蒙古扁桃石油醚提取物對肝纖維化大鼠肝臟的作用觀察△

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蒙古扁桃石油醚提取物對肝纖維化大鼠肝臟的作用觀察△

吳桐常虹石松利*周紅兵吳培賽鄭倩男何鑫（包頭醫(yī)學院藥學院包頭014040）

目的：研究蒙古扁桃石油醚提取物對肝纖維化大鼠肝臟的影響。方法：SD大鼠按體重隨機分為對照組、模型組、陽性藥水飛薊素組和蒙古扁桃石油醚提取物高、中、低劑量組。除對照組外，其余各組大鼠按四氯化碳（CCl4）造模法造模，造模同時各給藥組灌胃給藥。8周后取大鼠肝臟、脾臟進行稱重，計算臟器指數(shù)；測定肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量，測定羥脯氨酸（HYP）水平。結(jié)果：大鼠肝纖維化損傷時，模型組SOD明顯降低，MDA明顯升高，HYP明顯升高，與對照組比較差異顯著（P＜0.05）；與模型組比較，蒙古扁桃石油醚提取物可提高血清SOD含量，降低MDA含量，降低肝組織HYP水平，差異顯著（P＜0.05）。結(jié)論：蒙古扁桃石油醚提取物對四氯化碳所致的大鼠肝纖維化具有良好的保護作用。

蒙古扁桃 四氯化碳 肝纖維化

肝纖維化是指肝臟內(nèi)彌漫性細胞外基質(zhì)（特別是膠原物質(zhì)）過度沉積，是機體對各種病因引起的慢性肝損傷后的一種損傷修復反應［1］，是慢性肝病發(fā)展至肝硬化可逆轉(zhuǎn)的最后階段，如不及時治療可能最終發(fā)展為肝硬化乃至肝癌。

蒙古扁桃（Amygdalus mongolica）蒙名烏蘭-布衣勒斯，為蒙古高原特有的阿拉善荒漠種［2～3］，屬薔薇科扁桃屬旱生落葉灌木。蒙古扁桃為內(nèi)蒙古地區(qū)特色藥材，在抗肝纖維化方面還處于初級階段，前期研究表明蒙古扁桃種仁的提取物有降血脂和抵抗高血脂癥引出的大鼠脂質(zhì)過氧化，改善過氧化脂質(zhì)在大鼠肝臟內(nèi)的蓄積，減少氧化應激，對肝臟起到一定的保護作用［4］。本研究擬觀察蒙古扁桃石油醚提取物對肝纖維化大鼠肝臟的作用。

1材料

1.1藥物與試劑：蒙古扁桃藥材（蒙古扁桃種子采自阿拉善盟雅布賴戈壁，經(jīng)包頭醫(yī)學院藥學院石松利教授鑒定為蒙古扁桃）。水飛薊素膠囊（批號131102819），德服博士大藥廠。CCl4（批號：20091217），天津市北方天醫(yī)化學試劑廠。特級初榨橄欖油（批號：20150123），山東魯花集團有限公司。SOD試劑盒（批號：20150505）、MDA試劑盒（批號：20150421）、HYP試劑盒（批號：20150527）、總蛋白定量測定試劑盒（批號：20150519），均購自南京建成生物工程研究所。

1.2動物：SPF級SD雄性大鼠，體質(zhì)量170～200g，60只，購自北京大學醫(yī)學部（實驗動物科學部），許可證號SCXK（京）2011-0012。

1.3儀器：索氏提取器。DZW-8-8型水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）。RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。電子天平。MH-250型電熱套（北京科偉永興儀器有限公司）。全自動脫帽離心機（GENIUS 5K-D，長沙鑫奧儀器）。微量移液器（上海求精生化制劑有限公司）。

2方法

2.1蒙古扁桃石油醚提取物的制備：取蒙古扁桃種仁800g，碾碎后用回流煎煮法以甲醇為溶劑制備總提物，得到總提物后依次分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取得到各部位萃取物。蒙古扁桃石油醚提取物得率為13.7%。

2.2動物分組：60只SD大鼠適應性飼養(yǎng)一周后，按體重隨機分為6組，對照組，模型組，水飛薊素組，蒙古扁桃石油醚提取物高、中、低劑量組各10只。

2.3造模與給藥：大鼠肝纖維化造模方法參照文獻［5～7］，用橄欖油將CCl4配制成40%橄欖油液，除對照組外，其余各組大鼠按體重腹部皮下注射40%CCl4橄欖油液3mL·kg-1（首次5mL·kg-1），每周2次，持續(xù)8周。造模同時給藥，蒙古扁桃石油醚提取物高、中、低3個劑量組用每千克體重對應生藥材1.75、1.25、0.75g的蒙古扁桃石油醚提取物灌胃給藥，水飛薊素組用濃度為0.01g· mL-1的溶液按大鼠體重5mL·kg-1灌胃給藥，模型組和對照組按大鼠體重5mL·kg-1灌胃給蒸餾水，每天灌胃給藥1次，觀察大鼠一般情況及死亡情況，自由飲水、攝食。實驗室溫度為21℃～27℃，相對濕度為30%～50%。

2.4標本采集：于末次給藥24h后，稱大鼠體重，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，仰臥位固定，打開腹腔，摘取肝、脾稱重。留取肝組織作SOD、MDA、HYP含量測定。

