IFCC促甲狀腺激素國(guó)際溯源和檢測(cè)一致性系列研究(三)

于　翔，陳文霏，余小六，江　明，李　可，余枝廣

(廣東省深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司免疫試劑開發(fā)部　518057)

IFCC促甲狀腺激素國(guó)際溯源和檢測(cè)一致性系列研究(三)

于翔，陳文霏，余小六，江明，李可，余枝廣△

(廣東省深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司免疫試劑開發(fā)部518057)

目的采用邁瑞促甲狀腺激素(TSH)測(cè)定試劑盒，按照國(guó)際臨床化學(xué)和實(shí)驗(yàn)室醫(yī)學(xué)聯(lián)盟(IFCC)甲狀腺功能檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(C-STFT)提供的一致性研究方案，測(cè)試發(fā)放的第二期和第三期健康人體標(biāo)本和病理標(biāo)本，驗(yàn)證經(jīng)過第一期標(biāo)本重校準(zhǔn)后的邁瑞TSH檢測(cè)結(jié)果的一致性；同時(shí)嘗試將第三期標(biāo)本作為標(biāo)準(zhǔn)血清盤，建立校準(zhǔn)品的計(jì)量學(xué)溯源性。方法使用邁瑞標(biāo)準(zhǔn)試劑和工作校準(zhǔn)品搭配測(cè)試IFCC發(fā)放的人體病理標(biāo)本，與C-STFT提供的所有測(cè)量程序修剪均值(APTM)比對(duì)，評(píng)估一致性；使用第三期標(biāo)本為邁瑞工作校準(zhǔn)品賦值，評(píng)估重新賦值后的邁瑞TSH測(cè)試結(jié)果與APTM的一致性。結(jié)果使用Passing & Bablok回歸，邁瑞測(cè)試結(jié)果與APTM的斜率為1.0，相關(guān)系數(shù)(r)大于0.975；但如果采用IFCC第三期標(biāo)本作為溯源鏈的最高等級(jí)對(duì)工作校準(zhǔn)品重新賦值，再行計(jì)算標(biāo)本TSH濃度，則結(jié)果與APTM不具有理想的一致性。結(jié)論通過測(cè)試C-STFT統(tǒng)一發(fā)放的血清盤和提供的APTM值，實(shí)現(xiàn)了邁瑞與國(guó)際參與廠家TSH檢測(cè)結(jié)果的一致性；但是，使用標(biāo)準(zhǔn)血清盤建立校準(zhǔn)品計(jì)量學(xué)溯源性的方法還有待研究和商榷。

促甲狀腺激素；化學(xué)發(fā)光免疫分析法；國(guó)際臨床化學(xué)甲狀腺功能檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)；測(cè)量程序修剪均值

自2010年開始，國(guó)際臨床化學(xué)和實(shí)驗(yàn)室醫(yī)學(xué)聯(lián)盟(IFCC)甲狀腺功能檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(C-STFT)嘗試推出特定的血清盤及所有測(cè)量程序修剪均值(APTM)的概念，在全球范圍征集了具有代表性的10個(gè)廠家的檢測(cè)系統(tǒng)，包括羅氏、雅培、貝克曼、西門子、邁瑞等，分階段進(jìn)行促甲狀腺激素(TSH)檢測(cè)結(jié)果一致性的可行性研究[1-2]。邁瑞于2014年加入TSH一致性可行性研究，免疫檢測(cè)系統(tǒng)CL-2000i和配套TSH試劑盒對(duì)首期20例健康人標(biāo)本的測(cè)試結(jié)果，滿足C-STFT設(shè)定的精密度、批間差異控制和方法學(xué)比對(duì)等性能要求[3-4]；從而依次進(jìn)入了第二期和第三期，除正常標(biāo)本外，還包括甲狀腺功能減退和甲狀腺功能亢進(jìn)癥等病理標(biāo)本的研究工作。C-STFT結(jié)合所有參與廠家系統(tǒng)的測(cè)試結(jié)果，對(duì)邁瑞CL-2000i系統(tǒng)TSH測(cè)試結(jié)果的可靠性和一致性進(jìn)行了客觀地評(píng)價(jià)；同時(shí)，邁瑞根據(jù)C-STFT的研究目的，嘗試將C-STFT發(fā)放的第三期標(biāo)本作為校準(zhǔn)品溯源鏈中的一個(gè)等級(jí)，研究C-STFT標(biāo)準(zhǔn)血清盤代替世界衛(wèi)生組織(WHO)標(biāo)準(zhǔn)品(NIBSC 81/565)直接給校準(zhǔn)品賦值的可行性。

