克魯假絲酵母對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫功能、血液指標(biāo)及糞尿除臭的影響

司彥培　劉國(guó)華　蔡輝益　常文環(huán)　鄭愛(ài)娟　張　姝

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部生物飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100081)

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克魯假絲酵母對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫功能、血液指標(biāo)及糞尿除臭的影響

司彥培劉國(guó)華*蔡輝益常文環(huán)鄭愛(ài)娟張姝

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部生物飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100081)

摘要：克魯假絲酵母(Candida krusei，LSA)是本研究團(tuán)隊(duì)從雞糞中篩選出的一株具有氨氮降解能力的酵母菌。本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加不同水平的LSA對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫功能、血液指標(biāo)及糞尿除臭的影響。選用1日齡健康的愛(ài)拔益加(AA)肉公雞240只，隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每重復(fù)10只。對(duì)照組飼喂無(wú)抗生素添加的基礎(chǔ)飼糧，3個(gè)試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加1.0×107、1.0×108和1.0×109 CFU/kg LSA。試驗(yàn)期42 d，全期自由采食和飲水。結(jié)果表明：1)各組肉雞平均日采食量、平均日增重、平均體重及料重比均無(wú)顯著差異(P>0.05)。2)飼糧中添加LSA對(duì)肉雞胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)沒(méi)有顯著影響(P>0.05)，但添加1.0×108 CFU/kg LSA顯著提高了肉雞脾臟指數(shù)(P<0.05)。3)飼糧中添加LSA顯著降低了血清中尿酸及血漿中氨含量(P<0.05)，但對(duì)血清中總蛋白、白蛋白和球蛋白等生化指標(biāo)無(wú)顯著影響(P>0.05)。4)飼糧中添加LSA對(duì)糞尿含水量、總氮含量無(wú)顯著影響(P>0.05)，但添加1.0×108 CFU/kg LSA顯著降低了糞尿氨氮含量(P<0.05)。由此可見(jiàn)，LSA對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫器官及血液指標(biāo)無(wú)不良影響；飼糧中添加LSA可以提高肉雞免疫功能，改善機(jī)體的氮代謝，減少糞尿中氨氮的含量，降低環(huán)境污染。

關(guān)鍵詞：克魯假絲酵母；肉雞；生長(zhǎng)性能；免疫；血液指標(biāo)；糞尿除臭

LSA是一株耐高滲酵母。顯微鏡下觀察顯示，菌株形態(tài)為卵圓形，質(zhì)地光滑，邊緣呈流蘇狀，出芽繁殖。目前研究表明，其細(xì)胞內(nèi)海藻糖含量豐富，甘油產(chǎn)率高[8-9]。同時(shí)LSA屬于益生菌范疇，對(duì)環(huán)境具有很強(qiáng)的耐受性，最適生長(zhǎng)溫度范圍廣泛，恰好與肉雞生長(zhǎng)溫度需求相適應(yīng)；且該菌株培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，生長(zhǎng)速度快，利于大規(guī)模的接種試驗(yàn)[7]。但是，LSA的氨氮降解能力僅在實(shí)驗(yàn)室接種到家禽糞尿中得到驗(yàn)證，尚未在生產(chǎn)實(shí)踐中進(jìn)一步驗(yàn)證。因此，本試驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上，將篩選出的具有較強(qiáng)氨氮降解功能的LSA，按不同的添加水平飼喂肉仔雞，研究其對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫功能、血液指標(biāo)和糞尿除臭的影響，從而為L(zhǎng)SA作為新型益生菌品種能更好地運(yùn)用于生產(chǎn)實(shí)踐提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

LSA由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所家禽營(yíng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室提供，有效活菌總數(shù)≥1.0×108CFU/mL。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)飼糧

