不同稀釋液及稀釋倍數(shù)對β- HCG測定結(jié)果準(zhǔn)確性的影響

楊昌偉，鄭家深，李雪，吳雁，王攀

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，貴州　遵義563003)

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不同稀釋液及稀釋倍數(shù)對β- HCG測定結(jié)果準(zhǔn)確性的影響

楊昌偉，鄭家深，李雪，吳雁，王攀

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，貴州遵義563003)

摘要：目的探討臨床實際工作中不同稀釋液及稀釋倍數(shù)對β-HCG測定結(jié)果的影響。方法選用Roche E601電化學(xué)發(fā)光法：⑴不同稀釋液比較：選取廠家原裝稀釋液、自制陰性血清、生理鹽水、去離子水與已知高濃度的標(biāo)本血清，分別進行倍比稀釋檢測，其結(jié)果與理論值進行偏倚分析，確定最佳的稀釋液。⑵最佳稀釋倍數(shù)選擇：收集本院β-HCG>10000mIU/ml血清標(biāo)本150例，采用廠家原裝稀釋液、自制陰性血清分別進行1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128倍稀釋后檢測，將檢測結(jié)果進行分析比較，確定最佳稀釋倍數(shù)。結(jié)果⑴用自制陰性血清稀釋后的檢測結(jié)果與原裝稀釋液稀釋后所得結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.952，P=0.927）；生理鹽水、去離子水稀釋后所得結(jié)果與原裝稀釋液稀釋后所得結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=22.131、19.415，P=0.000、0.000）。⑵對收集的高濃度150例血清標(biāo)本，選擇自制陰性血清稀釋，確立1:32倍為最佳稀釋倍數(shù)。其一次性檢出率為95%，并與原裝稀釋液稀釋檢測結(jié)果基本一致。結(jié)論對于β-HCG濃度過高的標(biāo)本，可以直接選用自制陰性血清作為替代稀釋液，稀釋倍數(shù)應(yīng)首選32倍。其結(jié)果的檢出率和準(zhǔn)確性均較高，同時節(jié)省了成本，值得臨床大力推廣。但其血清未經(jīng)滅活，存在潛在感染危險，操作時多加強預(yù)防措施。

關(guān)鍵詞：電化學(xué)發(fā)光；β-HCG；稀釋液；稀釋倍數(shù)

在臨床實際工作中，β-HCG值常常濃度較高，超出檢測范圍得不到具體的濃度值，為臨床工作帶來極大不便，為了得到具體的結(jié)果，需要對標(biāo)本進行多次稀釋，重復(fù)檢測[1，2]，這樣既耽誤就診時間還浪費大量成本。同時，如果稀釋液和稀釋倍數(shù)選擇不當(dāng)，也會對結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，為了得到最佳的準(zhǔn)確結(jié)果和節(jié)省成本，本文采用廠家原裝稀釋液、陰性血清、生理鹽水、去離子水作為稀釋液，對已知高濃度β-HCG血清進行稀釋測定，其結(jié)果報告如下。

1　材料與方法

1.1樣本來源本院就診患者2015年1月至2015 年10月β-HCG>10000mIU/ml血清標(biāo)本共150例，女，平均年齡24.5歲，均來自正常受孕婦女，排除其他甲狀腺、感染、婦科疾病。

1.2儀器與試劑β-HCG試劑校準(zhǔn)品及復(fù)合質(zhì)控物，廠家原裝β-HCG稀釋液，儀器和試劑均由羅氏公司提供。選取本實驗室男性體檢標(biāo)本血清作為陰性血清（要求無溶血、黃疸、無脂血）；生理鹽水、去離子水自備。

1.3檢測方法將已知濃度為9350mIU/ml的β-HCG血清樣本分別用原裝稀釋液、陰性血清、生理鹽水、去離子水按（1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：

64、1：128)稀釋，做雙份檢測求平均值。將收集的150例β-HCG>10000mIU/ml血清標(biāo)本同上方法稀釋后檢測，確定最佳稀釋倍數(shù)。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析采用統(tǒng)計軟件SPSS 18.0，對正態(tài)計量資料采用以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，運用單因素方差分析（One-way ANOVA），數(shù)據(jù)進一步的兩兩比較采用LSD法，檢驗水準(zhǔn)為0.05；結(jié)果比較采用測定數(shù)據(jù)與其理論值之間比較其偏差程度(%)。

2　結(jié)果

2.1偏差計算分析已知濃度為9350mIU/ml的β-HCG血清樣本經(jīng)原裝稀釋液、陰性血清、生理鹽水、去離子水稀釋后檢測結(jié)果與理論值比較。對同一高值β-HCG用原裝稀釋液和陰性血清分別按不同比例稀釋檢測，測定值與理論值比較，偏差分別為0.38%～4.87%，0.78%～5.93%，檢測結(jié)果分別兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.952，P=0.927）；生理鹽水、去離子水稀釋后與理論值結(jié)果比較，其偏差分別為4.45%~29.75%，8.71%~26.55%。生理鹽水、去離子水稀釋后所得結(jié)果與原裝稀釋液稀釋后所得結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=22.131、19.415，P=0.000、0.000）。見表1。

2.2稀釋倍數(shù)選擇將150例β-HCG>10000mIU/ mL血清標(biāo)本分別用原裝稀釋液和陰性血清進行1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128倍稀釋后檢測。能一次性檢測出實際結(jié)果的機率分別為（21%、39%、75%、90%、95%、98%、99%），結(jié)果的準(zhǔn)確性顯示稀釋倍數(shù)越低，檢測結(jié)果越靠近理論值，稀釋倍數(shù)越高，結(jié)果偏差越大，但1：32的稀釋倍數(shù)的檢出率和準(zhǔn)確性均較高。

