膠體金法檢測(cè)全血鐵蛋白的性能評(píng)價(jià)及其在兒童缺鐵性貧血中的臨床應(yīng)用

宋　濤,譚　詩(shī),李秋紅,趙　妍,李小強(qiáng),李春莉△

(1.重慶市婦幼保健院檢驗(yàn)科　400013；2.重慶市婦幼保健院兒童保健科　400013；3.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院臨床檢驗(yàn)科　400013)

膠體金法檢測(cè)全血鐵蛋白的性能評(píng)價(jià)及其在兒童缺鐵性貧血中的臨床應(yīng)用

宋濤1,譚詩(shī)1,李秋紅1,趙妍2,李小強(qiáng)3,李春莉1△

(1.重慶市婦幼保健院檢驗(yàn)科400013；2.重慶市婦幼保健院兒童保健科400013；3.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院臨床檢驗(yàn)科400013)

目的評(píng)價(jià)國(guó)產(chǎn)膠體金法檢測(cè)全血鐵蛋白的分析性能，探討其在兒童缺鐵性貧血中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法通過(guò)與免疫化學(xué)發(fā)光方法比較，根據(jù)EP文件從精密度、線性范圍及抗干擾能力、可比性等方面評(píng)價(jià)膠體金法測(cè)定全血鐵蛋白的分析性能；隨機(jī)抽取重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院50例缺鐵性貧血患兒及重慶市婦幼保健院健康體檢兒童50例，分別測(cè)定兩組全血鐵蛋白，分析其診斷效率。結(jié)果膠體金法測(cè)定全血鐵蛋白批間精密度分別為7.2%和9.6%，線性為0～100 ng/mL，溶血、黃疸、脂血無(wú)干擾，與雅培i2000SR血清鐵蛋白檢測(cè)結(jié)果比對(duì)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與對(duì)照組相比，缺鐵性貧血組全血鐵蛋白明顯降低。以20 ng/mL作為診斷臨界點(diǎn)，其靈敏度為94%，特異度為100%，診斷效率為97%。結(jié)論膠體金法分析性能良好，作為即時(shí)檢測(cè)項(xiàng)目能滿足臨床，具有較高診斷效率，對(duì)兒童是否缺鐵可作提示性診斷。

膠體金；全血；鐵蛋白；性能評(píng)價(jià)

缺鐵性貧血(IDA)是臨床常見疾病之一，也是貧血中最常見的類型，以嬰幼兒和育齡期女性發(fā)病率較高。如果兒童IDA長(zhǎng)期得不到改善，會(huì)造成發(fā)育遲緩、免疫力下降，甚至引發(fā)其他并發(fā)癥[1]。目前常用于診斷IDA的外周血血常規(guī)參數(shù)不利于早期診斷，且靈敏度不高，不能準(zhǔn)確及時(shí)地反映體內(nèi)鐵代謝狀況。鐵蛋白作為機(jī)體內(nèi)一種儲(chǔ)存鐵的可溶性組織蛋白，其濃度變化可作為判斷是否存在缺鐵或鐵負(fù)荷過(guò)量的指標(biāo)，血清鐵蛋白是檢測(cè)體內(nèi)鐵缺乏的最靈敏指標(biāo)[2]。目前檢測(cè)鐵蛋白的方法主要是化學(xué)發(fā)光法，該法只能檢測(cè)血清標(biāo)本，然而對(duì)于發(fā)病率較高的嬰幼兒進(jìn)行靜脈血抽取較困難，近年來(lái)，市場(chǎng)上出現(xiàn)通過(guò)膠體金法檢測(cè)全血鐵蛋白的試劑盒，方便、快速，僅需20 min，尤其適用于嬰幼兒。本研究對(duì)該方法的精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍及抗干擾能力(黃疸、脂血、溶血等)等性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，并與化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)臨床患者的血清鐵蛋白結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，了解該方法是否能滿足臨床檢測(cè)需求，特別是針對(duì)嬰幼兒鐵蛋白篩查，探索其在本地區(qū)兒童IDA篩查中的應(yīng)用價(jià)值。

