亳菊試管嫁接苗褐變生理機(jī)制研究

紀(jì)薇，王瑞，狄娟，劉榕晨，羅堯幸，茹慧玲，楊忠義*

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，山西 太谷 030801； 2.山西省農(nóng)科院 果樹(shù)研究所，山西 太谷 030800)

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亳菊試管嫁接苗褐變生理機(jī)制研究

紀(jì)薇1，王瑞1，狄娟1，劉榕晨1，羅堯幸1，茹慧玲2，楊忠義1*

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，山西 太谷 030801； 2.山西省農(nóng)科院 果樹(shù)研究所，山西 太谷 030800)

摘要：[目的]揭示亳菊試管微嫁接過(guò)程中組培苗發(fā)生褐變的生理機(jī)制。[方法]本研究以亳菊外植體為研究材料，使用福林酚法和多酚氧化酶活性測(cè)定法，對(duì)發(fā)生褐變的亳菊微嫁接苗總酚含量、多酚氧化酶活性以及褐變指數(shù)進(jìn)行測(cè)定。[結(jié)果]亳菊微嫁接苗褐變級(jí)數(shù)越高，發(fā)生褐變的情況越嚴(yán)重，4級(jí)褐變率(89.7%)顯著高于其他褐變級(jí)數(shù)；隨著褐變級(jí)數(shù)的增大，亳菊試管微嫁接苗組織內(nèi)總酚含量降低，多酚氧化酶活性增強(qiáng)，即褐變級(jí)數(shù)與外植體總酚含量成負(fù)相關(guān)，與多酚氧化酶活性成正相關(guān)。[結(jié)論]本研究為提高亳菊試管微嫁接效率提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：菊花； 菊試管微嫁接； 褐變

亳菊(Dendranthema morifolium (Ramat.)Tzve.l‘Boju’cv.nov.) 為多年生草本植物，菊科菊屬，是藥用菊花中重要的一種，主要產(chǎn)于安徽亳州，為四大名菊之一，觀賞價(jià)值高，有疏風(fēng)散熱、解暑明目等藥用價(jià)值[1,2]。由于亳菊生活范圍逐漸縮小，并且農(nóng)民為獲得更高利潤(rùn)而更換種植種類(lèi)，使得亳菊種質(zhì)資源急劇減少。為了緩解土地壓力以及快速改良品種性狀，組培成為植物快速繁殖的重要手段，并且采用試管微嫁接技術(shù)達(dá)到大量生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)脫毒苗的目的。然而，亳菊同其他植物外植體一樣，在組培過(guò)程中，自身組織會(huì)從外表向培養(yǎng)基釋放褐色物質(zhì)，使培養(yǎng)基逐漸變?yōu)楹稚?，外植體也逐漸枯萎死亡[3]。

組織培養(yǎng)過(guò)程中亳菊試管微嫁接苗培養(yǎng)過(guò)程中因褐變導(dǎo)致植株死亡情況嚴(yán)重。本試驗(yàn)以不同褐變程度的亳菊微嫁接苗為材料，對(duì)其總酚含量、多酚氧化酶活性及褐變指數(shù)進(jìn)行測(cè)定并進(jìn)行相關(guān)性分析，旨在為優(yōu)化亳菊試管微嫁接技術(shù)體系提供理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝站位于山西省晉中市太谷縣山西農(nóng)業(yè)大學(xué)(37°43′N(xiāo)，112°59′E)，土壤以褐土為主，為溫帶大陸性氣候。本試驗(yàn)選取亳菊的幼嫩莖段與莖尖為試驗(yàn)材料，對(duì)發(fā)生褐變嫁接苗進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察和指標(biāo)測(cè)定。

1.2儀器和試劑

儀器：臺(tái)式冷凍離心機(jī)(型號(hào)：PRIMOR；產(chǎn)地：德國(guó))，雙人單面垂直潔凈工作臺(tái)(型號(hào)：SW-CJ-2FD；產(chǎn)地：上海)，紫外分光光度計(jì)(型號(hào)：UV-7504；產(chǎn)地：上海)，恒溫水浴鍋(型號(hào)：HH-2：產(chǎn)地：常州)。

