基質(zhì)金屬蛋白酶-2和E-鈣黏蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

田峰，方瑞忠，徐建（山東省臨沂市沂水中心醫(yī)院，山東 臨沂 276000）

基質(zhì)金屬蛋白酶-2和E-鈣黏蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

田峰，方瑞忠，徐建
（山東省臨沂市沂水中心醫(yī)院，山東 臨沂 276000）

目的研究基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）及E-鈣黏蛋白（E-cad）在胰腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法選取2011年6月-2013年6月該院收集的手術(shù)石蠟標(biāo)本89例，其中正常胰腺組織標(biāo)本34例，胰腺癌組織標(biāo)本55例，采用免疫組織化學(xué)法檢測MMP-2及E-cad的表達(dá)。結(jié)果胰腺癌組織MMP-2陽性率為52.7%，正常組織MMP-2陽性率為2.9%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），胰腺癌組織MMP-2陽性率高于正常組織。胰腺癌組織E-cad陽性率為32.7%，正常組織MMP-2陽性率為100.0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），胰腺癌組織E-cad陽性率低于正常組織。MMP-2及E-cad的表達(dá)與臨床分期、組織學(xué)分化、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤直徑有關(guān)（P＜0.05），而與患者性別、年齡及腫瘤部位無關(guān)（P＞0.05）。MMP-2及E-cad蛋白表達(dá)陽性2例，陰性10例，兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.673，P=0.027）。結(jié)論MMP-2表達(dá)上調(diào)和E-cad表達(dá)下調(diào)與胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。臨床上可通過檢測MMP-2和E-cad表達(dá)對胰腺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移進(jìn)行預(yù)測和評估。

胰腺癌；基質(zhì)金屬蛋白酶-2；E-鈣黏蛋白；免疫組織化學(xué)法

胰腺癌為臨床常見消化道惡性腫瘤。近年來研究表明，胰腺癌發(fā)病率有逐年上升趨勢，2008年不發(fā)達(dá)地區(qū)發(fā)病率為2.1/100 000，而發(fā)達(dá)地區(qū)發(fā)病率高達(dá)5.2/100 000［1］。胰腺癌為高度惡性腫瘤，且臨床癥狀隱蔽，若不進(jìn)行全面診斷將難以發(fā)現(xiàn)和治療。因此胰腺癌患者早期即可出現(xiàn)浸潤和轉(zhuǎn)移，直接侵犯血管神經(jīng)，嚴(yán)重影響患者預(yù)后。因此，研究胰腺癌浸潤、轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制和有效的臨床診斷方法具有重要意義［2］?；|(zhì)金屬蛋白酶-2（matrix metalloprotenase protein-2，MMP-2），可降解胞外基質(zhì)，協(xié)助癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移［3］。E-鈣黏蛋白（E-cadherin protein，E-cad）為一種跨膜糖蛋白，可維持細(xì)胞間的連接作用［4］。目前，MMP-2和E-cad的研究主要集中于胃癌、乳腺癌等，在胰腺癌的研究中鮮有報道。本文研究MMP-2和E-cad在胰腺癌中的表達(dá)，目的為探討這兩種蛋白在胰腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選取2011年6月-2013年6月本院收集的手術(shù)石蠟標(biāo)本89例，其中正常胰腺組織標(biāo)本34例，胰腺癌組織標(biāo)本55例，所有患者有詳細(xì)的臨床病理資料，術(shù)前未接受任何放療及化療。正常胰腺組織標(biāo)本為外傷性胰腺部分切除。其中男性20例，女性14例；年齡36～73歲，平均（64.1±1.2）歲。胰腺癌組織中男性36例，女性19例；年齡36～74歲，平均（64.8±1.4）歲；胰腺頭部腫瘤39例，胰腺尾部腫瘤16例；TNM臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期32例，Ⅲ、Ⅳ期23例；組織學(xué)分化：G115例，G232例，G38例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者24例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者31例；腫瘤直徑≤3 cm 38例，腫瘤直徑＞3 cm 17例。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2材料與試劑

