針刺對(duì)DMBA誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠ER、PR表達(dá)的影響

曹加偉，黃梅，嚴(yán)晶，徐金龍，楊增榮，黃昆，朱珠，趙榮（云南中醫(yī)學(xué)院，昆明 650000）

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·動(dòng)物實(shí)驗(yàn)·

針刺對(duì)DMBA誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠ER、PR表達(dá)的影響

曹加偉，黃梅，嚴(yán)晶，徐金龍，楊增榮，黃昆，朱珠，趙榮
（云南中醫(yī)學(xué)院，昆明 650000）

【摘要】目的 觀察針刺足三里、三陰交、膻中對(duì)二甲基苯蒽（DMBA）誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠乳腺組織中雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）表達(dá)的影響。方法 將120只6～8周齡的SD雌性大鼠隨機(jī)分為模型組90只和空白組30只。模型組采用DMBA進(jìn)行灌胃造模，空白組給予等劑量的芝麻油灌胃。造模15星期后，將模型組大鼠隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組。治療組采用針刺足三里、三陰交、膻中治療，對(duì)照組和空白組不采用任何治療，僅給予相同的抓放。針刺治療結(jié)束后（第27星期），采用電化學(xué)發(fā)光免疫方法，取腹腔靜脈血做血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)；計(jì)數(shù)腫瘤包塊數(shù)量并記錄形態(tài)，取包塊組織，用精度為1 mm的游標(biāo)卡尺測(cè)量包塊的高度、最大直徑和相垂直的直徑；采用Olympus光學(xué)顯微鏡下觀察腫瘤組織病理學(xué)變化及ER、PR的陽(yáng)性面積及平均光密度。結(jié)果 治療組治療后乳腺腫瘤平均數(shù)目和平均體積與對(duì)照組和空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。對(duì)照組治療后乳腺腫瘤平均數(shù)目和平均體積與空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。治療組和對(duì)照組治療后各項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物（CA724、CA125、CA199、AEP、CA15-3、CEA及CA50）濃度與空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。治療組治療后CA15-3濃度與對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。治療組治療后ER、PR陽(yáng)性面積和平均光密度與對(duì)照組和空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。對(duì)照組治療后ER、PR陽(yáng)性面積和平均光密度與空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論 針刺能夠減少DMBA誘導(dǎo)的大鼠乳腺腫瘤的發(fā)生（包括腫瘤數(shù)目及腫瘤體積的大?。?，其作用機(jī)制可能與降低CA724、CA125、CA199、CA15-3、AEP、CEA、CA50等腫瘤標(biāo)志物的濃度，尤其是降低CA15-3的濃度，減少ER、PR的陽(yáng)性面積和平均光密度相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】針刺療法；乳腺腫瘤；穴，足三里；穴，三陰交；穴，膻中；雌激素受體；孕激素受體；二甲基苯蒽；CA15-3；大鼠

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，是一種嚴(yán)重影響女性身心健康及導(dǎo)致女性死亡的重要病因之一。由于社會(huì)因素、飲食結(jié)構(gòu)、不良的作息和生活習(xí)慣的改變，全球每年乳腺癌的發(fā)生率正以 3%的速度遞增，患者群也漸趨年輕化［1］。預(yù)計(jì)到 2030年，全球乳腺癌的發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)將分別達(dá)到264萬(wàn)和170萬(wàn)［2］。在中國(guó)，乳腺癌的發(fā)病率已居所有腫瘤疾病的第 2位［3］。研究乳腺癌的有效防治方法具有重大意義。乳腺的生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞的增殖分裂主要是受以性激素為中心環(huán)節(jié)的下丘腦-垂體-卵巢軸的綜合調(diào)控，該調(diào)控作用是通過(guò)存在于乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)的雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）才能完成的。筆者通過(guò)觀察針刺足三里、三陰交、膻中對(duì)二甲基苯蒽（DMBA）誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠乳腺組織中ER、PR表達(dá)的影響，探討針刺防治乳腺癌的作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康純種的SD雌性大鼠120只，6～8周齡，體重為150～200 g，由中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所提供，為國(guó)家A級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器

