艱難梭菌毒素A&B測(cè)定在醫(yī)院腹瀉患者中的應(yīng)用價(jià)值研究

黎華　陸國(guó)標(biāo)　王穗雯

【摘要】 目的 研究艱難梭菌毒素 A&B（CDAB）測(cè)定在醫(yī)院腹瀉患者中的應(yīng)用價(jià)值。方法 54例住院后出現(xiàn)腹瀉的患者， 均采取 CDAB檢測(cè)試劑與 VIDAS分析儀進(jìn)行糞便標(biāo)本的毒素檢測(cè)， 結(jié)合患者的臨床資料、治療情況及細(xì)菌常規(guī)培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行綜合性分析。結(jié)果 54例患者經(jīng)檢測(cè)后， 有 9例患者檢測(cè)出艱難菌毒素陽(yáng)性， 并且檢測(cè)結(jié)果均與患者的臨床診治相符。9例 CDAB陽(yáng)性患者中， 2例為神經(jīng)外科患者、2例為風(fēng)濕科患者、2例為腫瘤科患者、2例為脊柱外科患者、1例為兒科患兒， 其年齡10～64歲， TV值為 0.53～3.98。結(jié)論 對(duì)腹瀉患者進(jìn)行艱難梭菌毒素A&B測(cè)定具有重要的臨床價(jià)值， CDAB檢測(cè)試劑與 VIDAS分析儀檢測(cè)操作簡(jiǎn)單便捷、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確且快速， 值得臨床推廣。

【關(guān)鍵詞】 艱難梭菌毒素 A&B；腹瀉；醫(yī)院感染

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.16.084

艱難梭菌屬于條件致病菌， 是存在于人體腸道中的一種厭氧革蘭陽(yáng)性芽孢桿菌[1]。如果腸道內(nèi)的環(huán)境受到破壞， 被抑制的艱難梭菌會(huì)大量繁殖， 從而造成腹瀉癥狀及假膜性結(jié)腸炎等[2]。對(duì)艱難梭菌毒素進(jìn)行快速有效的檢測(cè)， 是艱難菌素相關(guān)腹瀉癥狀早期診斷、控制與預(yù)防醫(yī)院感染傳播的重要條件。本文對(duì)艱難梭菌毒素 A&B測(cè)定在腹瀉患者中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探討， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取 2015年 2～7月本院 54例住院后出現(xiàn)腹瀉的患者， 均在住院 3 d后發(fā)生腹瀉、24 h內(nèi)糞便形狀不成形 >3次、在近 1個(gè)月內(nèi)使用過(guò)喹諾酮類(lèi)、克林霉素及頭孢菌素等廣譜抗菌藥物。

1. 2 方法

1. 2. 1 儀器與試劑 CDAB檢測(cè)試劑與 VIDAS分析儀 （法國(guó)生物梅里埃公司）；大便常規(guī)培養(yǎng)基成分 （上海天和微生物試劑公司）。

1. 2. 2 檢測(cè)方法 將所有患者的糞便標(biāo)本及時(shí)接種于 SS及Mac培養(yǎng)基， 進(jìn)行 48 h的常規(guī)培養(yǎng)， 觀察標(biāo)本中有沒(méi)有腸道致病菌生長(zhǎng)。將充分混合的液體糞便 200 μl或者半固體糞便200 mg利用移液器加入至干凈離心管中， 在離心管中滴入樣品稀釋液 1000 μl， 采用渦輪旋轉(zhuǎn)混合器對(duì)樣品進(jìn)行混合， 直至樣品完全均勻。在2～25℃下， 離心12000 g、5 min， 取上清液 300 μl， 用于艱難梭菌毒素 A&B試驗(yàn)， 嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1. 2. 3 原理及程序 將酶聯(lián)熒光分析法 （ELFA）結(jié)合最后熒光檢測(cè)；固相容器 （SPR）在分析中具有固相作用， 同時(shí)也具有移液裝置的作用；上述步驟均由儀器自動(dòng)進(jìn)行。反應(yīng)介質(zhì)需將 SPR多次移出移入。在每個(gè)步驟完成之后均需進(jìn)行清洗， 將未結(jié)合的組分去除。先將樣品中毒素A、毒素 B分別結(jié)合涂抹于 SPR內(nèi)部的兔多克隆 （毒素 A抗體）、鼠單克隆 （毒素 B抗體 ）， 并均和生物素共軛。其中生物素經(jīng)與堿性磷酸酶共軛的鏈霉素培養(yǎng)進(jìn)行檢測(cè)， 檢測(cè)孔內(nèi)對(duì)堿性磷酸酶催化底物進(jìn)行水解， 使其水解成為熒光產(chǎn)物， 并在 459 nm下對(duì)熒光進(jìn)行測(cè)量， 熒光的強(qiáng)度和樣品中毒素A、毒素 B的數(shù)量為正相關(guān)性。所有分析過(guò)程均在儀器上自動(dòng)完成， 其檢測(cè)的結(jié)果是被測(cè)樣品的熒光強(qiáng)度， 并采用 TV值表示。

