子癇前期患者外周血、臍血中Chemerin的表達(dá)及意義

易媛媛 其木格 王敏

·論著·

子癇前期患者外周血、臍血中Chemerin的表達(dá)及意義

易媛媛 其木格 王敏

目的 探討子癇前期患者外周血、臍血中Chemerin的表達(dá)及意義。方法 選取2011-11—2012-12于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院剖宮產(chǎn)分娩的晚期妊娠、單胎、患有子癇前期的孕婦60例，其中輕度子癇前期(輕度組)患者30例，重度子癇前期(重度組)患者30例，于同期隨機(jī)選取單胎正常晚期妊娠組20例為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附劑測定三組患者外周血、臍血中Chemerin水平。結(jié)果 與對照組比較，子癇前期患者外周血、臍血中Chemerin的表達(dá)均升高，其中外周血、臍血血清中重度組Chemerin的濃度最高，與對照組比較，P＜0.01，重度組與輕度組比較，P＜0.05。與空腹血糖的相關(guān)性研究中，外周血、臍血樣本中Chemerin與血糖無明顯相關(guān)性(P＞0.05)，而外周血、臍血樣本中Chemerin與血壓、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)均呈明顯正相關(guān)，P＜0.01。外周血血清中Chemerin的濃度與臍血血清中Chemerin的表達(dá)量相一致。結(jié)論 Chemerin在子癇前期患者外周血、臍血中高表達(dá)可能為診斷及治療子癇前期提供新思路。

子癇前期；趨化素；胰島素抵抗

子癇前期在臨床中又被稱為“先兆子癇”，是指懷孕期血壓正常，但孕20周之后，出現(xiàn)高血壓、蛋白尿以及水腫等為主要癥狀的一組臨床癥候群，大多數(shù)患者隨妊娠繼續(xù)病情加重，分娩后癥狀隨之減輕并逐漸消失，是妊娠期孕婦的常見疾病[1]。Chemerin是新發(fā)現(xiàn)的與代謝綜合征相關(guān)的脂肪因子，參與調(diào)節(jié)胰島素抵抗及炎性反應(yīng)[2]。由于子癇前期的發(fā)生、發(fā)展與血管內(nèi)皮的炎性反應(yīng)密切相關(guān)，因此，本研究針對子癇前期患者血清中Chemerin的表達(dá)情況，探討其在子癇前期發(fā)生、發(fā)展中的可能機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011-11—2012-12于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院剖宮產(chǎn)分娩的晚期妊娠、單胎、患有子癇前期的孕婦60例。按照子癇前期嚴(yán)重程度分為輕度子癇前期患者(輕度組)30例，年齡22～38歲，平均(30.4±3.9)歲，孕周36.4～40.9周，平均(38.4±1.2)周；重度子癇前期患者(重度組)30例，年齡21～42歲，平均(31.4±5.3)歲，孕周32.0～40.3周，平均(36.6±2.7)周。選擇同期單胎正常晚期妊娠20例為對照組，年齡24～39歲，平均(29.2±3.5)歲，孕周37.0～40.7周，平均(39.1±1.1)周。三組年齡、孕周等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。除空腹血糖指標(biāo)外，子癇前期患者血壓、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)均高于對照組(P＜0.01)；重度組血壓、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)均高于輕度組(P＜0.01，表1)。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器 ①microplate reader RT-2100c酶標(biāo)儀(雷杜公司)。②RT-3000全自動洗板機(jī)(雷杜公司)。③ZHWY-100C型恒溫培養(yǎng)振蕩器(上海智城分析儀器制造有限公司)。④80-1臺式電動離心機(jī)(金壇市杰瑞爾電器有限公司)。

表1 三組血壓、血糖、空腹胰島素定量指標(biāo)等基線資料比較(±s)

表1 三組血壓、血糖、空腹胰島素定量指標(biāo)等基線資料比較(±s)

注：1 mmHg＝0.133 kPa

參數(shù) 對照組 子癇前期 P值輕度組 重度組收縮壓(mmHg) 118.1±10.1 145.3±7.0 165.0±16.8 0.000 0舒張壓(mmHg) 74.8±7.6 92.0±8.1 111.5±11.9 0.000 0空腹血糖(mmol/L) 3.89±0.79 4.11±0.60 4.13±0.73 0.447 5空腹胰島素定量(μU/ml) 9.75±4.18 11.91±3.25 13.94±3.35 0.000 5胰島素抵抗指數(shù) 1.77±0.94 2.13±0.56 2.56±0.75 0.001 5