二甲基苯蒽［7，12-Dimethylbenz（a）anthrancene，DMBA，東京化工有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品編號(hào) D0677-3G，GGR4E-GL］，每支1 g，共3支，溶于300 mL芝麻油備用；無(wú)水乙醇、10%甲醛、二甲苯、PBS緩沖液、兔抗鼠ER單克隆抗體、兔抗鼠PR單克隆抗體；特制粗針灸針、特制大鼠固定籠、大鼠手術(shù)臺(tái)、灌胃針、一次性注射器、碘伏；Elecsys測(cè)量池清洗液預(yù)熱杯、Elecsys反應(yīng)杯（瑞士roche公司）、離心機(jī)（湖南凱達(dá)）、促凝試管（英國(guó)BD公司）。

1.3 動(dòng)物分組與模型制備

將120只雌性SD大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組90只和空白組30只，模型組用DMBA分兩次灌胃，每次灌胃 50 mg/kg，間隔 1星期，總劑量為100 mg/kg，以復(fù)制大鼠乳腺癌病變模型；空白組給予等劑量的芝麻油灌胃。造模15星期后，除去檢驗(yàn)造模成功的3只、未能誘導(dǎo)出乳腺癌的12只、在造模過(guò)程中死亡的21只。再將模型組剩余的大鼠隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，每組 27只。所有大鼠均按組分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)條件一致，在室溫為（22.00±1.00）℃、濕度為50%～60%的房間飼養(yǎng)，自由攝食，喂以大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料（由中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所提供），飼料含鈣量為（5.66±2.51）mg/g，含磷量為（5.80±1.61）mg/g，晝夜時(shí)差控制在12 h：12 h。

1.4 檢驗(yàn)造模情況

造模 15星期后，按照隨機(jī)數(shù)字表法從模型組抽取3只大鼠，以光學(xué)顯微鏡檢測(cè)造模情況，可見(jiàn)模型組大鼠乳腺癌組織呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，實(shí)質(zhì)與間質(zhì)分界清楚；癌細(xì)胞排列失去極性，細(xì)胞大小不等，形態(tài)各異；核質(zhì)比例增大；核染色深，核仁大而清楚，可見(jiàn)分泌物及壞死組織，可見(jiàn)病理性核分裂像。

1.5 治療方法

治療組采用針刺治療。取足三里（雙）、三陰交（雙）、膻中穴。穴位定位根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)及技能訓(xùn)練》，并參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》《經(jīng)絡(luò)腧穴學(xué)》中穴位的定位原則及實(shí)驗(yàn)大鼠常用經(jīng)穴檢測(cè)與定位方法［4］，以比較解剖和骨度分寸法為依據(jù)。將大鼠置于大鼠特制固定籠中，穴位先用碘伏標(biāo)記，以特制粗針灸針快速刺入皮下，緩慢刺入肌肉，行捻轉(zhuǎn)瀉法（即以拇指右轉(zhuǎn)為主27轉(zhuǎn)），留針20 min后起針。每星期治療3次，4星期為1個(gè)療程，共治療3個(gè)療程。

對(duì)照組和空白組均不做任何治療，常規(guī)飼養(yǎng)，在治療組治療的同時(shí)，給予相同的抓放。

1.6 觀察指標(biāo)

于治療結(jié)束后（第27星期），對(duì)各組大鼠予以腹腔靜脈采血5 mL后進(jìn)行安樂(lè)死。將已處死大鼠的頸部至腹股溝備皮后，取下整塊腹部皮膚及皮下乳腺組織，進(jìn)行全面篩查，剔除包塊，將包塊對(duì)半切開(kāi)進(jìn)行大體觀測(cè)，計(jì)數(shù)包塊數(shù)量并記錄形態(tài)，并用精度為1 mm的游標(biāo)卡尺測(cè)量包塊的高度、最大直徑和相垂直的直徑。乳腺腫瘤發(fā)生率為該組發(fā)生乳腺腫瘤大鼠數(shù)與該組大鼠總數(shù)之比。腫瘤體積=長(zhǎng)×寬×高×π/6［5］。若1只大鼠有多個(gè)乳腺腫瘤發(fā)生，則該大鼠的乳腺腫瘤體積為每個(gè)乳腺腫瘤體積之和。