本試驗(yàn)采用單因素完全隨機(jī)分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將240只1日齡健康的艾拔益加(AA)肉公雞，隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只。對(duì)照組飼喂無(wú)抗生素添加的基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中以均勻噴灑方式添加1.0×107、1.0×108、1.0×109CFU/kg LSA。試驗(yàn)期42 d。參照我國(guó)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)配制無(wú)抗生素添加的基礎(chǔ)飼糧，飼糧為粉料，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.3飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院昌平中試基地進(jìn)行。試驗(yàn)采用3層籠養(yǎng)，雞舍光照第1～7天為24 h，第8天開(kāi)始為23 h。雞舍溫度第1～3天為33 ℃，從第4天開(kāi)始，減少暖氣供應(yīng)逐步降溫直至保持25 ℃。每周配制1次飼糧(粉狀)以保證LSA的活性，試驗(yàn)周期內(nèi)肉雞自由采食。每天觀察試驗(yàn)雞的精神狀態(tài)、食欲及糞尿情況，記錄死亡只數(shù)。按常規(guī)程序進(jìn)行預(yù)防免疫。

1.4樣品采集及測(cè)定

1.4.1生長(zhǎng)性能

分別于試驗(yàn)第21、42天08:00以重復(fù)為單位對(duì)肉雞空腹稱(chēng)重，稱(chēng)重前禁食8 h、自由飲水，記錄耗料量，計(jì)算肉雞前期、后期和全期的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2免疫器官指數(shù)

于試驗(yàn)第42天，每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1只與該重復(fù)平均體重接近的肉雞進(jìn)行稱(chēng)重屠宰，解剖試驗(yàn)雞后，立即分離胸腺、脾臟、法氏囊，用濾紙吸去血漬，剔除脂肪后稱(chēng)鮮重，用于計(jì)算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=免疫器官重量/宰前活重。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1　Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)　%

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of diets：VA 12 000 IU，VD32 000 IU，VE 20 IU，VK32.15 mg，VB28.00 mg，VB64.5 mg, VB120.02 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 26 mg，煙酸 nicotinic acid 68 mg，葉酸 folic acid 1 mg，生物素 biotin 0.20 mg，F(xiàn)e 110 mg，Cu 8 mg，Zn 78 mg，Mn 105 mg，I 0.34 mg，Se 0.15 mg。

2)營(yíng)養(yǎng)水平值為計(jì)算值。The nutrient levels were calculated values.

1.4.3血液指標(biāo)

于試驗(yàn)第42天，每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1只肉雞進(jìn)行采血。頸靜脈采集血液10 mL。其中7 mL注入一次性真空采血管(內(nèi)含分離膠與促凝劑)內(nèi)，37 ℃靜置l h后，3 500 r/min離心10 min，制備血清，采用日立7160全自動(dòng)生化儀進(jìn)行測(cè)定總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、尿酸(UA)、尿素氮(UN)含量以及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性；另外3 mL注入5 mL肝素鈉抗凝管內(nèi)，迅速搖動(dòng)，使全血與抗凝劑充分接觸，并立即4 ℃、3 000 r/min離心10 min，收集血漿，采用谷氨酸脫氫酶速率法，在30 min內(nèi)測(cè)定血漿中氨含量。

1.4.4糞樣成分測(cè)定

在試驗(yàn)第40～42天，每天08：00以每個(gè)重復(fù)為單位分別采集新鮮糞樣。采樣時(shí)，把每個(gè)重復(fù)3 d的糞樣混合均勻后，采用四分法分別取200 g放入自封袋內(nèi)。一份保存到-20 ℃測(cè)氨氮，氨氮含量的測(cè)定采用水楊酸-次氯酸鹽光度法(GB 7481—87)；另一份按每100 g糞樣加10%硫酸25 mL進(jìn)行固氮處理后，直接置入烘箱中，105 ℃持續(xù)15 min滅酶和微生物，然后65 ℃烘干，取出在空氣中回潮24 h后稱(chēng)重測(cè)糞樣含水量，然后粉碎并過(guò)40目篩(0.425 mm)，裝入自封袋中密封保存?zhèn)錅y(cè)總氮，總氮測(cè)定采用杜馬斯燃燒法。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 19.0軟件中的one-way ANOVA過(guò)程進(jìn)行單因素方差分析，Duncan氏法進(jìn)行各組間多重比較，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2結(jié)果

