• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    谷物及其制品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其衍生物的檢測(cè)及污染規(guī)律分析

    2020-03-11 08:44:02彭青枝
    食品科學(xué) 2020年4期
    關(guān)鍵詞:掛面小麥粉谷物

    龔 蕾,韓 智,程 慧,劉 杰,彭青枝*

    (湖北省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院,湖北省食品質(zhì)量安全檢測(cè)工程技術(shù)研究中心,湖北 武漢 430070)

    真菌毒素是真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物,谷物在生產(chǎn)、儲(chǔ)藏或加工不當(dāng)時(shí),均可能發(fā)生霉變,從而產(chǎn)生真菌毒素[1]。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)又稱嘔吐毒素,DON及其衍生物是糧食類作物霉變產(chǎn)生的分布最廣泛、影響較大的單端孢霉烯族化合物之一[2]。世界各地均發(fā)現(xiàn)DON及其衍生物存在,主要是小麥、玉米、燕麥等農(nóng)作物;DON及其衍生物除引起腹瀉、嘔吐、發(fā)燒甚至死亡等癥狀外,還可能會(huì)導(dǎo)致貧血、食管癌、克山病等疾病發(fā)生[3]。DON及其衍生物可以和其他毒素產(chǎn)生協(xié)同作用而加強(qiáng)毒性,使得中毒癥狀更為復(fù)雜[4]。

    李瑞園等[5]采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)法測(cè)定分析200 份糧食類樣品中DON及其衍生物的含量,其中小麥、大麥、玉米及燕麥均有DON檢出,其檢出率分別為32%、40%、51%和25%。DON含量范圍為7.7~244 mg/kg,另外,47 份的玉米中DON含量已超過(guò)國(guó)家1 000 μg/kg的限量標(biāo)準(zhǔn)。有研究表明[6],利用含有DON的小麥做加工實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)磨粉并不會(huì)使DON總含量減少,只是小麥不同組分間進(jìn)行了重新分配,其中,DON含量最高的是麩皮和胚芽部分。面條、饅頭和包子等都屬于谷物加工品,有研究者認(rèn)為經(jīng)加工處理后,谷物中DON應(yīng)該有所去除,然而,DON在不同的加工過(guò)程中(粉碎、混合、發(fā)酵等)其含量隨之變化,并不是一直處于下降趨勢(shì)[7-8]。

    近年來(lái),隨著DON研究的深入,隱蔽型DON(即DON的衍生物)逐步成為關(guān)注的焦點(diǎn)。其中,脫氧雪腐鐮刀菌烯醇-3-葡萄糖苷(deoxynivalenol-3-glucoside,D3G)是目前研究較多的隱蔽型DON,也是隱蔽型DON的主要種類之一。D3G廣泛存在于谷物中,李鳳琴等[9]對(duì)中國(guó)7 個(gè)省2007ü2008年DON在谷物中污染狀況進(jìn)行了調(diào)查,結(jié)果表明小麥和玉米樣品均有D3G存在,小麥的中位數(shù)為21.4 μg/kg,玉米的中位數(shù)為34.6 μg/kg。更重要的是,谷物在深加工過(guò)程中,所含有的D3G可轉(zhuǎn)移到其加工制品中,如啤酒、面包。隱蔽型D3G在動(dòng)物和人腸道中經(jīng)消化酶的作用,可能釋放出DON單體而同樣產(chǎn)生毒性[10]。目前,國(guó)內(nèi)外多對(duì)谷物中的DON規(guī)定了限量。GB 2761ü2017《食品中真菌毒素限量》[11]中谷物及其制品,具體涉及到玉米、玉米面(渣、片)、小麥、大麥、麥片及小麥粉,其DON限量值為1 000 μg/kg。但若谷物制品的生產(chǎn)工藝不同,那么相同的食品原料生產(chǎn)不同產(chǎn)品時(shí),DON最大殘留量則不確定。國(guó)外對(duì)DON最大殘留限量值有不同的規(guī)定,如歐盟[12]分別規(guī)定了谷物、面粉和面包中DON的限量,分別不能超過(guò)1 250、750 μg/kg和500 μg/kg;美國(guó)食品及藥品管理局規(guī)定[13],用于食用的小麥制品如面粉等,其DON允許最大殘留量為1 000 μg/kg;而用于磨粉的小麥DON不得超過(guò)2 000 μg/kg;飼料的限量稍高一些,用于飼料的小麥制品DON的限量為4 000 μg/kg。加拿大衛(wèi)生部規(guī)定[14]嬰兒食品中DON不得超過(guò)1 000 μg/kg。