1資料與方法

1.1一般資料第二期標(biāo)本共89份，第三期標(biāo)本共101份，包含甲狀腺功能減退、正常和甲狀腺功能亢進(jìn)癥標(biāo)本，均由Invent和Solomon Park Research Laboratories (www.solomonpark.com)兩個(gè)商務(wù)機(jī)構(gòu)收集[5]。第三期高值標(biāo)本部分來源于服用高劑量表達(dá)TSH藥物(Thyrogen)的患者，標(biāo)本一式兩份，每份0.5 mL。標(biāo)本長(zhǎng)期凍存，運(yùn)送過程溫度控制在-20 ℃以下。這些血清標(biāo)本TSH的濃度，來自已經(jīng)完成一致性研究的數(shù)個(gè)國(guó)際生產(chǎn)廠家檢測(cè)系統(tǒng)的具有代表性的測(cè)試結(jié)果[6]；C-STFT通過因子分析(FA)模型對(duì)廠家測(cè)試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，一些明顯離群值被剔除，取而代之以模擬的數(shù)值，最終獲得各標(biāo)本的APTM[7-8]。

1.2方法采用經(jīng)第一期標(biāo)本測(cè)試結(jié)果重校準(zhǔn)后的邁瑞CL-2000i全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)系統(tǒng)，包括CL-2000i發(fā)光儀，及配套的TSH試劑盒、邁瑞工作校準(zhǔn)品和甲狀腺功能復(fù)合質(zhì)控品。測(cè)試前須完成儀器維護(hù)并通過基礎(chǔ)性能驗(yàn)證。標(biāo)本測(cè)試前后，甲狀腺功能復(fù)合定值質(zhì)控品的測(cè)試結(jié)果均應(yīng)在靶值±2s范圍內(nèi)。

1.3C-STFT標(biāo)本測(cè)試第二期標(biāo)本共89份(其中6份因部分國(guó)際廠家TSH試劑盒檢測(cè)靈敏度過低，無法獲取濃度值，從而APTM值無法計(jì)算)；標(biāo)本按隨機(jī)順序正序測(cè)試一次，再逆序測(cè)試一次，用以評(píng)估檢測(cè)系統(tǒng)隨時(shí)間的漂移，及監(jiān)測(cè)可能發(fā)生的跳變。第二期標(biāo)本測(cè)試結(jié)果通過C-STFT審核后，進(jìn)入第三期標(biāo)本的測(cè)試；第三期標(biāo)本共101份，同一標(biāo)本一式兩份，在不同的日期復(fù)融和開瓶，混勻后各測(cè)試一次，每個(gè)標(biāo)本共得到兩批測(cè)試結(jié)果。

1.4C-STFT血清盤作為溯源標(biāo)準(zhǔn)的嘗試使用C-STFT第三期標(biāo)本作為標(biāo)準(zhǔn)血清盤，以標(biāo)本APTM為標(biāo)定值，以邁瑞CL-2000i系統(tǒng)測(cè)試所得標(biāo)本的相對(duì)發(fā)光值擬合4參數(shù)對(duì)數(shù)校準(zhǔn)曲線，根據(jù)工作校準(zhǔn)品的相對(duì)發(fā)光值測(cè)試結(jié)果，計(jì)算出邁瑞工作校準(zhǔn)品的標(biāo)定濃度；以邁瑞工作校準(zhǔn)品新的標(biāo)定濃度重新計(jì)算第一期和第二期的標(biāo)本測(cè)試結(jié)果，并評(píng)估與APTM的一致性。

2結(jié)果

儀器基礎(chǔ)性能測(cè)試結(jié)果滿足要求。在C-STFT標(biāo)本測(cè)試前、后，用邁瑞TSH試劑盒檢測(cè)內(nèi)部質(zhì)控結(jié)果均在靶值±2s內(nèi)，系統(tǒng)均在控。第二期標(biāo)本正序(Run 1)和逆序(Run 2)測(cè)試所得兩批測(cè)試結(jié)果的漂移和跳變分析見圖1，結(jié)果表明兩批測(cè)試結(jié)果之間無漂移和跳變。邁瑞測(cè)試結(jié)果均值相與APTM的相關(guān)系數(shù)(r)大于0.975；Passing & Bablok回歸線斜率約為1.0，見圖2；同時(shí)說明經(jīng)過第一期標(biāo)本測(cè)試結(jié)果重校準(zhǔn)后，邁瑞測(cè)試結(jié)果與APTM已實(shí)現(xiàn)一致性，不需要再進(jìn)行重校準(zhǔn)。

圖1　第二期標(biāo)本測(cè)試結(jié)果漂移與跳變

第三期標(biāo)本兩批測(cè)試結(jié)果(Run 1和Run 2)無漂移和跳變，見圖3；邁瑞測(cè)試結(jié)果均值與APTM的r大于0.975，Passing & Bablok回歸線斜率在0.9～1.1，見圖4；以上分析均不包括系統(tǒng)檢測(cè)范圍以外的點(diǎn)；測(cè)試結(jié)果符合C-STFT的要求，已獲準(zhǔn)參與第四期參考范圍的研究工作。

