不同品牌自身免疫性糖尿病抗體檢測試劑盒結(jié)果分析

陳佩宏

(上海市第七人民醫(yī)院　200129)

·臨床研究·

不同品牌自身免疫性糖尿病抗體檢測試劑盒結(jié)果分析

陳佩宏

(上海市第七人民醫(yī)院200129)

目的比較分析3種自身免疫性糖尿病抗體檢測試劑盒在1型糖尿病(T1DM)檢測中的性能。方法選取該院2013年12月至2014年8月就診的糖尿病患者240例為研究對象，其中125例1型糖尿病(T1DM)初診病例，115例2型糖尿病(T2DM)患者，同期100例健康體檢者納入對照組。同時用放射免疫法(RIA)、YHLO線性免疫分析法(LIA)、伯勞特的LIA試劑盒檢測。分別計算各個抗體的陽性檢出率，試劑盒的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值及兩種試劑盒間的符合率。結(jié)果亞輝龍LIA、伯勞特LIA、RIA糖尿病自身抗體試劑盒檢測靈敏度依次為75.2%、65.6%、76.8%；特異度分別為88.8%、87.1%、100.0%，陽性預(yù)測值分別為 79.7%、74.5%、100.0%；陰性預(yù)測值分別為85.2%、81.3%、88.1%；且3種試劑盒每兩者間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論3種試劑盒對糖尿病自身抗體檢測都有一定的檢出率，可用于T1DM檢測，糖尿病自身抗體檢測對于糖尿病分型具有重要作用，特別是對于成人隱匿性自身免疫性糖尿病的明確診斷，且多種抗體聯(lián)合檢測具有最佳的靈敏度和特異度。

1型糖尿?。怀扇穗[匿性自身免疫性糖尿??；胰島β細(xì)胞抗體；

1型糖尿病(T1DM)特指因胰島細(xì)胞破壞而導(dǎo)致胰島素絕對缺乏，具有酮癥傾向的糖尿病，可發(fā)生于任何年齡，但多見于青少年，多數(shù)起病急，伴代謝紊亂，患者可注射胰島素維持生命。包括免疫介導(dǎo)和特發(fā)性兩種亞型[1]。T1DM約占糖尿病患者的5%，在兒童及青少年患者中，T1DM所占比例為80%～90%。T1DM的發(fā)病率在全球也呈明顯上升趨勢，根據(jù)2011年國際糖尿病聯(lián)盟(IDF)統(tǒng)計，在全球1.9億0～15歲兒童中，T1DM患者約有490 100例，每年新增約77 800例，年增加率約為3.0%[2-3]。自身免疫性糖尿病(免疫介導(dǎo)型)常有一種或多種自身抗體存在，如胰島細(xì)胞抗體(ICA)、胰島素自身抗體(IAA)、和谷氨酸脫羧酶抗體(GAD65)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗體(IA-2A)、鋅轉(zhuǎn)運蛋白抗體(ZnT-8A)，其中ZnT-8A自身抗體是2007年新發(fā)現(xiàn)的一種T1DM相關(guān)的非常重要的自身抗體[4-7]。本文用不同品牌的自身免疫性糖尿病抗體檢測試劑盒對T1DM診斷的靈敏度及特異度進(jìn)行了綜合分析，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2013年12月至2014年8月來本院內(nèi)分泌科住院診治的首次診斷T1DM病例共125例納入T1DM組，其中男68例，女57例，年齡5～25歲，平均(14±3.2)歲；同期收治的2型糖尿病(T2DM)患者共115例，其中男63例，女52例，年齡27～66歲，平均(45.1±7.6)歲；診斷根據(jù)1999年WHO糖尿病標(biāo)準(zhǔn)。同期本院健康體檢者100例納入對照組，無糖尿病家族史和自身免疫性疾病史，年齡3～25歲，平均(13.0±4.5)歲，其中男58例，女42例。