將從腹腔靜脈采集的5 mL血液放置于促凝管內(nèi)靜置30 min后，以3500 r/min離心15 min得血清，用Elecsys電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物糖鏈抗原CA724、糖鏈抗原CA125、糖鏈抗原CA199、甲胎蛋白（AEP）、糖鏈抗原CA15-3、癌胚抗原（CEA）、糖類(lèi)抗原CA50。

取包塊組織常規(guī)甲醛固定，梯度乙醇脫水后行石蠟包埋切片，切片厚 5 μm。常規(guī) HE染色后，采用Olympus光學(xué)顯微鏡觀察腫瘤組織病理學(xué)變化，再運(yùn)用兔抗鼠ER單克隆抗體和PR單克隆抗體在光學(xué)顯微鏡下觀察ER、PR的陽(yáng)性面積及平均光密度。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠死亡時(shí)間、數(shù)量和一般情況說(shuō)明

模型組大鼠造模期間死亡21只（第3星期死亡1只，第6星期死亡10只，第9星期死亡8只，第12星期死亡2只），成活率為76.7%；空白組死亡0只，成活率為 100.0%。兩組成活率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。模型組大鼠死亡原因可能是DMBA引起的毒性反應(yīng)，且第6～9星期是DMBA誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠的死亡高峰期。

造模 15星期后，模型組除去檢驗(yàn)造模成功的大鼠3只、未能誘導(dǎo)出乳腺癌的大鼠12只（原因不明），再隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，每組27只。對(duì)照組在治療過(guò)程中死亡4只，死亡原因不明。故實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)（第27星期），空白組大鼠存活30只，治療組存活27只，對(duì)照組大鼠23只。

2.2 各組大鼠治療結(jié)束后乳腺腫瘤平均數(shù)目和平均體積比較

表 1 各組大鼠治療結(jié)束后乳腺腫瘤平均數(shù)目和平均體積比較 （±s）

表 1 各組大鼠治療結(jié)束后乳腺腫瘤平均數(shù)目和平均體積比較 （±s）

注：與空白組比較1）P＜0.01；與對(duì)照組比較2）P＜0.05

組別 　n 　 平均數(shù)目（個(gè)） 　 平均體積（cm3）治療組 　27 　1.51±0.411）2）　1.93±0.571）2）對(duì)照組 　23 　1.97±0.331）　2.59±1.011）空白組 　30 　0.00±0.00 　0.00±0.00

由表 1可見(jiàn)，治療組治療后乳腺腫瘤平均數(shù)目和平均體積與對(duì)照組和空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。對(duì)照組治療后乳腺腫瘤平均數(shù)目和平均體積與空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.3 各組大鼠治療后各項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物濃度比較

由表 2可見(jiàn)，治療組和對(duì)照組治療后各項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物（CA724、CA125、CA199、AEP、CA15-3、CEA及CA50）濃度與空白組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。治療組治療后CA15-3濃度與對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表2 各組大鼠治療后各項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物濃度比較（±s，U/mL）

表2 各組大鼠治療后各項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物濃度比較（±s，U/mL）

注：與空白組比較1）P＜0.05，2）P＜0.01；與對(duì)照組比較3）P＜0.01

指標(biāo) 　　治療組（n=27） 　對(duì)照組（n=23） 　空白組（n=30）糖鏈抗原CA724 　0.15±0.101）　0.17±0.151）　0.11±0.10糖鏈抗原CA125 　0.22±0.201）　0.25±0.101）　0.17±0.05糖鏈抗原CA199 　1.29±0.301）　1.41±0.171）　1.05±0.05甲胎蛋白（AEP） 　0.24±0.351）　0.32±0.161）　0.22±0.10糖鏈抗原CA15-3 0.33±0.201）3）　0.64±0.132）　0.30±0.10癌胚抗原（CEA） 　0.21±0.041）　0.38±0.051）　0.20±0.15糖類(lèi)抗原CA50 　2.30±0.301）　2.40±0.361）　1.20±0.10

2.4 各組大鼠腫瘤組織病理學(xué)表現(xiàn)