試劑：福林酚(購(gòu)自北京華邁科生物技術(shù)有限責(zé)任公司)，鄰苯二酚、丙酮、無(wú)水乙醇、沒(méi)食子酸、磷酸、檸檬酸、碳酸鈉(均購(gòu)自徐州索通生物科技有限公司)。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1試管微嫁接

將試驗(yàn)材料放入大燒杯中，紗布封口后用流水沖洗2h左右，然后將外植體在超凈工作臺(tái)上用75%酒精消毒30s，蒸餾水清洗3遍后，用10%次氯酸鈉消毒10min，再用蒸餾水清洗3遍，在濾紙上吸干外植體表面水分。用剪刀將植物材料分為莖段與莖尖兩個(gè)部分，去除植物較大的葉片，留1～2片小葉片[4～6]。將莖段的上端平切，下端斜切。沿砧木頂部縱切，長(zhǎng)度約0.5cm，選粗度與砧木相近的接穗，留頂部1～2片葉子, 并將其基部成楔形(長(zhǎng)約0.5cm)。將接穗插入砧木中，用錫鉑紙將接口部位綁緊。最后把嫁接好的試管苗接入ER培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)[7～9]。

1.3.2多酚氧化酶活性的測(cè)定

多酚氧化酶活性測(cè)定試驗(yàn)采用印芳等[10]的方法，稍作改良?；静襟E如下：將混合的材料稱(chēng)取0.5g，在預(yù)冷后的研缽中加入磷酸-檸檬酸緩沖液冷凍研磨提取，待充分研磨后定容至10mL(低溫操作)，用低溫離心機(jī)離心15min，轉(zhuǎn)速與溫度分別為3 000r·min-1、0～4 ℃，離心后所得的上清液即為多酚氧化酶待測(cè)液。量取待測(cè)液5mL，再加入5mL反應(yīng)體系(4.0mL0.1mol·L-1磷酸—檸檬酸緩沖液，1.0mL1%鄰苯二酚)，充分反應(yīng)2min后，將混合液在30 ℃的水浴上保溫30min。取出液體4min后在波長(zhǎng)為460nm處測(cè)定吸光度值[10]。

測(cè)量多酚氧化酶活性試驗(yàn)，試驗(yàn)重復(fù)3次，測(cè)量吸光值時(shí)以每分鐘A460變化 0.01為一個(gè)多酚氧化酶活性單位(U)。

多酚氧化酶活性/U·(g·min)-1=(A460×VT)/(W×VS×0.01×t)

式中：A460：反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化；W：樣品鮮重/g；t:反應(yīng)時(shí)間/min；VT：提取酶液總體積/mL；VS：測(cè)定時(shí)取用酶液體積/mL。

1.3.3總酚含量的測(cè)定(沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)曲線)

試驗(yàn)采用Folin-Ciocalteu試劑法，總酚含量的測(cè)定采用徐輝艷等[11]的方法，并有一定的改進(jìn)?；静襟E如下：稱(chēng)取0.5g的混合材料冷凍保存，研磨，定容，量取制備好的液體0.5mL于50mL容量瓶中， 加30mL蒸餾水搖勻，再加入2.5mL福林酚試劑和7.5mL20%碳酸鈉溶液，定容，水浴10min，溫度為75 ℃，待冷卻后于760nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定吸光度值。試驗(yàn)重復(fù)3次[11]。

標(biāo)準(zhǔn)液的配置：稱(chēng)取0.005g沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)樣，用蒸餾水溶解并定容至50mL。量取制備好的溶液0、0.5、1、1.5、2、2.5、3mL于50mL容量瓶中，各加30mL蒸餾水搖勻，再加2.5mL福林酚試劑，充分搖勻，待反應(yīng)1min后再加入20%碳酸鈉溶液7.5mL，搖勻定容。75 ℃水浴10min，冷卻后于760nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定吸光度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線[11]。

1.3.4總酚含量的測(cè)定(鄰苯二酚為標(biāo)準(zhǔn)曲線)

