填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法對(duì)血管性癡呆大鼠海馬組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

徐云龍李 肖趙建軍

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填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法對(duì)血管性癡呆大鼠海馬組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

徐云龍1李 肖2趙建軍1

【摘要】目的 觀察填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法對(duì)VD大鼠海馬組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響。方法 建立雙血管阻塞（2VO）改良法復(fù)制VD大鼠模型；采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)海馬組織內(nèi)去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）含量。結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬組織NE、DA、5-HT含量減少（P＜0．05）；與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組，中藥高劑量組、中藥中劑量組海馬組織DA、5-HT含量均增加（P＜0．05），陽(yáng)性對(duì)照組，中藥高劑量組海馬組織NE含量增加（P＜0．05）。結(jié)論 填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法改善大鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙，其作用機(jī)制可能與提高海馬組織內(nèi)NE、DA、5-HT含量相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】填精補(bǔ)髓；活血化痰開(kāi)竅法；血管性癡呆；單胺類神經(jīng)遞質(zhì)

Objective To observe the effect of tianjingbusui huoxuehuatankaiqiaofa （TJBSHXHTKQF） on the contents of monoamine neurotransmitter in hippocampus of vascular dementia（VD）rats． Methods The vessel occlusion（2VO）was modified to establish the VD model． The contents of NE，DA and 5-HT in hippocampus were determined with Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISE）． Results Compared with sham group，the contents of NE，DA and 5-HT were decreased（P＜0．05） in model group． Compared with model group，the contents of DA and 5-HT were clearly increased（P＜0．05）in the high，middle dose of traditional Chinese medicine groups and the donepezil group，the contents of NE were increased（P＜0．05） in the high dose of TCM groups and the donepezil group． Conclusion The TJBSHXHTKQF could improve the learning and memory capability of VD rats，the mechanism may be closely related with increasing the contents of NE，DA and 5-HT in hippocampus．

【Key words】Tianjingbusui，Huoxuehuatankaiqiaofa，Vascular dementia，Monoamine neurotransmitter

血管性癡呆（vascular dementia，VaD）是指由各種腦血管病引起的獲得性智能損害及認(rèn)知障礙綜合征，在癡呆常見(jiàn)病因中僅次于阿爾茨海默病，位居第二［1］。研究顯示，我國(guó)65歲及以上老年人中癡呆患病率約為7.8%，而VD患病率為1.1%，目前針對(duì)血管性癡呆的預(yù)防及治療已成為醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究和臨床研究的迫切的任務(wù)。本文通過(guò)觀察填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法對(duì)VD大鼠海馬組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響，進(jìn)一步驗(yàn)證填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法對(duì)VD可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 血管性癡呆大鼠模型制備

選用健康Wistar大鼠75只，體重為（250±30）g，雌雄各半，由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供及喂養(yǎng)。隨機(jī)分為假手術(shù)組（正常對(duì)照組）、模型組、陽(yáng)性對(duì)照藥組、中藥高、中、低劑量組，經(jīng)飼養(yǎng)及篩選后各組選取10只大鼠。參照文獻(xiàn)制備模型［2］，術(shù)前12 h禁食水，應(yīng)用10%水合氯醛（0.3 g/kg）麻醉大鼠，仰臥固定，常規(guī)消毒后頸部正中切開(kāi)，充分暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈，并對(duì)其進(jìn)行結(jié)扎。假手術(shù)組大鼠僅分離動(dòng)脈，但不結(jié)扎。各給藥組劑量為中藥高劑量組2 g/（kg?d）、中劑量組1 g/（kg?d）、低劑量組0.5 g/（kg?d）。陽(yáng)性對(duì)照組鹽酸多奈哌齊片0.77 mg/（kg?d），連續(xù)灌胃28 d。假手術(shù)對(duì)照組、模型組給予同體積生理鹽水。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑

鹽酸多奈哌齊片（安理申）：每片5 mg，衛(wèi)材（中國(guó)）藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20050978。填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅方（石菖蒲、郁金、山藥、山萸肉、龜板膠、川芎、紅花、肉蓯蓉、益智仁）由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室制成。去甲腎上腺素（NE）測(cè)定試劑盒、多巴胺（DA）測(cè)定試劑盒、5-羥色胺（5-HT）測(cè)定試劑盒，以上試劑均為美國(guó)R＆D公司產(chǎn)品，批號(hào)：20151001A。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