2.1LSA對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，肉雞飼糧中添加LSA對(duì)肉雞1～21日齡的ADFI、ADG、F/G和體重?zé)o顯著影響(P>0.05)；對(duì)肉雞22～42日齡的ADG和ADFI有升高趨勢(shì)，F(xiàn)/G有降低趨勢(shì)，但均無(wú)顯著差異(P>0.05)；與對(duì)照組相比，LSA對(duì)肉雞1～42日齡F/G有降低趨勢(shì)，但無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2　LSA對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響Table 2　Effects of LSA on growth performance of broilers

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2LSA對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表3可知，飼糧中添加LSA對(duì)肉雞胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)有增高趨勢(shì)，但均無(wú)顯著差異(P>

0.05)；與對(duì)照組相比，添加1.0×108CFU/kg LSA顯著提高了肉雞脾臟指數(shù)(P<0.05)。

表3　LSA對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響Table 3　Effects of LSA on immune organ indices of broilers　g/kg

2.3LSA對(duì)肉雞血液指標(biāo)的影響

由表4可知，飼糧中添加LSA對(duì)肉雞血清TP、ALB、GLB、IgA、IgM、IgG含量以及AST和ALT活性無(wú)顯著影響(P>0.05)；但LSA添加組肉雞血清UA含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，血清UN含量分別比對(duì)照組降低了21.66%、17.83%、33.12%，但無(wú)顯著差異(P>0.05)，血漿氨含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表4　LSA對(duì)肉雞血液生化指標(biāo)的影響Table 4　Effects of LSA on blood biochemical indices of broilers

2.4LSA對(duì)肉雞糞尿氮含量的影響

由表5可知，飼糧中添加LSA對(duì)肉雞糞尿含水量、總氮含量無(wú)顯著影響(P>0.05)；但與對(duì)照組相比，3個(gè)試驗(yàn)組糞尿氨氮含量分別降低了5.86%、51.71%和29.32%，且添加1.0×108CFU/kg LSA組顯著降低(P<0.05)。

表5　LSA對(duì)肉雞糞尿氮含量的影響Table 5　Effects of LSA on manure nitrogen content of broilers

3討論

3.1LSA對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

酵母菌作為一種飼料添加劑，正在逐步地取代一些細(xì)菌類(lèi)抗生素。近些年來(lái)，國(guó)內(nèi)外報(bào)道所選用的酵母類(lèi)添加劑多采用富硒、富鉻等功能性酵母、酵母培養(yǎng)物和酵母細(xì)胞壁等[10-12]。本試驗(yàn)在基礎(chǔ)飼糧中添加LSA對(duì)肉雞1～21日齡生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，對(duì)肉雞22～42日齡ADG和ADFI有升高趨勢(shì)，但差異不顯著。這與周淑芹[13]、于素紅[14]的報(bào)道一致，但與肖曼等[15]在飼糧中添加高水平的酵母培養(yǎng)物可不同程度地提高1～21日齡肉仔雞ADG和ADFI、降低F/G的研究結(jié)果存在差異，這可能與添加劑的種類(lèi)、添加劑量、飼養(yǎng)環(huán)境和動(dòng)物品種有關(guān)。LSA對(duì)肉雞生長(zhǎng)效應(yīng)大于前期，可能是由于LSA是一株新菌種，肉雞需要對(duì)它的添加有一定的適應(yīng)。

