火，也會(huì)加重失眠癥狀［11］。許多失眠癥患者會(huì)服用巴比妥類和苯二氮卓類藥物，長(zhǎng)期服用此類藥物會(huì)產(chǎn)生許多副作用，如焦慮、妄想、幻覺及驚厥等［12］。花生莖葉有清熱解毒，寧神降壓的功效，其副作用小，無成癮性，故對(duì)一般失眠癥患者，筆者認(rèn)為花生枝葉制劑可作為首選藥物應(yīng)用。綜合考慮花生莖葉“晝開夜合”的特性，從中醫(yī)取象比類的角度研究分析可作為現(xiàn)代鎮(zhèn)靜催眠藥物研究的新方向［13］。

本研究表明，合適濃度的紅、黑皮花生莖葉水提物均能減少小鼠活動(dòng)次數(shù)，延長(zhǎng)小鼠睡眠時(shí)間，降低驚厥率；紅皮花生莖葉水提物的鎮(zhèn)靜催眠作用稍高于黑皮花生莖葉水提物；紅皮花生莖葉高、中劑量組，黑皮花生莖葉高劑量組均能顯著降低小鼠自主活動(dòng)次數(shù)，說明該劑量的水提物鎮(zhèn)靜催眠作用顯著；紅、黑皮花生莖葉高、中、低劑量組均能延長(zhǎng)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠的睡眠時(shí)間，但不同劑量水提物所致的睡眠潛伏期和持續(xù)睡眠時(shí)間不同，說明不同劑量水提物鎮(zhèn)靜催眠效果不同；除黑皮花生莖葉低劑量組外，其余組均能降低小鼠驚厥率，即均有明顯的鎮(zhèn)靜作用。同濃度的兩種花生莖葉水提物比較，二者相關(guān)數(shù)值差別不明顯。雖然預(yù)期認(rèn)為黑皮花生莖葉水提物作用效果好，但結(jié)果卻存在一定出入，可能與花生種植環(huán)境、土壤營(yíng)養(yǎng)成分及酸堿度、花生葉的采收時(shí)間等因素有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)主要研究了紅皮花生莖葉水提物與黑皮花生莖葉水提物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)催眠作用，通過觀察小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)、睡眠潛伏期、持續(xù)睡眠時(shí)間、驚厥率，初步判斷紅皮花生莖葉水提物的鎮(zhèn)靜催眠作用稍優(yōu)于黑皮花生莖葉水提物；但不同采收時(shí)期的作用效果是否相同，以及其催眠作用的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

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Comparative Study on Sedative and Hypnotic Effects of the Stems and the Leaves of Red and Black Peanuts on the Mice

LI Xinrui1，LU Yongpan2△
1 Pharmacy College of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2 Basic Medical College of Shandong University of Traditional Chinese Medicine

Objective：To explore sedative and hypnotic effects of the stems and leaves of red and black peanuts on mice.Methods：KM mice were randomized into eight groups，respectively including：physiological saline group，positive control group of diazepam，high，moderate and low doses groups of the stems and leaves of red peanuts，high，moderate and low doses groups of the stems and leaves of black peanuts，eight mice each group；effective ingredients of the stems and leaves of red and black peanuts were drew effectively by water extraction and ultrasound，the mice were medicated by intragastric administration for seven days，once per day.Autonomic activities times of the mice，sleep latency and sleep duration of the mice induced by sodium amytal in sub-threshold dose，and anti-3-MP-induced convulsions degree were observed.Results：High and moderate dose groups of the stems and the leaves of red peanuts and high dose group of the stems and the leaves of black peanuts could decrease autonomic activities times of the mice（P＜0.01）；high，moderate and low dose groups of the stems and the leaves of red peanuts and black peanuts could prolong sleep time of the mice induced by sodium amytal in sub-threshold dose（P＜0.01）；except low dose group of black peanuts，other groups could decrease convulsion rate of the mice（P＜0.05）.Conclusion：Aqueous extracts of the stems and the leaves of red and black peanuts present sedative and hypnotic effects on the mice，and the effects of aqueous extracts of the stems and the leaves of red peanuts are higher than these of black peanuts.

red peanut；black peanut；aqueous extract of the stems and the leaves；sedation and hypnosis

R285.5

A

1004-6852（2016）01-0012-03

2015-02-27

教育部國(guó)家級(jí)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃資助項(xiàng)目（編號(hào)201410441028）。

李欣芮（1994—），女，學(xué)生。研究方向：中藥學(xué)。