各組大鼠海馬組織NE、DA、5-HT含量水平，處死大鼠后冰盤上快速取腦，加入冰生理鹽水，電動(dòng)勻漿機(jī)勻漿，并于鏡檢下未見(jiàn)完整細(xì)胞。制備好濃度為10%的勻漿液，3 500 r/min離心10 min，提取上清。后采用ELISA法檢測(cè)海馬組織NE、DA、5-HT含量，檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)本次的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，結(jié)果用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬組織NE、DA、5-HT含量減少（P＜0.05），與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組，中藥高劑量組、中藥中劑量組海馬組織DA、5-HT含量均增加（P＜0.05），而陽(yáng)性對(duì)照組，中藥高劑量組海馬組織NE含量增加（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)者在長(zhǎng)期臨床實(shí)踐中不斷發(fā)現(xiàn)，VD的發(fā)病與“毒邪”致病有著密切聯(lián)系。王永炎院士［3］提到痰、虛、瘀互結(jié)為VD發(fā)病的病理基礎(chǔ)，病久痰瘀互阻，毒自內(nèi)生，毒害腦髓、腦絡(luò)而發(fā)展為癡呆。而任繼學(xué)教授則認(rèn)為“髓虛毒損”是本病的關(guān)鍵病機(jī)，認(rèn)為癡呆就病性而言，多以虛為本，實(shí)為標(biāo)，虛實(shí)夾雜是該病特點(diǎn)。虛則責(zé)其年老體衰，臟氣虧虛，真水不足，無(wú)以聚精生髓，故髓減腦消；而實(shí)則責(zé)其卒中后血損而成瘀，而“血液者，痰之本也”，有瘀必有痰，痰瘀互結(jié)，則生毒邪，更傷腦髓。故以此病機(jī)為指導(dǎo)，確立“填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法”治療本病。

表1 填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法對(duì)VD大鼠海馬組織NE、DA、5-HT含量的影響（±s，n=10）

表1 填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法對(duì)VD大鼠海馬組織NE、DA、5-HT含量的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較：*P＜0．05

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單胺類神經(jīng)遞質(zhì)是記憶形成及存儲(chǔ)中不可或缺的環(huán)節(jié)之一，主要包括NE、DA、5-HT等［4］。腦內(nèi)缺血缺氧時(shí)，腦組織內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝發(fā)生紊亂，導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙，促使VD的發(fā)生發(fā)展。有研究證實(shí)，認(rèn)知能力下降與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的下降程度是一致的［5］。由此可見(jiàn)，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)認(rèn)知功能有著直接關(guān)系。本研究提示腦缺血時(shí)腦組織內(nèi)NE、DA、5-HT含量下降，對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能產(chǎn)生了影響。因此提高腦組織內(nèi)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，可改善學(xué)習(xí)記憶能力。

本實(shí)驗(yàn)表明填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法高劑量組、中劑量組、陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸多奈哌齊組能提高VD大鼠海馬組織DA、5-HT含量，且高于模型組，證實(shí)填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法高劑量組、中劑量組能增加VD大鼠海馬組織內(nèi)DA、5-HT的含量，使其記憶力及學(xué)習(xí)能力得到改善。而填精補(bǔ)髓、化痰開(kāi)竅法高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸多奈哌齊組可提高VD大鼠海馬組織NE的含量，且高于模型組，促進(jìn)了VD大鼠學(xué)習(xí)記憶功能恢復(fù)。因此，填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法改善VD大鼠認(rèn)知功能的機(jī)制可能是通過(guò)提高腦內(nèi)海馬組織中NE、DA、5-HT含量水平而得到改善，為填精補(bǔ)髓、活血化痰開(kāi)竅法在臨床防治VD中提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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［2］ 徐叔云，卞如濂，陳修，等． 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］． 北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1060．

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［4］ Blom K，Emmelot-Vonk M H，Koek H L． The influence o vascular risk factors on cognitive decline in patients with dementia：systematic review［J］． Maturitas，2013，76（2）：113-117．

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【中圖分類號(hào)】R285．5

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-9316（2016）06-0189-03

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．06．140

作者單位：1 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腦病科，吉林 長(zhǎng)春130021 ；2 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117

通訊作者：趙建軍，E-mail：zhaojianjun8777@163．com

Effect of Tianjingbusui Huoxuehuatankaiqiaofa on the Contents of Monoamine Neurotransmitter in Hippocampus of Vascular Dementia Rats

XU Yunlong1LI Xiao2ZHAO Jianjun11 Department of Encephalopathy，Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun Jilin 130021，China，2 Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun Jilin 130117，China

【Abstract】