試驗(yàn)采用Folin-Ciocalteu試劑法，總酚含量的測(cè)定采用Bonilla等[12]的方法，并有一定的改進(jìn)?；静襟E如下：取0.5g材料，加入3mL95%乙醇研磨成勻漿狀，過(guò)濾，用95%乙醇定容至25mL。取2mL待測(cè)液于10mL離心管中，先加入2mL福林試劑，搖勻靜置3min后加入10%碳酸鈉2mL震蕩。避光處理1h后在765nm處比色測(cè)定[12]。試驗(yàn)重復(fù)3次。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定：稱(chēng)取10mg鄰苯二酚樣品溶解于100mL蒸餾水中，分別量取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL的鄰苯二酚溶液于10mL離心管中，再分別加入2mL福林酚試劑和2mL10%碳酸鈉溶液，最后加入2、1.9、1.8、1.7、1.6和1.5mL蒸餾水，黑暗靜置1h后在波長(zhǎng)765nm處測(cè)量吸光度值[12]。

1.3.5褐變指數(shù)的測(cè)定

褐變指數(shù)=∑(褐變級(jí)數(shù)×該病級(jí)株數(shù))/(總株數(shù)×4)×100%[13]

表1　褐變分級(jí)方法[13]

1.4數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)采用單因素隨機(jī)處理，設(shè)3個(gè)處理，每個(gè)處理重復(fù)3次。數(shù)據(jù)處理使用WordprocesssystemOffice軟件進(jìn)行平均值、誤差分析，各處理的平均值采用TheSASSystemforWindowsV8進(jìn)行多重比較檢驗(yàn)與顯著性分析，采用Excel整理多重比較檢驗(yàn)與顯著性分析的結(jié)果，并用Excel作圖。

2結(jié)果與分析

2.1亳菊試管微嫁接苗褐變動(dòng)態(tài)觀測(cè)

2.1.1亳菊試管微嫁接苗的不同發(fā)生部位褐變動(dòng)態(tài)觀測(cè)

亳菊微嫁接苗在組培的過(guò)程中發(fā)生的褐變位置不同，可分為3種情況。第一種為嫁接苗的接穗先發(fā)生褐變，外植體由上而下逐漸變?yōu)楹稚?。第二種為嫁接苗的接穗與砧木嫁接處先發(fā)生褐變，然后逐漸向嫁接苗的兩端蔓延。第三種為嫁接苗的砧木先發(fā)生褐變，然后由下而上褐變逐漸蔓延。分析原因，這可能是由于選取的外植體本身的生理狀態(tài)、取材時(shí)間不同以及外植體受到各種機(jī)械損傷(如流水沖洗、砧木和接穗的處理等)，使得嫁接苗褐變的位置不同。如圖1所示。

圖1　亳菊試管嫁接苗在不同部位發(fā)生褐變(嫁接于2015-09-25)Fig.1　Grafting of Chrysanthemum Plantlets from different parts of Chrysanthemum(grafted on 2015-09-25)　　注：A ：嫁接后4 d后接穗先發(fā)生褐變；B：嫁接后6 d后嫁接切口處先發(fā)生褐變；C：嫁接后6 d砧木先發(fā)生褐變。Note: A: grafting after 4 days after scion to browning; B: after grafting 6 days after grafting the incision to browning; C: after grafting 6 d rootstock first browning.

2.1.2亳菊試管微嫁接苗生長(zhǎng)發(fā)育動(dòng)態(tài)觀測(cè)

亳菊嫁接苗于2015年9月21日嫁接接種，組織培養(yǎng)9d后外植體表面較少部分變?yōu)樽睾稚慌囵B(yǎng)14d后外植體整體顏色變淡，呈棕褐色，培養(yǎng)基開(kāi)始變色；培養(yǎng)21d后，外植體開(kāi)始枯萎，培養(yǎng)基顏色加深，基部有黃色菌落。如圖2所示。