    國(guó)內(nèi)外檢測(cè)糧食中痕量DON及其衍生物的方法主要有薄層色譜法[15]、試紙條法[16-17]、氣相色譜法[18]、HPLC法[19-21]和HPLC-MS法[22-24]。其中薄層色譜法簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì),對(duì)設(shè)備和操作人員要求不高,但可重復(fù)性和再現(xiàn)性差;氣相色譜需要進(jìn)行衍生化處理,實(shí)驗(yàn)繁瑣復(fù)雜,技術(shù)上存在的問(wèn)題也在一定程度上限制了其的推廣應(yīng)用;HPLC假陽(yáng)性干擾大;HPLC-MS/MS法具有前處理簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn),可適用于復(fù)雜基質(zhì)樣品中多組分真菌毒素的定性和準(zhǔn)確定量。本實(shí)驗(yàn)采用HLB固相萃取柱對(duì)樣品進(jìn)行凈化,建立小麥粉、掛面、大米、玉米糝等谷物及其制品中DON及其3 種衍生物同時(shí)測(cè)定的HPLC-MS/MS法,用于谷物中DON及其3 種衍生物的確證分析,方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確,可為衛(wèi)生監(jiān)督部門提供相對(duì)有效的監(jiān)督手段,完善我國(guó)谷物及其制品的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)方法,并對(duì)不同谷物及其制品的毒素分布規(guī)律進(jìn)行探討,旨在為系統(tǒng)評(píng)估隱蔽型毒素對(duì)人和動(dòng)物的潛在危害做數(shù)據(jù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    96 份樣品來(lái)源于湖北省武漢市、黃石市、宜昌市、十堰市市區(qū)超市。

    DON標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL) 中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院;3-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(3-acetyldeoxynivalenol,3ADON)標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)、D3G(50 μg/mL)美國(guó)Sigma公司;15-乙?;撗跹└牭毒┐迹?5-acetyldeoxynivalenol,15ADON)(100 μg/mL)新加坡Pribolab公司;乙腈、甲醇、乙酸銨、正己烷為色譜純,水為Millipore凈化的超純水。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Qtrap 6500 HPLC-MS/MS儀 美國(guó)AB SCIEX公司;SB25-12DTS雙頻超聲波清洗器 寧波新芝生物科技股份有限公司;ME204電子天平 梅特勒-托利多儀器有限公司;MS3 digital渦旋儀 德國(guó)IKA公司;Centrifuge 5810離心機(jī) 艾本德中國(guó)有限公司;0.22 μm水相濾膜 天津津騰公司;Milli-Q去離子水發(fā)生器 美國(guó)Millipore公司;Oasis HLB柱(6 mL,500 mg) 美國(guó)Waters公司。

    1.3 方法

    1.3.1 色譜條件

    色譜柱:A c q u i t y U P L C H S S T 3色譜柱(100 mmh2.1 mm,1.8 μm);進(jìn)樣量5 μL;柱溫35 ℃;流動(dòng)相:A相為乙腈,B相為2 mmol/L乙酸銨溶液,流速0.3 mL/min;梯度洗脫條件如表1所示。