1資料與方法

1.1一般資料2015年重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院就診的IDA患兒50例納入IDA組，年齡2～5歲，平均年齡(3.2±0.7)歲。2015年1～8月重慶市婦幼保健院進(jìn)行常規(guī)體檢兒童50例納入健康對(duì)照組，年齡2～4歲，平均年齡(2.8±0.5)歲，排除早產(chǎn)、多胎、難產(chǎn)、妊娠合并癥，排除先天性疾病和遺傳性疾病。

1.2儀器與試劑免疫層析結(jié)果判讀記錄儀，鐵蛋白試劑卡由天津中新科炬生物制藥有限公司提供，雅培i2000SR化學(xué)發(fā)光分析儀、鐵蛋白試劑盒購(gòu)自美國(guó)雅培公司。

1.3標(biāo)本采集采集末梢血和靜脈全血，乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝及促凝待用。

1.4方法

1.4.1批內(nèi)精密度選取高濃度(90 ng/mL)和低濃度(20 ng/mL)的鐵蛋白全血標(biāo)本各1份，參照EP文件[3]，每份標(biāo)本連續(xù)檢測(cè)20次，分別計(jì)算變異系數(shù)(CV)，得到不同濃度下的批內(nèi)精密度。

1.4.2批間精密度取濃度分別為85、15 ng/mL的質(zhì)控品各1份，均分裝5支置-20 ℃保存，每天各取出1支進(jìn)行檢測(cè)，每天檢測(cè)4次，每次測(cè)定的時(shí)間相隔小于2 h，連續(xù)5 d，共獲得兩組、40個(gè)數(shù)據(jù)，進(jìn)行離群值檢驗(yàn)。分別對(duì)檢測(cè)高值所得的20個(gè)數(shù)據(jù)及檢測(cè)低值所得的20個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)行CV的計(jì)算，得到高值和低值的批間精密度。

1.4.3線性范圍取l份EDTA-K2抗凝全血高值標(biāo)本參照EP文件[4]，按10∶0、8∶2、6∶4、4∶6、2∶8、0∶10的比例，配制成稀釋度為100%、80%、60%、40%、20%、0%的系列濃度，使其最終濃度從低到高共6個(gè)濃度，分別用膠體金法重復(fù)2次檢測(cè)鐵蛋白水平，取平均值作為測(cè)定值，將測(cè)定值與理論值做直線回歸。

1.4.4參考范圍根據(jù)WS/T 402-2012[5]，篩選出20個(gè)參考個(gè)體，采集末梢血標(biāo)本，EDTA-K2抗凝并檢測(cè)，測(cè)定值剔除離群值后若不滿20需補(bǔ)足，將這20個(gè)測(cè)定值與需驗(yàn)證的參考區(qū)間比較。

1.4.5可比性試驗(yàn)每天取5份血清樣品，進(jìn)行1～5號(hào)編號(hào)。先在雅培i2000化學(xué)發(fā)光分析儀上進(jìn)行檢測(cè)，再使用膠體金法檢測(cè)同一患者全血鐵蛋白濃度，各檢測(cè)2次。第1次按1～5號(hào)的順序，第2次按5～1號(hào)的順序檢測(cè)，連續(xù)測(cè)定5 d。將對(duì)照系統(tǒng)和試驗(yàn)系統(tǒng)針對(duì)臨床標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)系數(shù)計(jì)算，驗(yàn)證兩個(gè)系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果是否呈正相關(guān)關(guān)系。