2.5統(tǒng)計學方法：使用軟件SPSS17.0對實驗數(shù)據(jù)進行分析，實驗結(jié)果均以（±s）表示。采用單因素方差分析對各組均數(shù)進行比較，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3結(jié)果

3.1肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響：表1結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠的肝、脾指數(shù)均明顯升高，差異顯著（P＜0.05）；與模型組比較，蒙古扁桃石油醚提取物高、低劑量組均能明顯降低升高的大鼠肝、脾指數(shù)，中劑量組可降低脾指數(shù)，差異顯著（P＜0.05）。（表1）。

表1蒙古扁桃石油醚提取物對大鼠肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響

3.2對肝臟勻漿MDA，SOD的影響：表2結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組肝組織中SOD明顯下降，MDA明顯增高，差異顯著（P＜0.05）；與模型組比較，蒙古扁桃石油醚提取物低劑量組能提高肝組織中SOD，高、中、低劑量組能降低血清與組織中MDA，差異顯著（P＜0.05）。

表2蒙古扁桃石油醚提取物對肝組織中MDA，SOD的影響

3.3對肝組織中HYP的影響：表3結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組肝組織HYP明顯增高，差異顯著（P＜0.05）；與模型組比較，蒙古扁桃石油醚提取物中劑量組能降低肝組織HYP，差異顯著（P＜0.05）。

表3蒙古扁桃石油醚提取物對肝組織HYP的影響

4討論

氧化應激反應與肝纖維化密切相關(guān)。本課題組前期的研究結(jié)果表明蒙古扁桃石油醚提取物中含有豐富的不飽和脂肪酸，蒙古扁桃油對肝臟具有一定的保護作用，生藥量0.75～1.5g·kg-1是其保肝作用的有效劑量。所以本次實驗選取的生藥劑量為0.75、1.25、1.75g·kg-1。

SOD可抑制自由基啟動的脂質(zhì)過氧化，MDA是脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物，本次研究結(jié)果顯示，蒙古扁桃石油醚提取物給藥組SOD活性與模型組比較明顯升高，MDA含量明顯降低，提示在肝纖維化大鼠模型中，蒙古扁桃石油醚提取物有清除活性氧及抗脂質(zhì)過氧化作用，能夠拮抗CCl4的毒性。

綜上所述，蒙古扁桃石油醚提取物具有較好的對抗脂質(zhì)過氧化、抗肝纖維化的作用，但具體機制有待深入探討。本實驗結(jié)果為蒙古扁桃的開發(fā)研究提供了一定的科學依據(jù)。

［1］Friedman SL.Molecular regulation of hepatic fi bro-sis，an integrated cellular response to tissue injury.JBiol Chem，2000，275：2247-2250.

［2］趙一之.蒙古扁桃的植物區(qū)系地理分布研究［J］.內(nèi)蒙古大學學報（自然科學版），1995，26（6）：713-715.

［3］馬毓泉.內(nèi)蒙古植物志（第三卷）［M］.呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，1989：519-522.

［4］吳培賽，石松利，周紅兵，等.蒙古扁桃藥材不同提取物對高脂血癥大鼠血脂、脂質(zhì)過氧化和肝功能的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2015，21：113-117.

［5］金俊杰，鐘鳴，余勝民，等.穿破石水提取物對四氯化碳致大鼠肝纖維化的治療作用［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，22：258-262. ［6］任美萍，劉艷，李華，等.楤木皂苷抗四氯化碳致大鼠肝纖維化作用［J］.沈陽藥科大學學報，2013，12：958-960+966.

［7］趙松峰，闞全程.六味五靈片對四氯化碳致大鼠肝纖維化的保護作用［J］.中國藥理學通報，2011，6：872-875.

Effect of Petroleum Ether Extracts of Amygdalus mongolica on Liver Fibrosis Rat

Wu Tong Chang Hong Shi Songli*Zhou Hongbing Wu Peisai Zheng Qiannan He Xin（Baotou Medical College，Baotou，014040，China）

Objective：To investigate the protective effect of Petroleum ether extract of Amygdalus mongolica Liver fibrosis in rats.Method：Sixty Sprague-Dauley（SD）rats were randomly divided in groupsone control group，one model group，one postitive silymarin controlled group，and three different doses of petroleum ether extract of Amygdalus mongolica treatment groups.Liver fibrosis rat model was induced by carbon tetrachloride（CCl4）.Except for control group，other groups were given drugs when being given CCl4.At the End of the study（the eighth week），the index of liver and spleen，superoxide dismutase（SOD），malon dialdehyde（MDA），the concentrations of hydroxyproline（HYP）in liver hydrolysate were measured too.Result：Concentration of MDA，HYP in liver hydrolysate was significantly higher in the liver fibrosis model group，however，the concentrations of SOD were significantly lower in the model group.Compared with the model group，the concentrations of MDA，HYP in liver hydrolysate were significantly decreased in petroleum ether extract of Amygdalus mongolica treatment groups and the concentrations of SOD were significantly increased in petroleum ether extract of Amygdalus mongolica treatment groups.Conclusion：Petroleum ether extract of Amygdalus mongolica has significantly protective effect on liver fibrosis induced by carbon tetrachloride in rats.

Amygdalus mongolica Liver fibrosis Carbon tetrachloride

R285.5

B

1672-8351（2016）08-0113-02

國家自然科學基金（81102760）；內(nèi)蒙古自治區(qū)高等學校青年科技英才支持計劃（NJYT-15-B01）。