于治療結(jié)束后（第 27星期）取各組較典型的病理學(xué)圖片。由圖1可見(jiàn)，與空白組比較，治療組癌組織呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，實(shí)質(zhì)與間質(zhì)分界清楚； 癌細(xì)胞排列失去極性，細(xì)胞大小不等，形態(tài)各異； 核質(zhì)比例增大； 核染色深，核仁大而清楚，可見(jiàn)分泌物及壞死組織，可見(jiàn)病理性核分裂像。對(duì)照組癌組織呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，排列成條索狀或團(tuán)塊狀； 細(xì)胞排列紊亂，失去正常的結(jié)構(gòu)和層次，胞核增大，濃染，異型性明顯，核仁大而清楚，可見(jiàn)病理性核分裂像。

圖1 各組大鼠腫瘤組織病理學(xué)表現(xiàn)

2.5 各組治療后第2、3對(duì)乳腺組織ER、PR的表達(dá)

2.5.1 各組大鼠治療后ER陽(yáng)性面積和平均光密度比較

由表3、圖2可見(jiàn)，治療組大鼠治療后ER陽(yáng)性面積和平均光密度與對(duì)照組和空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。對(duì)照組大鼠治療后ER陽(yáng)性面積和平均光密度與空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表3 各組大鼠治療后ER陽(yáng)性面積和平均光密度比較（±s）

表3 各組大鼠治療后ER陽(yáng)性面積和平均光密度比較（±s）

注：與空白組比較1）P＜0.01；與對(duì)照組比較2）P＜0.01

組別 　n 　　陽(yáng)性面積（μm2） 　　平均光密度治療組 　27 　341.13±187.731）2）　0.22±0.071）2）對(duì)照組 　23 　758.03±514.231）　0.36±0.041）空白組 　30 　0.00±0.00 　0.00±0.00

2.5.2 各組大鼠治療后PR陽(yáng)性面積和平均光密度比較

由表4、圖3可見(jiàn)，治療組大鼠治療后PR陽(yáng)性面積和平均光密度與對(duì)照組和空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。對(duì)照組大鼠治療后PR陽(yáng)性面積和平均光密度與空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表4 各組治療后PR陽(yáng)性面積和平均光密度比較 （±s）

表4 各組治療后PR陽(yáng)性面積和平均光密度比較 （±s）

注：與空白組比較1）P＜0.01；與對(duì)照組比較2）P＜0.01

組別 　n 　　陽(yáng)性面積（μm2） 　　平均光密度治療組 　27 　445.61±232.441）2）　0.22±0.101）2）對(duì)照組 　23 　985.33±497.531）　0.32±0.141）空白組 　30 　0.00±0.00 　0.00±0.00

圖2 各組ER陽(yáng)性面積及平均光密度

圖3 各組PR陽(yáng)性面積及平均光密度

3 討　論

大鼠乳腺癌模型的建立有誘發(fā)性、種植性和自發(fā)性 3種類(lèi)型，以 DMBA 誘導(dǎo)大鼠乳腺癌屬于誘發(fā)性模型，是較為成熟的乳腺癌動(dòng)物模型，廣泛用于腫瘤的病理形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)、影像診斷和藥物治療等研究。有研究［6-7］證實(shí)，DMBA誘導(dǎo)大鼠乳腺癌及癌前病變發(fā)生的動(dòng)態(tài)過(guò)程是經(jīng)過(guò)乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞“正常-一般增生-非典型增生-原位癌-浸潤(rùn)癌”的逐漸演變過(guò)程，與人體乳腺增生到癌變發(fā)展的特點(diǎn)相似。所以，研究 DMBA誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠對(duì)防治人體乳腺癌有著現(xiàn)實(shí)意義。本實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物模型參照鄒利光等［8］描述的方法建立，予SD大鼠分兩次胃管灌注DMBA混懸液（10 mg DMBA/ 1 mL芝麻油）l00 mg/kg體重。DMBA是強(qiáng)力致癌劑，其對(duì)乳腺的選擇作用強(qiáng)，作用機(jī)理可能是在微粒體的輕化酶系作用下，經(jīng)過(guò)經(jīng)基化、環(huán)氧化等代謝過(guò)程最終產(chǎn)生致癌物，引起 DNA損傷，細(xì)胞突變，使正常細(xì)胞分化受阻，出現(xiàn)異常增生，最終形成腫瘤［9］。本實(shí)驗(yàn)采用DMBA誘導(dǎo)的大鼠乳腺癌模型，成活率高，誘發(fā)成功率高。與空白組比較，治療組和對(duì)照組大鼠乳腺腫瘤發(fā)生的數(shù)目較多，腫瘤體積較大（均 P＜0.01）；與對(duì)照組比較，治療組大鼠乳腺腫瘤發(fā)生的數(shù)目明顯下降，腫瘤體積也顯著縮小，兩組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說(shuō)明針刺可通過(guò)減少DMBA誘導(dǎo)的大鼠乳腺腫瘤發(fā)生的數(shù)目及減小腫瘤體積，來(lái)防治大鼠乳腺腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。