兔抗人MMP-2單克隆抗體和兔抗人E-cad單克隆抗體購自美國Satta Cruz公司，二氨基聯(lián)苯胺（Diaminobenzidine，DAB）染色試劑盒和辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗購自武漢博士德公司，鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接法（streptavidin-perosidase，SP）免疫組織化學(xué)法試劑盒購自北京中杉生物工程公司。

1.3研究方法

將石蠟標(biāo)本切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色，最后采用鏈霉親和素 -生物素復(fù)合物（strept avidin-biotin complex，SABC）法進(jìn)行免疫組織化學(xué)法染色。石蠟切片脫蠟，3%雙氧水H2O2室溫下孵育10 min以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性。修復(fù)抗體并磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffer saline，PBS）沖洗。5～10%山羊血清封閉，室溫孵育20～30 min。加入一抗，4℃過夜。PBS沖洗，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗，37℃孵育10～30 min，PBS緩沖液沖洗。加入SABC，37℃孵育10～30 min。加DAB，復(fù)染、脫水、封片。

1.4判定標(biāo)準(zhǔn)

切片制作完成后先觀察整體染色，然后在400倍鏡下隨機(jī)選取3～5個視野，固定窗口面積并用細(xì)胞計數(shù)軟件計數(shù)。MMP-2陽性著色主要以細(xì)胞質(zhì)為主，呈棕色或黃色顆粒。E-cad陽性著色主要以細(xì)胞膜為主，也呈棕色或黃色顆粒。細(xì)胞顯色計分：細(xì)胞無顯色為0分；細(xì)胞呈淺黃色為1分；細(xì)胞呈棕黃色為2分；細(xì)胞呈棕褐色為3分；陽性細(xì)胞比例計分：無陽性細(xì)胞為0分；細(xì)胞陽性＜25%為1分；細(xì)胞陽性率在25～50%為2分；細(xì)胞陽性率＞50%為3分。將上述兩項計分相加，其中總分＜3分為陰性，總分≥3分為陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用χ2檢驗，相關(guān)性檢驗用Spearman分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1MMP-2及E-cad蛋白在組織標(biāo)本中表達(dá)

胰腺癌組織MMP-2陽性率為52.7%，正常胰腺組織MMP-2陽性率為2.9%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.363，P=0.021），胰腺癌組織MMP-2陽性率高于正常胰腺組織。胰腺癌組織E-cad陽性率為32.7%，正常胰腺組織E-cad陽性率為100.0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=39.148，P=0.000），胰腺癌組織E-cad陽性率低于正常胰腺組織。見附圖和表1。

2.2MMP-2及E-cad表達(dá)與胰腺癌臨床病理因素的相關(guān)性

MMP-2及E-cad的表達(dá)與臨床分期、組織學(xué)分化、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤直徑有關(guān)（P＜0.05），與患者性別、年齡及腫瘤部位無關(guān)（P＞0.05）。見表2。

2.3MMP-2和E-cad蛋白在胰腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析

MMP-2及E-cad蛋白表達(dá)為陽性2例，陰性

10例，兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.673，P=0.027）。見表3。

附圖　MMP-2及E-cad蛋白表達(dá) （×400）

表1 兩組MMP-2、E-cad蛋白表達(dá)比較

表3　MMP-2和E-cad蛋白在胰腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性例

3　討論

胰腺為人體重要器官，位于機(jī)體上腹部腹膜后間隙，可分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺。由于胰腺位于機(jī)體較深位置，且供血較差，因此容易出現(xiàn)病變，病變后也不易發(fā)現(xiàn)和治療。胰腺癌為胰腺常見腫瘤，多起源于腺管上皮，半數(shù)以上位于胰頭。胰腺癌患者生存率較低，即便進(jìn)行放、化療和手術(shù)治療，達(dá)5年生存率僅為6%，且多數(shù)患者在確診時，胰腺腫瘤已轉(zhuǎn)移，已無法通過手術(shù)治療及放、化療進(jìn)一步延長生命［5-6］。由于胰腺位置原因，胰腺癌診斷難度較大，多數(shù)患者在確診時已是癌癥晚期，無法進(jìn)行有效治療。即便患者通過治療，暫時抑制癌癥發(fā)展，其復(fù)發(fā)率也較高。目前行之有效的延長胰腺癌患者生命的方法為早診斷、早治療，故有必要發(fā)現(xiàn)新的有效的腫瘤標(biāo)志物來提高胰腺癌的診斷率［7-8］。