表1　高值β-HCG經(jīng)不同稀釋液稀釋后檢測結(jié)果（±s，mIU/ml）

表1　高值β-HCG經(jīng)不同稀釋液稀釋后檢測結(jié)果（±s，mIU/ml）

稀釋倍數(shù)　1:2理論值原稀釋液陰性血清生理鹽水去離子水F值P值9350 4615±80.28 4601±78.11 4883±99.12 5082±111.19 307.191 0.000 1:4　1:8　1:16　1:32　偏倚（%）4675 2328±41.32 2319±64.52 2604±71.38 2691±75.11 190.709 0.000 2337.50 1173±43.25 1188±48.71 1349±60.33 1433±50.27 200.738 0.000 1168.75 592±33.12 603±35.28 744±55.19 739±60.18 211.387 0.000 584.38 306±21.71 309±18.33 379±30.15 363±43.17 254.333 0.000 292.18 0.38～4.87 0.78～5.93 4.45～29.75 8.71～26.55

3　討論

目前，人絨毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotropin，HCG）在臨床上主要用于早期妊娠、妊娠相關(guān)疾病及滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤等疾病診斷[3，4]。HCG由α、β兩個亞基組成，α亞單位與某些激素如TSH、LH、FSH具有相同的抗原性，在測定時易產(chǎn)生交叉反應(yīng)從而對HCG的測定造成一定的影響，β亞單位則有其特異性，所以臨床常以檢測β亞單位來作為HCG檢測[5]?；瘜W(xué)發(fā)光法及電化學(xué)發(fā)光法是目前臨床上主要檢測HCG的方法，具有靈敏度高，特異性好，檢測線性寬等優(yōu)點。但在臨床常規(guī)檢測中，也經(jīng)常會遇到病人樣本β-HCG含量超出檢測范圍的情況，臨床得不到實際的準(zhǔn)確值。為提供一個真實、準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，稀釋液及其最佳稀釋倍數(shù)的選擇顯得尤為重要。

由于廠家所提供的原裝稀釋液價格昂貴，檢測成本高，在國內(nèi)實際工作中使用生理鹽水、去離子水稀釋檢測的現(xiàn)象非常普遍，這樣嚴(yán)重影響檢測結(jié)果。本次研究結(jié)果顯示，原裝稀釋液和陰性血清分別按不同比例稀釋檢測，檢驗結(jié)果與理論值比較接近，而生理鹽水稀釋后與理論值差異較大，與文獻報道相符[6]。其中可能的原因是生理鹽水的離子強度，pH值（5.9左右）與病人樣本及標(biāo)準(zhǔn)品差別較大，存在基質(zhì)效應(yīng)而導(dǎo)致結(jié)果偏差較大[7，8]，因而不能滿足免疫反應(yīng)的環(huán)境要求。去離子水pH6～7，但溶質(zhì)極低[9]，極大的改變了免疫反應(yīng)體系中的蛋白質(zhì)種類和離子強度，同樣不能作為稀釋液使用。但陳廣福等用磁分離酶聯(lián)免疫法檢測高濃度HCG標(biāo)本時，結(jié)論是除專用稀釋液外，生理鹽水是磁分離酶聯(lián)免疫法測定血清HCG的首選稀釋液[10]，這與本文結(jié)果不相符，具體原因有待進一步探討。所以不同檢測項目用同一檢測方法或同一檢測項目用不同檢測方法選用稀釋液時，應(yīng)做類似試驗加以確定。

自制陰性血清新鮮、無溶血、黃疸、脂血等，不會對免疫反應(yīng)的環(huán)境造成影響，其pH值、溶質(zhì)、蛋白質(zhì)種類、離子強度均滿足免疫反應(yīng)條件，靈敏度和準(zhǔn)確性均較高，可代替專用的原裝β-HCG稀釋液使用[11]。且制備來源、保存條件均方便，在-40℃冷凍保存至少可穩(wěn)定半年，置2～8℃普通冰箱保存2～3周，常溫下避光保存至少可穩(wěn)定5d[12]。稀釋倍數(shù)選擇，使用1：32稀釋倍數(shù)，一次性檢測出實際結(jié)果的幾率達95%，檢測結(jié)果與理論值比較非常接近。其不同稀釋倍數(shù)檢出能力與檢測準(zhǔn)確性變化的規(guī)律為稀釋倍數(shù)越低，準(zhǔn)確性越高，一次性檢出率越低；稀釋倍數(shù)越高，準(zhǔn)確性越低，而一次性檢出率越高。這可能是隨著稀釋倍數(shù)的增大，產(chǎn)生的誤差也越大所導(dǎo)致的結(jié)果，因此，在確立稀釋倍數(shù)的同時，既要考慮檢出結(jié)果的準(zhǔn)確性，還得顧及一次性檢出的幾率，從而降低檢測成本。

總之，使用自制陰性血清進行高值β-HCG稀釋，既不影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度，同時選擇適當(dāng)稀釋倍數(shù)還可提高一次性的檢出率。且制備來源和保存條件均非常方便，同時節(jié)省了成本，值得臨床大力推廣。但其血清未經(jīng)滅活，存在潛在感染危險，操作時應(yīng)加強預(yù)防措施。

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·檢驗與臨床·

中圖分類號：R446.62

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)03-0347-02

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.025

通信作者：王攀。

(收稿日期2016-03-07；修回日期2016-04-21)