1.2.2 檢測方法 采用酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)。①自－80℃冰箱中取出血清4℃融化備用。冰箱中取出ELISA試劑盒，室溫平衡20 min。將所有液體充分搖勻備用。從鋁箔袋中取出微孔酶標(biāo)板。每次加樣時(shí)間控制在5 min內(nèi)。②加樣：分別設(shè)置空白對照孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔。標(biāo)準(zhǔn)品孔依次加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為3、6、12、24、36 ng/mL)50 μL。在樣品孔中先加加待測樣品10 μL，再加樣品稀釋液40 μL(樣品稀釋5倍)。加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。③溫育：用封板膜封板后置于37℃恒溫培養(yǎng)振蕩器中，振蕩混勻后溫育30 min。④配液：將30×洗滌緩沖液用蒸餾水1∶30稀釋后備用。⑤洗滌：小心揭掉封板膜，洗板機(jī)洗滌，每孔注入洗滌液350 μL，浸泡1 min，洗板5次。⑥加酶：除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入酶標(biāo)試劑50 μL。⑦溫育：同③。⑧洗滌：同⑤。⑨顯色：每孔先加顯色劑A 50 μL，再加入顯色劑B50 μL，封板膜封板，輕輕振蕩混勻，37℃避光顯色15 min。⑩終止：每孔加終止液50 μL終止反應(yīng)，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。測定：于加終止液后15 min內(nèi)，以空白孔調(diào)零，采用450 nm波長測定各孔OD值。計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 21.0軟件包對本組研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間行t檢驗(yàn)，多組均數(shù)的多重比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Chemerin在外周血、臍血血清中的表達(dá) 與對照組比較，子癇前期患者外周血、臍血中Chemerin的表達(dá)均升高，其中外周血、臍血血清中重度組Chemerin的濃度最高，與對照組比較，P＜0.01，重度組與輕度組比較，P＜0.05(表2)。

表2 Chemerin在外周血、臍血血清中的表達(dá)(±s)

表2 Chemerin在外周血、臍血血清中的表達(dá)(±s)

注：與對照組比較，#P＜0.01；重度組與輕度組比較，*P＜0.05

參數(shù) 對照組 子癇前期 P值輕度組 重度組外周血血清(ng/L) 7.41±1.44 10.87±1.73# 13.36±2.69*# 0.000臍血血清(ng/L) 7.92±2.44 10.54±1.85# 12.61±2.61*# 0.000

2.2 Chemerin與血壓、血糖、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)的相關(guān)性 與空腹血糖的相關(guān)性研究中，外周血、臍血樣本中Chemerin與血糖無明顯相關(guān)性(P＞0.05)，而外周血、臍血樣本中Chemerin與血壓、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)均呈明顯正相關(guān)，P＜0.01。外周血血清中Chemerin的濃度與臍血血清中Chemerin的表達(dá)量相一致(表3，圖1～2)。

表3 Chemerin與血壓、血糖、空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)的相關(guān)性

圖1 外周血血清中Chemerin濃度與IR相關(guān)性的比較

圖2 臍血血清中Chemerin濃度與IR相關(guān)性的比較

3 討論

妊娠期高血壓是嚴(yán)重威脅母嬰健康，也是孕產(chǎn)婦和圍生兒觸發(fā)疾病與死亡的主要原因之一[3]。子癇前期患者除伴有血壓升高、蛋白尿等癥狀外，同時(shí)肥胖、炎癥反應(yīng)、胰島素抵抗也是常見癥狀。這些表現(xiàn)均提示子癇前期患者產(chǎn)后遠(yuǎn)期發(fā)生代謝性疾病及心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)大大增加[4]。研究結(jié)果表明[5]，胰島素抵抗、糖脂代謝異常等癥狀是子癇前期的重要致病因素，而脂肪組織在研究中被證明在孕前及孕期胰島素抵抗方面起了重要的調(diào)節(jié)作用。這說明妊娠期胰島素抵抗及代謝有脂肪細(xì)胞因子的參與調(diào)節(jié)。趨化素(Chemerin)是近期發(fā)現(xiàn)的一種脂肪細(xì)胞因子，其廣泛在人體的多種組織存在與表達(dá)，該因子參與天然免疫和適應(yīng)性免疫、炎癥反應(yīng)、糖脂代謝及胰島素抵抗的調(diào)節(jié)。所以不斷有研究嘗試論證其與代謝綜合征、2型糖尿病、肥胖、妊娠期糖尿病及子癇前期之間的密切關(guān)系[6]。