基質(zhì)金屬蛋白酶為一種重要蛋白水解酶，屬于鋅肽酶超家族，可降解細(xì)胞外基質(zhì)所有成分［9-10］。研究表明，MMP蛋白的增多，可大量降解細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞外機(jī)制穩(wěn)定性下降，從而使細(xì)胞間的黏附和連接作用減弱，細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力提高［11］。在MMP家族中，MMP-2蛋白與腫瘤關(guān)系較密切，在腫瘤的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，MMP-2蛋白在其他惡性腫瘤中有過量分泌的趨勢，該蛋白可降解細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中層黏蛋白、膠原蛋白等，在細(xì)胞連接中發(fā)揮重要作用，但細(xì)胞間黏附作用減弱，導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移［11］。研究表明，在人體膀胱癌、乳腺癌中MMP-2蛋白均表達(dá)上調(diào)，而且與腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及患者的預(yù)后關(guān)系密切，可以作為腫瘤進(jìn)展標(biāo)志物［11］。但關(guān)于胰腺癌中MMP-2的研究鮮有報道。本文對MMP-2蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)做相關(guān)研究，對胰腺癌組織及正常胰腺組織中的MMP-2表達(dá)做免疫組織化學(xué)法檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織中MMP-2的陽性表達(dá)率高達(dá)52.7%，高于正常組織的2.9%，說明在胰腺癌中MMP-2蛋白有過量表達(dá)的趨勢。本實驗對MMP-2表達(dá)與臨床病理因素進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其與臨床分期、腫瘤分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤直徑密切相關(guān)，但與性別、年齡機(jī)腫瘤位置無關(guān)，說明腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移與MMP-2蛋白關(guān)系密切。

E-cad為一種重要黏附分子，在細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附中發(fā)揮重要作用。E-cad為一種跨膜蛋白，可以連接環(huán)蛋白、微絲及肌動蛋白等形成連接復(fù)合體，并與相鄰細(xì)胞中復(fù)合體連接，使細(xì)胞與細(xì)胞間形成穩(wěn)定連接［12］。若E-cad蛋白表達(dá)下降或功能抑制，將導(dǎo)致細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞基質(zhì)間的連接能力減弱，致使細(xì)胞轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，E-cad表達(dá)下調(diào)與胃癌、食管癌及口腔鱗癌等的轉(zhuǎn)移關(guān)系密切［13］，但在胰腺癌卻鮮有報道。本文對胰腺癌組織中E-cad蛋白的表達(dá)做相關(guān)研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織中E-cad蛋白的陽性表達(dá)率為32.7%，低于正常組織的100.0%，說明E-cad表達(dá)下調(diào)與胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展有重要聯(lián)系，且與E-cad表達(dá)在胃管、食管癌中的研究結(jié)果相似。本實驗進(jìn)一步探討E-cad表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與MMP-2結(jié)果相似，E-cad的表達(dá)只與胰腺癌的臨床分期、分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤直徑有關(guān)，而與患者性別、年齡和腫瘤位置無關(guān)，說明胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移與E-cad蛋白有關(guān)。

筆者對MMP-2和E-cad蛋白表達(dá)的相關(guān)性做進(jìn)一步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MMP-2蛋白與E-cad的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，說明MMP-2表達(dá)上調(diào)及E-cad表達(dá)下調(diào)與胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。

綜上所述，MMP-2表達(dá)上調(diào)和E-cad表達(dá)下調(diào)與胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。臨床上可通過檢測MMP-2和E-cad的表達(dá)對胰腺癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移進(jìn)行預(yù)測和評估。

［1］JEMAL A，BRAY F，CENTER M M，et al.Global cancer statistics［J］.CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69-90.