圖2　亳菊試管嫁接苗褐變情況(于2015-09-21嫁接)Fig.2　The browning situation of chrysanthemum tube grafted culture (in 2015-09-21 grafting)　　注：A為培養(yǎng)9 d后亳菊試管嫁接苗褐變情況，B為培養(yǎng)14 d后亳菊試管嫁接苗褐變情況，C為培養(yǎng)21 d后亳試管嫁接苗褐變情況Note: A.Browning of test tube grafted seedlings cultured in vitro after 9 days. B.Browning of test tube grafted seedlings cultured in vitro after 14 days. C.Browning of test tube grafted seedlings cultured in vitro after 21 days

2.2亳菊試管微嫁接苗褐變指數(shù)分析

在亳菊組培的過(guò)程中，外植體常常在接種后發(fā)生褐變，情況輕時(shí)僅會(huì)使培養(yǎng)基變?yōu)樽睾稚?，?yán)重時(shí)會(huì)阻礙植株的生長(zhǎng)、分化，甚至使植株死亡。在試驗(yàn)過(guò)程中，當(dāng)嫁接苗組培到第1d時(shí)，各個(gè)組培苗開(kāi)始出現(xiàn)不同程度的褐變情況，大部分嫁接苗褐變速度極快，平均6d左右達(dá)到4級(jí)褐變，外植體生長(zhǎng)受到阻礙，不分化，嫁接苗全部變?yōu)楹稚⑶宜劳?。極少數(shù)褐變級(jí)數(shù)為1級(jí)。由表2可見(jiàn)，在亳菊經(jīng)試管微嫁接后，通過(guò)30d左右的培養(yǎng)后，亳菊嫁接苗褐變情況嚴(yán)重，嫁接苗的正常生長(zhǎng)受到嚴(yán)重的阻礙，并且有些嫁接苗已經(jīng)死亡，極少數(shù)嫁接苗發(fā)生分化，4級(jí)褐變顯著高于0、1、2、3級(jí)(P<0.01)，褐變指數(shù)為0.95。

表2　亳菊試管微嫁接苗褐變情況

注：表中為平均值 ±標(biāo)準(zhǔn)誤差，同列不同大寫(xiě)字母表示差異顯著(α=0.01)，P<0.01

Note:Valuesrepresentthemeans±SE，Differentcapitallettersinsamecolumnmeansignificantdifference(α=0.01), P<0.01

2.3亳菊試管嫁接苗多酚氧化酶活性的變化

亳菊試管嫁接苗組培1d后外植體不同部位開(kāi)始出現(xiàn)褐變，并逐漸蔓延。從圖3可以看出，亳菊嫁接苗的褐變級(jí)數(shù)與多酚氧化酶(PPO)的活性呈正相關(guān)。形狀、大小基本一致的試管嫁接苗褐變級(jí)數(shù)分別為2、3、4時(shí)，亳菊嫁接苗的多酚氧化酶(PPO)活性差異顯著，顯著性P值為0.0005。當(dāng)褐變級(jí)數(shù)為4級(jí)時(shí)，褐變情況最為嚴(yán)重，亳菊嫁接苗的多酚氧化酶活性最高。

圖3　褐變級(jí)數(shù)不同的亳菊嫁接苗多酚氧化酶活性變化Fig.3　Browning different stages daisy grafted polyphenol oxidase activity changes

2.4不同測(cè)定方法對(duì)亳菊微嫁接苗總酚含量的影響

圖4為鄰二苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)處理數(shù)據(jù)，得到線性關(guān)系式：C鄰苯二酚=0.866 87+4.514 08A吸光值(R2=0.962 6)，回歸模型的P值為0.000 5，決定系數(shù)為0.96。結(jié)果表明回歸模型有較高的擬合精度，鄰苯二酚總酚含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖具有良好的線性相關(guān)。通過(guò)此公式與相關(guān)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)得出不同程度褐變的亳菊嫁接苗的總酚含量。

圖4　鄰苯二酚標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4　Catechol standard curve