本次研究結(jié)果顯示Chemerin與空腹胰島素定量、胰島素抵抗指數(shù)均呈正相關(guān)，與國外相關(guān)研究結(jié)果相一致[7]，這也表明Chemerin以能夠通過多種機(jī)制和途徑參與胰島素抵抗的發(fā)生與發(fā)展。Chemerin在3T3-L1細(xì)胞內(nèi)以自分泌、旁分泌的方式釋放，與鄰近的受體相結(jié)合，胰島素刺激信號增強(qiáng)引起葡萄糖攝取增多，與此同時(shí)使胰島素樣受體底物1(IRS-1)酪氨酸的磷酸化水平增強(qiáng)，以調(diào)節(jié)脂肪組織的胰島素敏感性。由此可見Chemerin能夠在脂肪細(xì)胞中發(fā)揮一定的作用使脂肪組織對胰島素的敏感性發(fā)生變化從而增加對葡萄糖的攝取[8]。

高胰島素血癥可導(dǎo)致血壓升高，由于機(jī)體NO合成能力下降且伴隨脂質(zhì)代謝紊亂，影響前列腺素E2的合成，最終使外周血管的阻力增加。胰島素抵抗(IR)引起子癇前期發(fā)病可能通過以下途徑[9-12]：隨著IR在妊娠期逐漸加重，細(xì)胞對糖代謝及糖的攝取在下丘腦的調(diào)解下不斷增加，此時(shí)腦干交感神經(jīng)中樞對這一現(xiàn)象的抑制作用不斷減弱，結(jié)果就是交感神經(jīng)興奮性增加，兒茶酚胺類物質(zhì)分泌、合成增多，最終血管收縮加強(qiáng)。受激素的影響，妊娠期機(jī)體都存在不同程度的胰島素抵抗(IR)，這種IR隨著孕齡的增加而加重[13-15]。同時(shí)發(fā)現(xiàn)正常妊娠婦女也存在著不同程度的IR，當(dāng)患有子癇前期時(shí)，IR明顯升高，且重度患者升高更加明顯，此文結(jié)果證明胰島素抵抗程度與子癇前期病情程度正相關(guān)，結(jié)論與國內(nèi)外研究結(jié)果相一致[8]。

綜上所述，Chemerin在子癇前期患者外周血、臍血中高表達(dá)可能為診斷及治療子癇前期提供新思路。

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Objective To discuss the expression and significance of Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood among preeclampsia sufferers.Methods 60 pregnant women with late pregnancy，single birth and preeclampsia were selected for the study who were admitted to Obstetrical Department of the First Affiliated Hospital to Inner Mongolia Medical University from November 2011 to December 2012 for cesarean delivery.Among which there were 30 cases with mild preeclampsia(Mild group)，30 cases with severe preeclampsia(Severe group).Simultaneously 20 cases with normal late pregnancy and single birth were randomly selected to be the control group.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was adopted to measure the Chemerin level in peripheral blood and umbilical cord blood in the three groups.Results Compared with the control group，the expression of Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood among preeclampsia sufferers all increased，among which the concentration of Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood serum was the highest in the severe group.Comparison between the severe group and the control group showedP＜0.01，while comparison between the severe group and the mild group showedP＜0.05.In the relevant research with fasting blood glucose，Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood had no obvious correlation with fasting blood glucose(P＞0.05).While Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood was clearly positively correlated with blood pressure，fasting insulin ration，and insulin resistance index(P＜0.01).The concentration of Chemerin in peripheral blood serum was consistent with the expression quantity of Chemerin in umbilical cord blood serum.Conclusion The high expression of Chemerin in peripheral blood and umbilical cord blood among preeclampsia sufferers can provide new thoughts for the diagnosis and treatment of preeclampsia.

Preeclampsia；Chemerin；Insulin resistance

2016-06-27)

1005-619X(2016)11-1121-04

10.13517/j.cnki.ccm.2016.11.001

010050 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院產(chǎn)科

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)科技百萬工程項(xiàng)目(YKD2013KJBW013)；內(nèi)蒙古自治區(qū)醫(yī)療衛(wèi)生科研計(jì)劃項(xiàng)目(201302078)