腫瘤標(biāo)志物是由腫瘤組織產(chǎn)生的反應(yīng)腫瘤自身存在的化學(xué)物質(zhì)［10］，分為腫瘤特異性和腫瘤相關(guān)性?xún)煞N，絕大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物屬于后一種，腫瘤相關(guān)性標(biāo)志物因在正常組織和腫瘤組織中均可存在，所以其特異性相對(duì)較差。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，治療組和對(duì)照組治療后腫瘤標(biāo)志物糖鏈抗原CA724、糖鏈抗原CA125、糖鏈抗原CA199、甲胎蛋白（AEP）、糖鏈抗原CA15-3、癌胚抗原（CEA）及糖類(lèi)抗原 CA50濃度均顯著升高，與空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與對(duì)照組比較，治療組糖鏈抗原 CA15-3 濃度顯著降低，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。而CA15-3是目前應(yīng)用最為廣泛的乳腺癌血清標(biāo)志物［11］，其對(duì)乳腺腫瘤診斷的陽(yáng)性率高達(dá)54.6%，且越晚期的腫瘤，CA15-3的陽(yáng)性率越高［12］。CA15-3通過(guò)化學(xué)發(fā)光酶免疫法定量分析人血清或血漿中的糖蛋白CA15-3的濃度，其濃度的變化與治療效果密切相關(guān)，是乳腺癌患者診斷、監(jiān)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)和觀察療效的最佳指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明針刺有調(diào)節(jié)血清中糖鏈抗原CA724、糖鏈抗原CA125、糖鏈抗原CA199、甲胎蛋白（AEP）、癌胚抗原（CEA）、糖類(lèi)抗原CA50濃度的作用，特別是調(diào)節(jié)糖鏈抗原CA153 的濃度，提示針刺可以調(diào)節(jié)乳腺腫瘤細(xì)胞的增值、分化和凋亡，從而達(dá)到防治乳腺腫瘤的目的。

ER、PR是目前臨床上應(yīng)用最為普遍、對(duì)制定乳腺癌治療方案最為重要的指標(biāo)，對(duì)評(píng)判預(yù)后有著極其重要的價(jià)值［13-15］。周導(dǎo)等［16］采用免疫組化法測(cè)定乳腺增生模型大鼠第2、3對(duì)乳腺組織中ER、PR表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠ER、PR陽(yáng)性強(qiáng)度和數(shù)量隨著乳腺增生程度的加重而增加，提示ER、PR在乳腺中的表達(dá)情況與乳腺增生程度密切相關(guān)。有研究［17-23］表明，針刺可調(diào)節(jié)ER、PR蛋白表達(dá)，對(duì)乳腺疾病有一定的防治作用。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化方法對(duì)乳腺癌病變大鼠進(jìn)行了ER、PR檢測(cè)，并利用微機(jī)圖像分析系統(tǒng)對(duì)其陽(yáng)性面積和平均光密度進(jìn)行了定量分析。圖像分析測(cè)量結(jié)果快速、精確、可重復(fù)，此法是目前公認(rèn)的病理學(xué)量化研究手段之一，通過(guò)對(duì)陽(yáng)性面積、平均光密度進(jìn)行圖像定量分析，更能客觀科學(xué)地反映乳腺癌變組織細(xì)胞的生物學(xué)特性。本實(shí)驗(yàn)對(duì)各組大鼠ER、PR表達(dá)的影響結(jié)果顯示，與空白組比較，治療組和對(duì)照組ER、PR陽(yáng)性面積和平均光密度均較高（P＜0.01）；與對(duì)照組比較，治療組 ER、PR陽(yáng)性面積和平均光密度明顯下降（P＜0.01），提示針刺治療可減少ER、PR的陽(yáng)性面積和平均光密度，這可能是本法防治大鼠乳腺癌的主要途徑之一，說(shuō)明針刺足三里、三陰交、膻中等穴位可能是以ER、PR為靶點(diǎn)而阻斷和逆轉(zhuǎn)乳腺癌大鼠病變的發(fā)生和發(fā)展。