1.2儀器與試劑放射免疫法(RIA)(IAA、GADA和IA-2A)3種檢測試劑盒來自于北京北方生物技術(shù)研究所，儀器為安徽中科中佳GC-1200γ計數(shù)儀。實驗步驟嚴(yán)格按照操作說明書。YHLO線性免疫分析法(LIA)檢測一種采用購自深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司的自身免疫性糖尿病抗體譜檢測試劑盒(以下簡稱亞輝龍LIA)，包被抗原為GAD、ICA、IA-2、IAA、ZnT-8A，配套儀器為該公司Tenfly Auto全自動免疫印跡分析儀。LIA檢測另一種為深圳市伯勞特生物制品有限公司的糖尿病自身抗體免疫印跡試劑盒(以下簡稱伯勞特LIA)，包被抗原為(GAD、IAA、IA-2、ICA)。

1.3檢測方法同時采用RIA、亞輝龍LIA、伯勞特LIA糖尿病自身抗體檢測試劑盒對340份標(biāo)本進(jìn)行平行比對試驗，嚴(yán)格按照各自的產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析。3種試劑盒的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值，兩個試劑盒間的符合性均采用χ2檢驗進(jìn)行比較；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.13種試劑盒檢測糖尿病自身抗體水平比較亞輝龍LIA、伯勞特LIA、RIA對T1DM及T2DM患者糖尿病自身抗體檢出率比較，單獨抗體檢出率均低于抗體聯(lián)合檢測，見表1～3。

表1　亞輝龍LIA試劑盒檢測糖尿病自身抗體陽性結(jié)果[n(%)]

表2　伯勞特LIA試劑盒檢測糖尿病自身抗體陽性結(jié)果[n(%)]

注：-表示無數(shù)據(jù)。

2.23種試劑盒檢測糖尿病自身抗體陽性率比較3種試劑盒在T1DM中的陽性檢出率分別為75.2%、65.6%、76.8%。在T2DM中的陽性檢出率分別為25.2%、22.6%、26.1%。在對照組的陽性檢出率分別為2%、3%、0%。

2.33種試劑盒檢測效能比較亞輝龍LIA、伯勞特LIA、RIA糖尿病自身抗體檢測的靈敏度依次為75.2%、65.6%、76.8%；特異度分別為88.8%、87.1%、100.0%；陽性預(yù)測值分別為 79.7%、74.5%、100.0%；陰性預(yù)測值分別為85.2%、81.3%、88.1%。見表5。

2.43種試劑盒每兩者間的檢測符合率及相關(guān)性比較亞輝龍LIA與RIA的總符合率為70.9%，經(jīng)χ2檢驗，兩種方法差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；伯勞特LIA與RIA的總符合率為67.3%，經(jīng)χ2檢驗，兩種方法差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；亞輝龍LIA與伯勞特LIA的總符合率為83.0%，兩種方法差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表6～8。

表3　RIA試劑盒檢測糖尿病自身抗體陽性結(jié)果[n(%)]

注：-表示無數(shù)據(jù)。

表43種試劑盒檢測糖尿病自身抗體陽性率比較[n(%)]

組別n亞輝龍LIA陽性陰性伯勞特LIA陽性陰性RIA陽性陰性T1DM組12594(75.2)31(24.9)82(65.6)43(34.4)96(76.8)19(23.2)T2DM組11529(25.2)76(74.8)26(22.6)89(77.4)30(26.1)85(73.9)對照組1002(2.0)98(98.0)3(3.0)97(97.0)0(0.0)100(100.0)

表5　3種試劑盒檢測T1DM效能的比較(%)

表6　亞輝龍LIA與RIA對T1DM檢測結(jié)果比較(n)

表7　伯勞特LIA與RIA對T1DM檢測結(jié)果比較(n)