圖2　第二期標(biāo)本Passing & Bablok回歸

圖3　第三期標(biāo)本測(cè)試結(jié)果漂移與跳變

圖4　第三期標(biāo)本Passing & Bablok回歸

注：WHO為世界衛(wèi)生組織，IFCC為國(guó)際臨床化學(xué)與實(shí)驗(yàn)室醫(yī)學(xué)聯(lián)盟；APTM為所有測(cè)量程序修剪均值。

圖5校準(zhǔn)品溯源鏈

筆者嘗試根據(jù)C-STFT的意圖，將標(biāo)準(zhǔn)血清盤作為校準(zhǔn)品溯源鏈的一個(gè)等級(jí)，見圖5，建立邁瑞TSH校準(zhǔn)品計(jì)量學(xué)溯源性；使用第三期標(biāo)本校準(zhǔn)邁瑞CL-2000i系統(tǒng)為邁瑞工作校準(zhǔn)品賦值，獲得系統(tǒng)主校準(zhǔn)曲線，見圖6；使用該校準(zhǔn)曲線重新校準(zhǔn)計(jì)算C-STFT第一期和第二期標(biāo)本的濃度值，并評(píng)估與APTM的一致性。結(jié)果表明如果邁瑞校準(zhǔn)品溯源至C-STFT第三期病理血清盤，則難以實(shí)現(xiàn)C-STFT第一期和第二期標(biāo)本測(cè)試結(jié)果與APTM的一致性，見圖7～8。

圖6　新建主校準(zhǔn)曲線

圖7　第一期標(biāo)本測(cè)試結(jié)果重新計(jì)算

圖8　第二期標(biāo)本測(cè)試結(jié)果重新計(jì)算

3討論

對(duì)于第二期和第三期標(biāo)本，C-STFT匯總各個(gè)參與廠家的測(cè)試數(shù)據(jù)，結(jié)果顯示病理標(biāo)本比第一期的正常標(biāo)本趨于復(fù)雜，數(shù)據(jù)質(zhì)量有所下降；在低值區(qū)域，有3～6個(gè)國(guó)際廠家檢測(cè)系統(tǒng)靈敏度過低，對(duì)小于0.04 mIU/L的標(biāo)本測(cè)量誤差過大，不能給出可靠的濃度值，無法納入APTM的統(tǒng)計(jì)計(jì)算；大約有2%左右的標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果在某些系統(tǒng)呈現(xiàn)為離群值，需要模擬出替代值用于APTM的計(jì)算。

對(duì)于第一期健康人體標(biāo)本的測(cè)試，邁瑞根據(jù)測(cè)試結(jié)果對(duì)校準(zhǔn)曲線進(jìn)行了修正，實(shí)現(xiàn)了與APTM的一致性；但是這個(gè)過程并沒有建立計(jì)量學(xué)溯源性，因?yàn)樾?zhǔn)品濃度值與C-STFT標(biāo)本之間并無校準(zhǔn)溯源鏈聯(lián)系。目前廠家廣泛使用WHO的TSH標(biāo)準(zhǔn)品可能存在基質(zhì)效應(yīng)和互換性問題。因此，筆者嘗試借助濃度覆蓋整個(gè)檢測(cè)范圍的第三期標(biāo)本，對(duì)邁瑞校準(zhǔn)品進(jìn)行賦值實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證具有APTM標(biāo)定值的C-STFT血清盤用以替代WHO標(biāo)準(zhǔn)品是否可行。結(jié)果表明，直接由血清盤為校準(zhǔn)品賦值，很難實(shí)現(xiàn)真實(shí)標(biāo)本在不同檢測(cè)系統(tǒng)上最終測(cè)試結(jié)果的一致性。其主要原因是血清盤標(biāo)本濃度的分布不均和高濃度標(biāo)本測(cè)試質(zhì)量的影響：大多數(shù)標(biāo)本的濃度主要集中在參考范圍附近，但較少數(shù)的高值標(biāo)本由于濃度值遠(yuǎn)大于參考范圍濃度，在擬合校準(zhǔn)曲線時(shí)所占權(quán)重較大；因此高值測(cè)試結(jié)果的少許偏離，都會(huì)直接影響主校準(zhǔn)曲線的形狀，并最終導(dǎo)致了標(biāo)本測(cè)試結(jié)果失去了一致性；這將是所有廠家在嘗試使用C-STFT血清盤為校準(zhǔn)品賦值時(shí)所面臨的一個(gè)共同的問題。

綜上所述，使用C-STFT未來推出的標(biāo)準(zhǔn)血清盤作為TSH校準(zhǔn)品溯源鏈的一個(gè)等級(jí)，對(duì)于實(shí)現(xiàn)不同檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果的一致性可能存在風(fēng)險(xiǎn)；需要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)血清盤的制備方法和使用方法，與IFCC及其他國(guó)際代表性廠家進(jìn)一步研究和探討。

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2016-01-28修回日期：2016-03-18)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.054

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1673-4130(2016)12-1719-03

·臨床研究·