    表1 梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution program

    1.3.2 質(zhì)譜條件

    離子源:電噴霧離子源(electrospray ionization,ESI);掃描方式:正負(fù)離子模式同時(shí)掃描;檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè);電噴霧電壓5 500 V(ESI+),-4 500V(ESI-);離子源溫度600 ℃;氣簾氣(氮?dú)猓毫?5 psi;碰撞氣(氮?dú)猓毫χ械?;霧化氣(氮?dú)猓毫?5 psi;輔助氣(氮?dú)猓毫?0 psi;入口電壓10.0 V;碰撞室出口電壓10.0 V;掃描時(shí)間3.5~8.5 min。各真菌毒素的質(zhì)譜條件見(jiàn)表2。

    表2 4 種化合物的定性離子、定量離子、去簇電壓和碰撞能量Table 2 Qualitative ions, quantitative ions, cone voltage and collision energy for four mycotoxins

    1.3.3 樣品處理

    稱取2.00 g(準(zhǔn)確至0.01 g)試樣于50 mL離心管中,加20.0 mL乙腈-水溶液(84∶16,V/V),超聲20 min,5 000 r/min離心10 min,收集上清液。

    取5.0 mL上清液置于50 mL離心管中,加入10.0 mL乙腈飽和正己烷溶液,渦旋混合2 min,5 000 r/min離心5 min,棄去正己烷層后,于40~50 ℃氮?dú)獯蹈?,加?.0 mL水充分溶解殘?jiān)齼艋?/p>

    將HLB固相萃取柱連接到固相萃取裝置,先后用3.0 mL甲醇和3.0 mL水活化平衡。將5.0 mL上述水復(fù)溶液上柱,控制流速1~2 滴/s。用3.0 mL水、1.0 mL 5%甲醇-水溶液依次淋洗柱子后徹底抽干。用5.0 mL甲醇洗脫,收集全部洗脫液后在40~50 ℃氮?dú)獯蹈?。加?.0 mL初始流動(dòng)相溶解殘留物,渦旋混勻10 s,過(guò)0.22 μm,待進(jìn)樣。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 質(zhì)譜條件與色譜條件的優(yōu)化

    研究不同電離模式下4 種真菌毒素的響應(yīng)情況。3ADON和15ADON是同分異構(gòu)體,在[M+H]+及[MH]-模式均有較高的響應(yīng),但在[M+H]+模式下離子對(duì)相互干擾較大,故使用[M-H]-模式;D3G在[M+H]+和[M-H]-下的響應(yīng)值均低,在[M+NH4]+下響應(yīng)較好,故采用[M+NH4]+;DON采用[M-H]-,此模式下有較少基線干擾,相對(duì)響應(yīng)較高。4 種化合物中,3ADON與15ADON是同分異構(gòu)體,D3G脫去葡萄糖苷基團(tuán)后成為DON,為得到最佳的分離度,對(duì)色譜柱的選擇及洗脫梯度進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明使用Acquity UPLC HSS T3色譜柱(100 mmh2.1 mm,1.8 μm)進(jìn)行表1所示的梯度洗脫時(shí),4 種化合物均得到有效分離,圖1為真菌毒素的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子色譜圖。

    圖1 D3G、DON、3ADON和15ADON的總離子流圖Fig. 1 Total ion current chromatograms of four mycotoxins

    2.2 樣品前處理方法的優(yōu)化

    表3 不同前處理方式回收率的對(duì)比Table 3 Comparison of recoveries of four mycotoxins with different pretreatment methods

    分別考察不同的前處理方式:1)稱取樣品2.5 g,加10.0 mL水,超聲提取20 min,5 000 r/min離心10 min,過(guò)0.22 μm膜待測(cè);2)稱取樣品2.0 g,加20.0 mL乙腈-水溶液(84:16,V/V),超聲提取20 min,5 000 r/min離心10 min,取5.0 mL上清液過(guò)HLB柱,取過(guò)柱液5.0 mL氮吹干,定容至1.0 mL,過(guò)膜后待測(cè);3)如1.3.3節(jié)進(jìn)行前處理。如表3所示,前處理方式3)樣品上機(jī)液干凈且4 種真菌毒素的回收率均比較穩(wěn)定,重復(fù)性好。因此,本方法采用3)樣品前處理方式。