表8　亞輝龍LIA與伯勞特LIA對T1DM檢測結(jié)果

3討論

目前，臨床上將糖尿病分為4種類型：T1DM、T2DM、妊娠糖尿病和特殊類型糖尿病。對糖尿病進(jìn)行分型在糖尿病的診治過程中十分重要，其中T1DM與T2DM間的分型尤為重要。T1DM的典型癥狀為“三多一少”即多飲、多尿、多食及消瘦”，發(fā)病開始即有自發(fā)酮癥傾向、血糖波動較為明顯，不易控制等[8-10]。T2DM的發(fā)病機制主要為胰島素抵抗，使用口服降糖藥或通過患者的飲食調(diào)節(jié)來進(jìn)行干預(yù)治療[11-12]。但現(xiàn)在越來越多的T1DM患者在患病初期并不具備典型特征，常被誤診為T2DM而延誤了治療。近年來越來越多的報道顯示，有部分初診考慮為T2DM的患者迅速出現(xiàn)胰島功能衰竭，并最終診斷為T1DM的一個亞型——成人隱匿性自身免疫性糖尿病(LADA)，一項多中心調(diào)查結(jié)果顯示：中國成人初診T2DM患者中18歲以上LADA患病率為6.1%，30歲以上為5.9%，北方地區(qū)高于南方，我國LADA患病率在全球處于較高水平。糖尿病類別不同，所需的治療措施也不相同，分型的不準(zhǔn)確將直接影響患者的診治及預(yù)后[13-14]。

糖尿病自身抗體檢測在T1DM的診治過程中起到了十分重要的作用，目前關(guān)于其檢測方法主要有：RIA、免疫吸附法、放射配體法及免疫印跡法。目前臨床上將RIA視為金標(biāo)準(zhǔn)，但因其操作復(fù)雜，對實驗設(shè)備及人員要求較高，而漸漸被其他方法所替代。免疫印跡法的應(yīng)用使糖尿病5種自身抗體可同時聯(lián)合檢測，極大地為檢驗工作提供了便利，為臨床提供更可靠的依據(jù)[15-16]。

本文通過3種試劑盒檢測T1DM抗體的結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)3種品牌試劑盒對糖尿病抗體檢測都有一定的檢出率，可用于自身免疫性糖尿病的檢測。且抗體聯(lián)合檢測的檢出率明顯高于單個抗體檢測；3種糖尿病自身抗體試劑盒在T2DM中有一定的檢出率，亞輝龍LIA、伯勞特LIA、RIA在T2DM中的陽性檢出率為25.2%、22.6%、26.1%。該類患者可能為LADA，實際上為T1DM的亞型，其發(fā)病機制與典型T1DM相似，以胰島β細(xì)胞遭受自身免疫性損傷為特征，但其早期臨床表現(xiàn)與T2DM難以區(qū)分。故在早期初診時被誤認(rèn)為T2DM；亞輝龍LIA與RIA的總符合率為70.9%，伯勞特LIA與RIA的總符合率為67.3%，亞輝龍LIA與伯勞特LIA的總符合率為83.0%，經(jīng)χ2檢驗，每兩種方法差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表6～8；YHLO糖尿病抗體譜的靈敏度和特異度均較好，分析原因為新加入的特異性ZnT-8A的存在。且在另外兩種試劑盒檢測陰性的情況下，還有一定的陽性檢出率，有11例放射免疫檢測均陰性T1DM患者，呈現(xiàn)ZnT-8A陽性，有25例伯勞特免疫印跡法4種抗體均陰性的T1DM患者，呈現(xiàn)ZnT-8A抗體陽性，表明ZnT-8A可獨立存在，聯(lián)合檢測可提高T1DM的檢出率。

綜上所述，兩種糖尿病抗體譜試劑盒具有操作方便、結(jié)果重復(fù)性好，可配套自動化的儀器Tenfly Auto進(jìn)行自動化操作，滿足實驗室質(zhì)量控制的要求。LIA測定糖尿病自身抗體與傳統(tǒng)的RIA法相比，差異明顯。YHLO糖尿病抗體譜與RIA法的一致性較伯勞特好，靈敏度、特異度也具有一定優(yōu)勢。ZnT-8A抗體作為T1DM新的診斷特異性抗體，聯(lián)合同ICA、IAA、IA-2、GAD檢測可提高T1DM的陽性率，有助于臨床作出準(zhǔn)確診治。

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2016-01-28修回日期：2016-03-18)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.038

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1673-4130(2016)12-1689-03