［2］KLEEFF J，MICHALSKI C，F(xiàn)RIESS H，et al.Pancreatic cancer：From bench to 5-year survival［J］.Pancreas，2006，33（2）：111-118.

［3］PRYCZYICZA，GUZINSKA-USTYMOWICZK，DYMICKA PIEKARSKA V，et al.Expression of matrix metalloproteinase 9 in pancreatic ductal carcinoma in associated with tumor matastasis formation［J］.Folia Histochem Cytobiol，2007，45（12）：37-40.

［4］崔銀江，李少華.E-鈣粘附素的研究進(jìn)展［J］.中國矯形外科雜志，2009，17（13）：1001-1003.

［5］PLATE JM.Advances in therapeutic vaccines for pancreatic cancer［J］. Disco Med，2012，14（75）：89-94.

［6］BRISTI B，DUNCAN J.Progress in prancreatic cancer：moving beyondgemcitabine［J］.ExpertReviewofAnticancerTherapy，2012，12（8）：997-1000.

［7］PARK K S，KIM S J，KIM K H，et al.Clinical characteristics of timp2，MMP-2，and MMP-9 gene polymorphisms in colorectal cancer［J］.J Gastroenterol Hepatol，2011，26（2）：391-397.

［8］崔鵬，區(qū)金銳，簡志祥，等.miR-146a在胰腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義［J］.嶺南現(xiàn)代臨床外科，2013，13（1）：18-28.

［9］吳年付，湯志剛，陳炯，等.胰腺癌中MMP-26 mRNA和蛋白的表達(dá)及其臨床意義［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，49（7）：981-983.

［10］郭梅梅，劉江偉，賈福鑫，等.Survivin和COX-2的表達(dá)及與胰腺癌預(yù)后的關(guān)系［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，13（19）：3632-3636.

［11］DELASSUS G S，CHO H，ELICEIRI G L.New signaling pathways from cancer progression modulators to mina expression of matrix metalloproteinases in breast cancer cells［J］.J Cell Physiol，2011（12）：143-145.

［12］紀(jì)清連，孫玲玲，付偉偉，等.胰腺癌組織Cx43和E-cad表達(dá)及意義［J］.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，45（1）：38-40.

［13］徐曉艷，范鵬程，馬秀梅.E-鈣黏附素、組織蛋白酶D與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008，39（2）：237-241.

（童穎丹 編輯）

Expressions of MMP-2 and E-cadherin in prancreatic cancer tissues and their clinical significance

Feng Tian，Rui-zhong Fang，Jian Xu
（Yishui Central Hospital，Linyi，Shandong 276000，China）

Objective To study the expression and clinical significance of matrix metalloprotenase 2 （MMP-2）protein and E-cadherin（E-cad）in pancreatic cancer tissues.Methods From June 2011 to June 2013，89 tissue specimens were collected in our hospital，including 34 specimens of normal pancreatic tissue and 55 specimens of pancreatic cancer tissues.The expressions of MMP-2 and E-cad proteins were detected by immunohistochemical technique.Results The positive rate of MMP-2 in the pancreatic cancer tissues was 52.7%which was significantly higher than 2.9%of the normal tissue（P＜0.05）.The positive expression rate of E-cad in the pancreatic cancer tissues was 32.7%which was significantly lower than 100.0%in the normal tissue（P＜0.05）.The expressions of MMP-2 and E-cad were correlated to clinical stage，histological differentiation，lymph node metastasis and tumor diameter（P＜0.05），but were not correlated to gender，age or tumor location（P＞0.05）.MMP-2 and E-cad protein expressions were positive in 2 cases，negative in 10 cases；the MMP-2 and E-cad expressions were negatively correlated（r=-0.673，P=0.027）.Conclusions The upregulation of MMP-2 expression and down-regulation of E-cad expression in pancreatic cancer tissues are closely correlated with the occurrence，development and metastasis of pancreatic cancers.The development and metastasis of pancreatic cancers can be predicted and evaluated by detection of MMP-2 and E-cad expressions.

prancreatic cancer；matrix metalloprotenase protein 2；E-cadherin；immunohistochemistry

R735.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.09.007

1005-8982（2016）09-0034-05

2015-03-25