1.4.6干擾試驗(yàn)(1)溶血干擾：取臨床標(biāo)本EDTA-K2抗凝全血1份，參照EP文件[6]，先用膠體金法測(cè)定2次全血鐵蛋白，然后將此標(biāo)本分為3份，用擠壓法制造輕、中、重度溶血，離心后測(cè)定血漿血紅蛋白(Hb)，再用兩種方法分別重復(fù)2次測(cè)定輕、中、重度溶血狀態(tài)下的鐵蛋白。(2)乳糜干擾：取高值全血鐵蛋白(98 ng/mL)標(biāo)本1份，低值全血鐵蛋白乳糜標(biāo)本l份，按比例1∶1、1∶2、1∶3、1∶4和1∶5稀釋，分別重復(fù)測(cè)定三酰甘油及全血鐵蛋白。(3)黃疸干擾：取高值全血鐵蛋白(98 ng/mL)標(biāo)本l份，分別用生理鹽水和高膽紅素低鐵蛋白全血標(biāo)本1份，按比例1∶1、1∶2、1∶3、1∶4和1∶5稀釋后測(cè)定膽紅素和鐵蛋白。

1.4.7儲(chǔ)存溫度和時(shí)間的影響取當(dāng)日全血標(biāo)本，3份標(biāo)本混合，測(cè)定新鮮混合全血的鐵蛋白濃度為48 ng/mL，放置4 ℃儲(chǔ)藏3～4 d，兩種方法的結(jié)果與新鮮混合全血進(jìn)行比對(duì)，重復(fù)測(cè)定2次。

1.5臨床應(yīng)用價(jià)值取重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院50例已確診為IDA患兒的全血標(biāo)本，50例已排除IDA兒童全血標(biāo)本，分別測(cè)定全血鐵蛋白，分析其在兒童IDA中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1性能評(píng)價(jià)

2.1.1批內(nèi)精密度高值和低值標(biāo)本連續(xù)20次測(cè)定結(jié)果計(jì)算CV分別為3.5%和5.9%。

2.1.2批間精密度高值和低值質(zhì)控品計(jì)算CV分別為7.2%和9.6%。

2.1.3線性范圍膠體金法測(cè)定全血鐵蛋白在濃度大于100 ng/mL時(shí)不呈線性關(guān)系，選擇全血鐵蛋白濃度稀釋在0～100 ng/mL的5個(gè)濃度范圍測(cè)定線性良好，直線回歸方程：Y=0.975X+0.103，r2=0.997，見圖1，測(cè)定值與理論值偏差小于10%。

圖1　膠體金法測(cè)定鐵蛋白線性范圍

2.1.4參考范圍驗(yàn)證按照WS/T 402-2012國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定20例表觀健康的嬰幼兒末梢全血標(biāo)本的鐵蛋白水平，其測(cè)定值均大于20 ng/mL，表明可采納試劑盒說(shuō)明書提供的參考范圍。

2.1.5可比性試驗(yàn)按照每天檢測(cè)的順序，連續(xù)5 d共檢測(cè)40份血清樣品和全血樣品，每份血清樣品使用化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)2次，全血樣品使用天津中新科炬鐵蛋白檢測(cè)試劑盒檢測(cè)2次，各取其平均值，經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，兩種儀器檢測(cè)結(jié)果的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.692，P>0.05)。經(jīng)回歸分析，回歸方程為Y=1.107X-9.749，r2=0.934,顯示兩種方法測(cè)定結(jié)果具有較高的可比性，見圖2。

圖2　膠體金法與化學(xué)發(fā)光法鐵蛋白測(cè)定結(jié)果比對(duì)

2.1.6干擾試驗(yàn)(1)溶血干擾：溶血有使全血鐵蛋白測(cè)定結(jié)果偏高的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖3A。(2)乳糜干擾，加入三酰甘油4種濃度時(shí)膠體金滲濾法鐵蛋白測(cè)定值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖3B。(3)黃疸干擾，當(dāng)標(biāo)本中膽紅素濃度為10.2～324.6 μmol/L時(shí)，鐵蛋白值在86～94范圍內(nèi)波動(dòng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖3C。