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【中圖分類(lèi)號(hào)】R2-03

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

DOI：10.13460/j.issn.1005-0957.2016.03.0344

文章編號(hào)：1005-0957（2016）03-0344-05

收稿日期2015-10-16

基金項(xiàng)目：云南省中青年學(xué)術(shù)技術(shù)帶頭人后備人才項(xiàng)目（2012HB034）；云南省教育廳科學(xué)研究基金項(xiàng)目（2015J103）

作者簡(jiǎn)介：曹加偉（1990 - ），男，2014級(jí)碩士生

通信作者：趙榮（1972 - ），女，教授，碩士生導(dǎo)師，Email：382053812@qq.com

Effect of Acupuncture on ER and PR Expressions in Rats with DMBA-induced Mammary Cancer

CAO Jia-wei， HUANG Mei， YAN Jing， XU Jin-long， YANG Zeng-rong， HUANG Kun， ZHU Zhu， ZHAO Rong.
Yunnan College of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650000，China

［Abstract］Objective To investigate the effect of acupuncture at Zusanli， Sanyinjiao and Danzhong on mammary estrogen receptor （ER） and progesterone receptor （PR） expressions in rats with dimethylbenzanthracine （DMBA）-induced mammary cancer. Methods One hundred and twenty female SD rats aged 6-8 weeks were randomized into a model group of 60 rats and a blank group of 30 rats. The model group received an oral gavage of DMBA for model making. The blank group received an oral gavage of equal volume of sesame oil. At 15 weeks after model making， the model group of rats was randomized into treatment and control groups. The treatment group received acupuncture at Zusanli， Sanyinjiao and Danzhong， and the control and blank groups， only the same grasp and release. After the completion of acupuncture treatment （twenty-seventh week）， abdominal venous blood was taken and serum tumor markers were determined by electrochemiluminescence immunoassay. Tumor masses were counted and their shapes were recorded. The mass was taken and its height， maximum diameter and vertical diameter were measured using a 1 mm precision vernier caliper. Pathological changes in tumor tissues， and ER and PR positive areas and mean optical densities were observed under an Olympus optical microscope. Results There were statistically significant post-treatment differences in the average number and volume of mammary tumors between the treatment group and the control or blank group （P＜0.01， P＜0.05） and between the control and blank groups （P＜0.01）. There were statistically significant post-treatment differences in the concentrations of various tumor markers （CA724， CA125， CA199， AEP， CA15-3， CEA and CA50） between the treatment or control group and the blank group （P＜0.01， P＜0.05） and between the control and blank groups （P＜0.01）. There was a statistically significant post-treatment difference in CA15-3 concentration between the treatment and control groups （P＜0.01）. There were statistically significant post-treatment differences in ER and PR positive areas and mean optical densities between the treatment group and the control or blank group （P＜0.01） and between the control and blank groups （P＜0.01）. Conclusions Acupuncture can reduce the occurrence of rat DMBA-induced mammary tumor （including the number and volumes of the tumors）. The mechanism of its action may be related to decreasing the concentrations of tumor markers CA724， CA125， CA199， CA15-3， AEP， CEA and CA50 and especially to decreasing CA15-3 concentration， and ER and PR positive areas and mean optical densities.

［Key words］Acupuncture therapy； Mammary cancer； Point， Zusanli； Point， Sanyinjiao； Point Danzhong； Estrogen receptor；Progesterone receptor； Dimethylbenzanthracine； CA15-3s； Rats