    2.3 4 種毒素的線性關(guān)系與回收率

    配制一系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在1.3.1節(jié)和1.3.2節(jié)的儀器條件下進(jìn)行測(cè)定,得出4 種毒素在5.0~250 μg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r均大于0.99,檢出限均為10 μg/kg,定量限(limit of quantification,LOQ)為20 μg/kg。

    在大米、掛面、小麥粉和玉米糝樣品中分別添加標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照1.3.3節(jié)方法進(jìn)行樣品前處理。在1.3.1和1.3.2節(jié)條件下進(jìn)行測(cè)定,每個(gè)添加水平平行測(cè)定6 份,計(jì)算平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD),結(jié)果見(jiàn)表4。方法的平均回收率為88.5%~117.0%,RSD為1.5%~8.6%。

    表4 D3G、DON、3ADON和15ADON的回收率(n=6)Table 4 Recoveries of four mycotoxins in spiked samples (n= 6)

    2.4 樣品污染規(guī)律分析

    表5 谷物及制品中DON及D3G的含量Table 5 Detection rates of DON and D3G in cereals and their products

    對(duì)96 份樣品進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果顯示,15ADON均無(wú)檢出,只有一個(gè)小麥粉樣品檢出3ADON,DON和D3G均有不同程度的檢出,DON檢出率大于D3G,其中在掛面中的含量最高,結(jié)果見(jiàn)表5。此外,不同食品種類毒素檢出率有所不同,其中掛面>小麥粉>其他>大米。

    2.4.1 同一類谷物中不同毒素的污染分布

    從表5可以看出,大米樣品中只有1 份檢出DON,含量為120.3 μg/kg,其他3 種衍生物均未檢出。其他谷物樣品結(jié)果與大米類似,只有1 份檢出DON,含量為99.0 μg/kg,其他3 種衍生物均未檢出。小麥粉中DON和D3G檢出率分別為69.2%和30.8%,DON含量基本小于500 μg/kg,有1 份樣品則達(dá)到2 133.2 μg/kg(國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)為≤1 000 μg/kg);D3G含量不超過(guò)300 μg/kg。掛面中DON和D3G檢出率分別為83.3%和50.0%,DON含量基本小于400 μg/kg,而有6 份樣品大于1 000 μg/kg,最高的則達(dá)到了2 156.4 μg/kg;D3G含量小于DON,最高含量為552.8 μg/kg。從小麥粉和掛面中DON和D3G的檢出可以看出,當(dāng)DON達(dá)到最高時(shí),D3G也是最高。

    對(duì)96 份樣品檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),有DON檢出的樣品不一定會(huì)有其他3 種衍生物檢出,有其他3 種衍生物檢出則一定會(huì)有DON的檢出,因此在本研究中,DON的檢出率可以代表整個(gè)樣品的檢出率。DON等4 種毒素在不同谷物樣品中的含量不同,且同類谷物中DON和D3G的中位數(shù)一般不等于算數(shù)平均數(shù),這有可能是因?yàn)镈ON等4 種毒素在谷物中含量的分布可能不服從正態(tài)分布。

    2.4.2 不同谷物中毒素含量的區(qū)別

    對(duì)96 份樣品進(jìn)行檢測(cè),僅有1 份小麥粉樣品檢出3ADON,含量為78.5 μg/kg,大米、小麥粉、掛面和其他谷物均未檢出3ADON和15ADON。DON和D3G均有不同程度的檢出,所有樣品中DON等毒素檢出率的高低順序依次為DON(41.7%)>D3G(20.8%)>3ADON(1.0%)>15ADON(0.0%)。4 類谷物中,毒素檢出率最高的是掛面,達(dá)到了83.3%,其次是小麥粉,因此可以看出,掛面的污染最為嚴(yán)重。