3.2LSA對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

胸腺、脾臟、法氏囊是禽類(lèi)重要的免疫器官，其重量高低在一定程度上可用于評(píng)價(jià)雛雞免疫功能的強(qiáng)弱[16]。有研究發(fā)現(xiàn)，雛雞飼喂微生態(tài)制劑后，法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)會(huì)有顯著提高[17]。王勁松等[18]也報(bào)道，在仔鵝的基礎(chǔ)飼糧中添加產(chǎn)朊假絲酵母顯著提高了免疫器官指數(shù)。本試驗(yàn)在肉雞飼糧中添加LSA對(duì)胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)有增高趨勢(shì)，添加1.0×108CFU/kg LSA顯著提高了肉雞脾臟指數(shù)。同時(shí)，在試驗(yàn)的剖檢過(guò)程中，肉雞心臟、腎臟、肝臟和脾臟等器官無(wú)明顯病理現(xiàn)象?？梢?jiàn)，LSA添加到飼糧中飼喂肉雞是安全無(wú)副作用的。

3.3LSA對(duì)肉雞血液指標(biāo)的影響

血清TP主要分為ALB和GLB，其含量在一定程度上可以反映機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)狀況以及蛋白質(zhì)的代謝水平[19]。其中血清ALB具有運(yùn)輸物質(zhì)、維持血漿滲透壓等功能，血清GLB與機(jī)體抵抗力關(guān)系密切，其含量可以反映機(jī)體的免疫能力[20]。本試驗(yàn)中LSA對(duì)血清中的TP、ALB、GLB、IgA、IgM、IgG含量沒(méi)有顯著的影響。血清中非蛋白質(zhì)含氮物質(zhì)UA和UN含量可以比較準(zhǔn)確、真實(shí)地反映動(dòng)物機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝與飼糧氨基酸的平衡狀況[21]。UN大部分是由肝臟將蛋白質(zhì)分解出來(lái)的氨或從大腸中吸收的氨合成，然后進(jìn)入血液，其含量下降代表氮的留存時(shí)間延長(zhǎng)。UA是家禽氨基酸和核酸分解代謝的最終產(chǎn)物，是家禽的主要排氨方式，其含量升高代表蛋白質(zhì)分解代謝越旺盛[22]。而血漿中氨作為動(dòng)物機(jī)體氮代謝的另一個(gè)重要指標(biāo)，需要保持在極微的濃度范圍內(nèi)，若其含量超過(guò)正常水平，將會(huì)嚴(yán)重危害動(dòng)物健康，抑制動(dòng)物生長(zhǎng)[23-24]。本試驗(yàn)中，飼糧中添加LSA均顯著降低了血清中UA和血漿中氨含量，且與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組血清UN含量有降低趨勢(shì)。其原理依據(jù)是，LSA能夠改善機(jī)體的氮代謝，提高氮的利用率，從而達(dá)到減少氨氣排放、改善雞舍環(huán)境的效果[25]，LSA還可利用腸道氨態(tài)氮，減少氨氮吸收，從而降低血中尿酸、氨含量。這與肖曼等[15]、王玲等[26]研究結(jié)果一致。于素紅[14]也指出，肉雞飼糧中添加酵母培養(yǎng)物，可顯著地降低35日齡肉雞血清中非蛋白質(zhì)含氮物質(zhì)的含量。但有關(guān)酵母在肉雞飼糧中應(yīng)用也有不一致的試驗(yàn)結(jié)果，有研究報(bào)道，蛋雞飼糧中添加2 g/kg釀酒酵母培養(yǎng)物，能顯著增加血清中UA含量[27]。也有研究指出，家禽飼糧中添加釀酒酵母或活酵母對(duì)肉雞血清UA含量無(wú)顯著影響[28-30]。

血清中AST和ALT是反映心臟功能和肝臟功能的重要指標(biāo)。正常情況下，血清中2種酶的活性值很小，它們廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞中的。當(dāng)機(jī)體病變時(shí)，該酶會(huì)從細(xì)胞釋放到血清中，從而使血清中酶活力增加[31-32]。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組血清中AST和ALT活性有降低趨勢(shì)，但無(wú)顯著差異，表明在肉雞飼糧中添加LSA不會(huì)損害肝臟和心臟，對(duì)動(dòng)物機(jī)體無(wú)不良影響。