2.1.7穩(wěn)定性4 ℃條件下放置3 d測(cè)定結(jié)果與新鮮全血的鐵蛋白誤差小于5%。

2.2臨床應(yīng)用

注：A、B、C分別為溶血、乳糜、膽紅素對(duì)膠體金法測(cè)定全血鐵蛋白的影響。

圖3溶血、乳糜、膽紅素對(duì)膠體金法測(cè)定全血鐵蛋白的影響

2.2.12組兒童體內(nèi)全血鐵蛋白水平變化IDA組全血鐵蛋白、血清鐵水平明顯低于健康對(duì)照組，而總鐵結(jié)合力明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1　各組全血鐵蛋白水平變化分析±s)

2.2.2膠體金法測(cè)定全血鐵蛋白結(jié)果與疾病的符合率以試劑盒說(shuō)明書20 ng/mL作為診斷臨界點(diǎn)，評(píng)價(jià)其臨床應(yīng)用價(jià)值，其靈敏度為94%，特異度為100%，診斷效率為97%，見表2。

表2　膠體金法測(cè)定全血鐵蛋白結(jié)果與疾病的符合情況(n)

3討論

鐵是人體所必需的一種微量礦物元素，在氧的運(yùn)輸，血紅蛋白形成，電子傳遞和多種酶促反應(yīng)中扮演著重要角色[7]。血清鐵蛋白是體內(nèi)鐵儲(chǔ)存的主要形式，參與調(diào)節(jié)人體鐵的代謝平衡，是目前公認(rèn)的評(píng)估鐵儲(chǔ)存狀態(tài)的重要標(biāo)志物[8]。近年來(lái)越來(lái)越多的研究資料表明，體內(nèi)鐵代謝異常參與了多種生理、病理過(guò)程，鐵過(guò)量與腫瘤、糖尿病、冠心病等疾病密切相關(guān)[9]。鐵缺乏則是導(dǎo)致貧血發(fā)生的重要原因之一[7]。IDA是指由于血液中缺乏足夠的鐵，導(dǎo)致紅細(xì)胞或者血紅蛋白水平下降的一類多發(fā)于孕期女性、嬰幼兒及青少年的常見疾病，研究顯示孕婦缺鐵會(huì)導(dǎo)致嬰兒早產(chǎn)、體質(zhì)量過(guò)低，同時(shí)，鐵缺乏會(huì)損傷嬰幼兒的中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘的形成，影響嬰幼兒學(xué)習(xí)能力，對(duì)其智力造成不可逆的損傷，因而快速準(zhǔn)確地檢測(cè)孕婦和嬰幼兒的體內(nèi)鐵水平，及時(shí)發(fā)現(xiàn)鐵缺乏，并補(bǔ)充適量的鐵，對(duì)于嬰幼兒的健康和發(fā)育具有長(zhǎng)遠(yuǎn)意義。目前診斷IDA最有效的方法是骨髓鐵染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)外鐵水平[10]，但骨髓鐵染色只適用于大型醫(yī)院的臨床工作，由于其標(biāo)本的采集及方法學(xué)的限制，不利于進(jìn)行快速篩查以及床旁檢測(cè)。研究顯示血清鐵蛋白能有效地反映體內(nèi)鐵的存儲(chǔ)量，對(duì)IDA有較好的診斷價(jià)值，其標(biāo)本的采集及在臨床的推廣要比骨髓鐵染色更為方便[11-12]。

目前大部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)主要是通過(guò)免疫化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清鐵蛋白，雖然此種方法檢測(cè)的特異度和靈敏度較高，其缺點(diǎn)在于一方面檢測(cè)標(biāo)本需要抽取靜脈血，對(duì)嬰幼兒檢測(cè)時(shí)標(biāo)本采集比較困難；另一方面，需要大型化學(xué)發(fā)光分析儀且耗時(shí)，不適合床旁檢測(cè)和快速篩查。

國(guó)產(chǎn)膠體金定量檢測(cè)全血鐵蛋白采用雙抗夾心免疫層析法原理，當(dāng)測(cè)試卡上的樣品墊吸收到適量標(biāo)本時(shí)，標(biāo)本中的鐵蛋白會(huì)與標(biāo)本墊中的膠體金標(biāo)記抗體結(jié)合，形成“鐵蛋白-金標(biāo)抗體”復(fù)合物。檢測(cè)線色帶的顏色強(qiáng)度與鐵蛋白水平呈正相關(guān)。