圖5為沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)數(shù)據(jù)處理，得到線性關(guān)系式：C沒(méi)食子酸=0.014 17+8.809 78A吸光值(R2=0.962 6)，回歸模型的P值為小于0.000 1，決定系數(shù)為0.993 0。結(jié)果表明回歸模型有較高的擬合精度，沒(méi)食子酸總酚含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖具有良好的線性相關(guān)，通過(guò)此公式與相關(guān)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得出不同程度褐變的亳菊嫁接苗總酚含量。

圖5　沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(亳菊)Fig.5　Gallic acid standard curve (Daisy)

由圖6可以看出，亳菊組培苗褐變級(jí)數(shù)與總酚含量呈負(fù)相關(guān)。當(dāng)褐變級(jí)數(shù)低時(shí)，亳菊總酚含量較高，當(dāng)組培苗的褐變級(jí)數(shù)增大時(shí)，褐變?cè)郊訃?yán)重，總酚含量降低。經(jīng)檢驗(yàn)，總酚含量差異顯著，顯著性P值為0.000 3。用不同的方法測(cè)定亳菊組培苗的總酚含量時(shí)，測(cè)得的總酚含量都呈下降趨勢(shì)，但測(cè)出的結(jié)果略有差異。用沒(méi)食子酸測(cè)出的總酚含量總體偏高，并且下降趨勢(shì)快于以鄰苯二酚為標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得的總酚含量，當(dāng)組培苗的褐變級(jí)數(shù)逐漸增大時(shí)，兩種方法測(cè)得的總酚含量差值逐漸減小，但兩種方法測(cè)得的總酚含量都呈下降趨勢(shì)。

圖6　以不同標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得亳菊總酚含量比較圖Fig.6　In different standard curve measured chrysanthemum total phenol content comparison chart

3討論

試管微嫁接技術(shù)不僅可以消除植物本身所帶病毒，還可以?xún)?yōu)化品種性狀，是優(yōu)良品種快速繁殖的重要手段。目前為止，試管微嫁接技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于葡萄、龍眼、香梨等植物的快速繁殖，并積累了大量的參考依據(jù)。付宏岐等[14]為了解決轉(zhuǎn)基因紅花植物生根困難的問(wèn)題，通過(guò)不同莖尖微嫁接方式獲得成活嫁接苗，建立了紅花離體微試管嫁接的方法，為紅花生根提供了新的途徑以及為提高嫁接苗成活率奠定理論基礎(chǔ)。

在組培試驗(yàn)過(guò)程中，褐變問(wèn)題是普遍存在的，研究至今，眾多科學(xué)家對(duì)植物組織培養(yǎng)過(guò)程中外植體發(fā)生褐變的現(xiàn)象已有大量研究[15～17]?？偨Y(jié)原因主要有非酶促褐變與酶促褐變兩大主要因素，非酶促褐變是由外界條件引起的，酶促褐變是內(nèi)在因素引起的[17]。本試驗(yàn)中，酚類(lèi)物質(zhì)與多酚氧化酶在亳菊完整的植物體細(xì)胞中以穩(wěn)定狀態(tài)分隔存在，當(dāng)外植體在處理時(shí)組織的完整性受到破壞，打破酚類(lèi)化合物與多酚氧化酶的存放狀態(tài)，二者相遇后酚類(lèi)化合物在多酚氧化酶的催化下氧化形成醌類(lèi)物質(zhì)和水，進(jìn)一步導(dǎo)致其他酶系失活，造成組織代謝活動(dòng)紊亂，外植體生在代謝停滯，最后衰老死亡[13]。

大量的研究結(jié)果表明，褐變的發(fā)生與外植體的種類(lèi)、年齡、取材部位、取材時(shí)間、外植體大小以及受傷害程度密切相關(guān)，很多因素都會(huì)影響植物體內(nèi)的酚類(lèi)物質(zhì)的含量從而造成不同程度的褐變。這與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致，分析原因可能是由于亳菊中含有大量的黃酮、多酚、綠原酸等活性物質(zhì)，并且在溫暖多雨的秋季取材，材料本身較老，體內(nèi)酚類(lèi)含量高[3]。