3.4LSA對(duì)肉雞糞尿除臭的影響

有研究表明，畜禽糞中氮素的損失主要是氨揮發(fā)造成的[33]。而Cbaerar等[34]在研究糞尿含水量對(duì)氨揮發(fā)的影響時(shí)又發(fā)現(xiàn)，氨揮發(fā)量隨著糞尿含水量的增加而提高。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加LSA對(duì)肉雞糞尿含水量、總氮含量沒(méi)有顯著影響，但顯著降低了糞尿中氨氮的含量，降低了糞尿氨氣的揮發(fā)。這與劉志云[7]將LSA接種到雞糞中，能顯著降低氨氮含量的研究結(jié)果相似。其原因可能是動(dòng)物糞尿中存活的菌體又能進(jìn)一步減少氨氣的散發(fā)量，改善舍內(nèi)環(huán)境。但具體機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究。

4結(jié)論

① 飼糧中添加LSA對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，但1.0×108CFU/kg LSA顯著提高了肉雞脾臟指數(shù)。

② 飼糧中添加LSA可以顯著降低肉雞血清中UA和血漿中氨含量。

③ 飼糧中添加LSA可以顯著降低肉雞糞尿中氨氮含量。

④ 綜上，LSA作為一種新型的飼料添加劑，飼喂肉仔雞是安全無(wú)副作用的。

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(責(zé)任編輯田艷明)

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.07.029

收稿日期：2016-01-18

基金項(xiàng)目：“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題“生態(tài)環(huán)保飼糧生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)研發(fā)與集成示范”(2011BAD26B03)；國(guó)家肉雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系

作者簡(jiǎn)介：司彥培(1990—)，女，河南鶴壁人，碩士研究生，從事單胃動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)研究。E-mail: siyanpei2014@163.com *通信作者：劉國(guó)華，研究員，博士生導(dǎo)師，E-mail: liuguohua@caas.cn

中圖分類(lèi)號(hào)：S816.7

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-267X(2016)07-2228-07

*Corresponding author, professor, E-mail: liuguohua@caas.cn

Effects ofCandidakruseion Growth Performance, Immune Function,Blood Indices and Manure Deodorization of Broilers

SI YanpeiLIU Guohua*CAI HuiyiCHANG WenhuanZHENG AijuanZHANG Shu

(Key Laboratory of Feed Biotechnology of Agricultural Ministry, Feed Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China)

Abstract:Candida krusei (LSA) is a kind of yeast with ammonia nitrogen degradation ability that our research team screened out from chicken manure. This study was to evaluate the effects of different dietary supplementation levels of LSA on growth performance, immune function, blood indices and manure deodorization of broilers. A total of 240 one-day-old healthy Arbor Acres male broilers were randomly allotted to 4 groups with 6 replicates per group and 10 birds per replicate. The four diets included a basal diet without antibiotic and 3 experimental diets supplemented with 1.0×107, 1.0×108 and 1.0×109 CFU/kg LSA based on the basal diet, respectively. The experiment lasted for 42 d and feed and water were accessed ad libitum. The results showed as follows: 1) average daily feed intake, average daily gain, average body weight and ratio of feed to gain of broilers among all groups were not significantly different (P>0.05). 2) Dietary LSA supplementation had no significant influence on thymus index and bursal index of broilers (P>0.05), but 1.0×108 CFU/kg LSA significantly increased spleen index (P<0.05). 3) Dietary LSA supplementation significantly reduced the contents of serum uric acid and plasma ammonia (P<0.05), but had no significant influence on biochemical indices such as serum total protein, albumin and globulin (P>0.05). 4) Dietary LSA supplementation had no significant influence on contents of water and total nitrogen of manure (P>0.05), but 1.0×108 CFU/kg LSA significantly decreased the ammonia nitrogen content of manure (P<0.05). In conclusion, dietary LSA supplementation has no adverse effect on growth performance, immune organs and blood indices, and can enhance the immune function of broilers, improve their nitrogen metabolism, decrease the ammonia nitrogen content in the manure, and reduce environmental pollution.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(7)：2228-2234]

Key words:Candida krusei; broiler; growth performance; immune; blood indices; manure deodorization