本研究顯示膠體金法檢測(cè)全血鐵蛋白濃度在0～100 ng/mL內(nèi)線性良好，Y=0.975X+0.103，r2=0.997，該法的標(biāo)本穩(wěn)定性較好，2～8 ℃可保存3 d，黃疸、脂血、溶血對(duì)結(jié)果無(wú)干擾，將膠體金法和化學(xué)發(fā)光兩種方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.692，P>0.05)，與血清鐵蛋白比較，全血鐵蛋白測(cè)定結(jié)果偏低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。作為即時(shí)檢測(cè)，膠體金法不失為一種簡(jiǎn)便、快速的全血鐵蛋白檢測(cè)系統(tǒng)，其分析性能可滿足臨床即時(shí)篩查的要求。

全血鐵蛋白在IDA患兒中明顯降低，以20 ng/mL作為臨界點(diǎn)，膠體金法測(cè)定全血鐵蛋白具有較高診斷效率，在IDA診斷中有重要的意義，可作為一種快速篩查，對(duì)是否缺鐵作提示性診斷。如出現(xiàn)陽(yáng)性，需結(jié)合臨床和其他檢查綜合考慮。

綜上所述，膠體金滲濾法檢測(cè)全血鐵蛋白為一種簡(jiǎn)便、快速的全血鐵蛋白檢測(cè)系統(tǒng)，其分析性能可滿足臨床即時(shí)檢測(cè)的要求。鐵蛋白能有效地反映體內(nèi)鐵儲(chǔ)存量，對(duì)IDA有較好的診斷價(jià)值，為嬰幼兒的IDA快速篩查提供一種新型高效的檢測(cè)方法。

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Evaluation of performance of colloidal gold method on detecting blood ferritin and the value of blood ferritin in iron deficiency anemia in children

SONGTao1,TANShi1,LIQiuhong1,ZHAOYan2,LIXiaoqiang3,LIChunli1△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingHealthCenterforWomenandChildren，Chongqing400013,China；2.ChildrenHealthCareDepartment,ChongqingHealthCenterforWomenandChildren，Chongqing400013,China；3.DepartmentofClinicalLaboratory，Children′sHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400013，China)

ObjectiveTo analyze the performance of the colloidal gold method on detecting blood ferritin and the value of blood ferritin in iron deficiency anemia children.MethodsBy comparing with the chemiluminescence immunoassay method,the sensitivity,the liner，comparision and the distraction-analysis of blood ferritin were estimated following the EP file.A total of 50 children from Children′s Hospital of Chongqing Medical University diagnosed with iron deficiency anemia were enrolled randomly into this observational study.Other 50 abnormal children from Chongqing Health Center of Women and Children were selected into the control group.The blood ferritin was detected in the two groups.Efficiency of diagnose was analyzed.ResultsBetween-run assays were 7.2% and 9.6%，the linear range was 0-100 ng/mL.Hemoglobin,serum bilirubin,triglyceride had no interference in blood ferritin detection.Compared with the serum ferritin of Architect i2000SR,there was no significant difference(P>0.05).With the control group,the blood ferritin was significantly decreased.If 20 ng/mL was used as the cut-off value,the sensitivity was 94%,the specificity was 100%,the efficiency of diagnose was 97%.ConclusionAs a POCT detection project,analysis capability of the blood ferritin assayed by colloidal gold method could meet the requirements of clinical test.With good efficiency of diagnose,the method could prompt iron deficiency in children.

colloidal gold method；whole blood；ferritin；performance evaluation

2016-01-12修回日期：2016-03-19)

宋濤，男，檢驗(yàn)師，主要從事生化與免疫檢驗(yàn)研究?！?/p>

， E-mail:lcl518023@126.com

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.017

A

1673-4130(2016)12-1639-04

·論著·