本試驗(yàn)中不同褐變程度亳菊嫁接苗中總酚與多酚氧化酶活性的變化結(jié)果表明，在亳菊嫁接苗培養(yǎng)一定天數(shù)以后，測(cè)得外植體總酚含量與多酚氧化酶各不相同，亳菊嫁接苗褐變級(jí)數(shù)增大時(shí)，酚類(lèi)物質(zhì)在多酚氧化酶的作用下氧化為醌類(lèi)物質(zhì)形成聚合物，總酚含量逐漸降低，多酚氧化酶活性逐漸增強(qiáng)，褐變級(jí)數(shù)與總酚含量成負(fù)相關(guān)，與多酚氧化酶活性成正相關(guān)，多酚氧化酶活性越高，外植體褐變?cè)絿?yán)重。符真珠等提出，在離體培養(yǎng)后,隨著褐變加重，PPO的活性增強(qiáng)，而總酚的含量下降[18]。許傳俊等研究成果顯示褐變的產(chǎn)生可能不但因?yàn)榉拥难趸诤肿冞^(guò)程中酚類(lèi)化合物的增多為主要原因，有待進(jìn)一步研究[19]。

4結(jié)論

因褐變與外植體內(nèi)總酚含量關(guān)系密切，使用總酚含量較低的植物進(jìn)行微試管嫁接組培更加容易。亳菊微試管嫁接苗組培時(shí)出現(xiàn)不同程度褐變，由于褐變嚴(yán)重程度不同，嫁接苗的多酚氧化酶(PPO)活性與總酚含量相應(yīng)變化。隨著組培時(shí)間的延長(zhǎng),亳菊嫁接苗的褐變級(jí)數(shù)增大，多酚氧化酶(PPO)活性升高，總酚含量降低。

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(編輯：馬榮博)

Studyonphysiologicalmechanismofbrowningin vitrograftingofDendranthema morifolium (Ramat.)Tzvel‘Boju’cv.Nov.

JiWei1，WangRui1，DiJuan1，LiuRongchen1，LuoYaoxing1，RuHuiling2，YangZhongyi1*

(1． College of Horticulture, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, China； 2.Shanxi Academy of Agricultural Science Institute of fruit trees, Taigu 030800, China)

Abstract:[Objective]To reveal the mechanism of browning in the process of micro-graft in vitro in Dendranthema morifolium (Ramat.) Tzvel ‘Boju’cv.Nov. [Methods]The Dendranthema morifolium (Ramat.) Tzvel ‘Boju’cv.Nov. was used as explant, and the total phenolic content, polyphenol oxidase activity and browning index of in vitro browned grafts were detected by Folin Method and Polyphenol oxidase Method. [Results]The results showed that with the increasing of browning series, the browning situation was more serious. The browning ratio of series 4(89.7%) was significantly greater than other browning series. The greater the browning series was, the total phenolic content was decreasing, meanwhile the polyphenol oxidase activity in the in vitro grafts was increased. There was a linear negative correlation between the browning series and the explant total phenolic content, and there was a linear positive correlation between the browning series and the polyphenol oxidase activity. [Conclusion]This study providing the theory basis for increasing the efficiency of Dendranthema morifolium (Ramat.) Tzvel ‘Boju’cv.Nov. in vitro grafts.

Key words:Chrysanthemum; Micro-graft in vitro； Browning

收稿日期：2016-05-12 修回日期：2016-06-05

作者簡(jiǎn)介：紀(jì)薇(1983-)，女(漢)，陜西三原人，博士，副教授，研究方向：植物組織培養(yǎng)與生物技術(shù)育種 *通訊作者：楊忠義，副教授，博士，碩士生導(dǎo)師。Tel：13935406903；E-mail:yang_zhongyi092@163.com

基金項(xiàng)目：山西省科技基礎(chǔ)條件平臺(tái)建設(shè)項(xiàng)目(201509016)；國(guó)家自然科學(xué)基金(31401834)；山西農(nóng)業(yè)大學(xué)青年拔尖創(chuàng)新人才支持計(jì)劃(TYIT201401)

中圖分類(lèi)號(hào)：S682.31

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1671-8151(2016)07-0489-06