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    改良嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液及應(yīng)用

    2014-08-15 00:54:12郭書(shū)俠路廣平薛占輝
    關(guān)鍵詞:本法稀釋液著色

    李 云 郭書(shū)俠 董 蕤 路廣平 薛占輝

    (河北省遷安市人民醫(yī)院,①遷安市中醫(yī)院 河北遷安 064400;②灤縣人民醫(yī)院;③廊坊市廣陽(yáng)區(qū)婦幼保健醫(yī)院;④遷西縣中醫(yī)院)

    嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)臨床常見(jiàn)的是直接計(jì)數(shù)、涂片白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)和血球計(jì)數(shù)儀分類(lèi)計(jì)數(shù)3種方法。但是臨床上為了解疾病進(jìn)展過(guò)程,需要?jiǎng)討B(tài)觀察嗜酸性粒細(xì)胞的變化,往往采用嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)。文獻(xiàn)報(bào)道[1,2],嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)的稀釋液較多,用等滲的生理鹽水配制嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液,與《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液相比,各有優(yōu)缺點(diǎn)。我院探討使用血小板計(jì)數(shù)稀釋液來(lái)配制嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液,在臨床實(shí)踐了3年,計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確可靠,報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 試劑 《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液配制詳見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[3]。嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液。稱(chēng)取草酸銨1.0g,EDTA.2Na 0.012g,伊紅0.2g,溶于50mL蒸餾水中,再加入0.6mL TritonX-100,加蒸餾水至100mL。

    1.2 方法 于試管中加入稀釋液0.38mL,取患者末梢血(或EDTA.2K抗凝全血)0.02 mL,混勻,5min后沖入計(jì)數(shù)板的兩計(jì)數(shù)池內(nèi),靜置3~5min。用低倍鏡計(jì)數(shù),鏡下嗜酸性粒細(xì)胞被染成桔紅色,其它未被破壞的細(xì)胞幾乎不著色。計(jì)數(shù)兩個(gè)計(jì)數(shù)室10個(gè)大方格(中央和四角大方格)內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。計(jì)算嗜酸性粒細(xì)胞/L=10個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)×20×106/L。

    2 結(jié)果

    2.1 對(duì)比試驗(yàn) 取住院121例患者的EDTA.2K抗凝全血,分別用《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液(Y)與本法稀釋液(X)進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),結(jié)果本法稀釋液(163.4±34.7)×106/L,推薦稀釋液(165.0±35.1)×106/L,2種稀釋液計(jì)數(shù)結(jié)果差異無(wú)顯著性(P>0.05),其相關(guān)系數(shù)r=0.991,相關(guān)方程Y=1.0216X+3.1247。

    2.2 著色時(shí)間比較 將稀釋液與抗凝全血混合后,分別在120、180、240、270、300s進(jìn)行直接計(jì)數(shù),《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液在300s后嗜酸性粒細(xì)胞被染成紅色,本法稀釋液在180s后嗜酸性粒細(xì)胞被染成紅色。

    2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 用本法稀釋液進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)25次重復(fù)試驗(yàn)

    3 討論

    文獻(xiàn)報(bào)道,嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液有很多種,主要是圍繞破壞紅細(xì)胞和部分白細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞不被破壞且著色進(jìn)行改進(jìn)的。根據(jù)草酸銨有破壞紅細(xì)胞的作用,巧妙地運(yùn)用血小板計(jì)數(shù)稀釋液來(lái)配制嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液。我們?cè)谂渲蒲“逵?jì)數(shù)稀釋液的同時(shí),在每100 mL血小板計(jì)數(shù)稀釋液中加入伊紅0.2g、0.6mL TritonX-100即可成為嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液,這樣就可以簡(jiǎn)化嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液配制過(guò)程。EDTA.2Na有抗凝和防止草酸鈣沉淀作用。表面活性劑TritonX-100能加速染料溶解,增強(qiáng)染料對(duì)細(xì)胞的滲透作用,從而使嗜酸性粒細(xì)胞著色加快。TritonX-100的濃度為0.6%[4]時(shí),只破壞除嗜酸性粒細(xì)胞以外的細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞幾乎不受影響。本稀釋液沒(méi)使用揮發(fā)性試劑,這樣稀釋液保質(zhì)期就相對(duì)較長(zhǎng),使用一年之久,仍效果很好。本法具有試劑配制簡(jiǎn)單,著色時(shí)間短,試劑保質(zhì)期長(zhǎng),一種試劑2種用途等優(yōu)點(diǎn)。

    [1]李 云,郭書(shū)俠,陳夢(mèng)芝.一種嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液的應(yīng)用[J].河北醫(yī)學(xué),1999,5(6):59

    [2]李 云,郭書(shū)俠.溴酚藍(lán)在嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,22(1):34

    [3]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006.136

    [4]幸建英,尹 玲,王學(xué)風(fēng).TritonX-100在嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)中的應(yīng)用[J].陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),1996,11(3):50

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