1. 3 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 陰性：測(cè)試值的解釋 <0.13；中介：測(cè)試值的解釋 0.13～0.37；陽(yáng)性：測(cè)試值的解釋>0.37。

2 結(jié)果

54例腹瀉患者經(jīng)艱難梭菌毒素 A&B檢測(cè)后， 9例患者檢測(cè)出艱難菌毒素陽(yáng)性， 陽(yáng)性率為 16.67%， 并且檢測(cè)結(jié)果均與患者的臨床診治相符。54例患者的大便常規(guī)培養(yǎng)結(jié)果為：36例患者無(wú)致病菌生長(zhǎng)， 7例腸球菌屬， 6例腸肝菌科， 3例白假絲酵母素， 其余 2例為其他致病菌。9例 CDAB陽(yáng)性患者中， 2例為神經(jīng)外科患者、2例為風(fēng)濕科患者、2例為腫瘤科患者、2例為脊柱外科患者、1例為兒科患兒， 其年齡10～64歲， TV值為 0.53～3.98， 所有患者均伴有不同程度的腹痛、腹脹， 且大便為糊狀或稀水樣；大部分患者具有發(fā)熱癥狀， 嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)心跳加速、電解質(zhì)紊亂及神志淡漠等全身中毒癥狀；患者在腹瀉前使用過(guò)的抗菌藥物種類(lèi)有氨芐西林、左氧氟沙星及頭孢吡肟等；9例患者外周血檢查顯示白細(xì)胞增多， 且大便常規(guī)檢查顯示可見(jiàn)膿細(xì)胞。

3 討論

目前， 大多數(shù)學(xué)者均認(rèn)為艱難梭菌是引起抗菌藥物相關(guān)腹瀉癥狀 （AAD）的主要原因。AAD患者中有 15%～25%及絕大部分假膜性結(jié)腸炎 （PMC）患者是因艱難梭菌導(dǎo)致的[3]。發(fā)生艱難梭菌相關(guān)性腹瀉 （CDAD）通常與抗菌藥物的使用相關(guān)， 其是一種菌群失調(diào)的結(jié)果。而如果長(zhǎng)時(shí)間使用頭孢菌素類(lèi)、

青霉素類(lèi)、加替沙星及克林霉素等廣譜抗菌藥物， 易造成菌群失調(diào)， 使耐藥的艱難梭菌可能在被藥物選擇過(guò)后進(jìn)行大量繁殖導(dǎo)致發(fā)病[4]。本研究中顯示， 9例 CDAB陽(yáng)性患者主要使用過(guò)氨芐西林、左氧氟沙星及頭孢吡肟等抗菌藥物， 大多為廣譜抗菌藥， 并且多為聯(lián)用， 而 9例患者中僅 1例患兒為10歲， 其余患者均 >42歲， 并均有較嚴(yán)重的基礎(chǔ)疾病。

在本研究中， 9例 CDAB陽(yáng)性患者的臨床表現(xiàn)與實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果等均與 CDAD患者相符， 且其中 3例患者經(jīng)檢測(cè)適宜艱難梭菌感染治療后， 采用甲硝唑治療， 病情均得到明顯改善， 再進(jìn)行 CDAB檢測(cè)顯示為陰性。因此， 艱難梭菌毒素A&B測(cè)定對(duì)醫(yī)院腹瀉患者具有重要的應(yīng)用價(jià)值[5]。而本研究顯示， CDAB陽(yáng)性患者在大多數(shù)科室均不止 1例， 其可能是由于艱難梭菌具有小流行的原因。因此， 在每個(gè)科室應(yīng)制訂系統(tǒng)規(guī)范的預(yù)防 CDAD體系， 嚴(yán)格對(duì)感染患者實(shí)施隔離措施， 進(jìn)行消毒處理， 并且醫(yī)護(hù)人員需注意手部衛(wèi)生， 加強(qiáng)醫(yī)院環(huán)境的消毒， 維持環(huán)境清潔等。

參考文獻(xiàn)

[1] 朱宇， 王力， 馮莎娜， 等. 惡性腫瘤患者艱難梭菌相關(guān)性腹瀉的臨床危險(xiǎn)因素分析.中華腫瘤雜志， 2014， 36（10）：773-777.

[2] 李文麗， 簡(jiǎn)子娟， 劉文恩， 等. 艱難梭菌毒素A&B測(cè)定在醫(yī)院腹瀉患者中的應(yīng)用.中國(guó)感染控制雜志， 2010， 9（4）：261-263.

[3] 劉元元， 劉文恩， 簡(jiǎn)子娟， 等. 住院腹瀉患者艱難梭菌檢測(cè)與分析.中國(guó)感染控制雜志， 2012， 11（4）：293-296.

[4] 宋文斌， 岳云雷， 郎海波， 等. 蘭州地區(qū)腹瀉患者艱難梭菌的感染狀況調(diào)查.中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志， 2014， 26（10）：1138-1139.

[5] 張艷， 董嗣慶. 228例急性腹瀉患者臨床治療體會(huì).中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用， 2009， 3（24）：113-114.

[收稿日期：2016-03-17]