    圖2 D3G與DON的線性擬合圖Fig. 2 Linear curve fi tting of D3G versus DON content

    DON和D3G有一定的正相關(guān)關(guān)系,具體擬合直線見(jiàn)圖2。其方程為Y=3.89X,相關(guān)系數(shù)為0.925。這在一定程度上說(shuō)明,高含量DON存在時(shí),D3G也會(huì)有高含量存在,反過(guò)來(lái)亦是如此。由于DON主要是禾谷鐮刀菌和黃色鐮刀菌產(chǎn)生,而D3G是DON的隱蔽型,所以二者同時(shí)出現(xiàn)的概率很大,本研究所得到二者的結(jié)果有一定的相關(guān)性是合理的。D3G往往與其DON原型及乙酰衍同時(shí)廣泛存在于小麥、大麥、燕麥、啤酒等糧食及制品中,Malachova等[25]檢測(cè)捷克的谷物和面粉樣品(共116 份),數(shù)據(jù)表明,DON在樣品中的污染率為75%,含量在13~594 μg/kg范圍內(nèi);而D3G的污染率甚至達(dá)到80%,但含量卻低于DON,為5~72 μg/kg。Simsek等[26]對(duì)美國(guó)不同地區(qū)的春麥進(jìn)行考察,通過(guò)研究發(fā)現(xiàn),影響DON和D3G含量的最大因素是地域,且隱蔽型D3G含量與原型DON含量呈現(xiàn)出正相關(guān)關(guān)系。本研究在一定程度上契合了前者的報(bào)道。

    在已有研究中[27],雖然暫時(shí)沒(méi)有直接證據(jù)證明隱蔽型真菌毒素是強(qiáng)于其原型的真菌毒性,但有研究數(shù)據(jù)表明[28-31],一些隱蔽型真菌毒素在代謝過(guò)程中可能會(huì)水解,并釋放出毒素原型,因此,隱蔽型真菌毒素是危害人類健康的潛在風(fēng)險(xiǎn)之一。美國(guó)已將隱蔽型毒素D3G與其原DON(D3G/DON)作為小麥抗赤霉病毒素的重要評(píng)估指標(biāo),歐洲將隱蔽型DON列入例行DON毒素監(jiān)測(cè)對(duì)象,并提出其日允許攝入量值與原型等同,聯(lián)合國(guó)糧食與農(nóng)業(yè)組織和世界衛(wèi)生組織下的食品添加劑聯(lián)合專家委員會(huì)在2010年4月第72次會(huì)議上決定,將原來(lái)針對(duì)DON的每日最大允許攝入量改為針對(duì)DON及其乙?;苌铮?-A-DON及15-A-DON)化合物組的每日最大允許攝入量(1 μg/kg)[32]。本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)一步印證了這種風(fēng)險(xiǎn)的存在,DON與其隱蔽型D3G含量之和大于DON含量,隱蔽型毒素在谷物中的污染不容忽視。

    3 結(jié) 論

    本研究建立HPLC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)小麥粉、掛面、玉米糝、大米等谷物及其制品中DON、D3G、3ADON和15ADON含量的方法,方法經(jīng)過(guò)優(yōu)化和驗(yàn)證,滿足谷物及其制品的檢測(cè)要求。

    分析96 份谷物及其制品中4 種真菌毒素的分布規(guī)律,結(jié)果表明,15ADON無(wú)檢出,只有1 個(gè)樣品檢出3ADON,DON和D3G均有不同程度的檢出,DON檢出率大于D3G。不同食品種類主要污染的毒素種類均以DON為主,其中掛面的污染最為嚴(yán)重。此外,統(tǒng)計(jì)分析顯示D3G與DON含量相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.925,而這兩種毒素的協(xié)同作用造成的危害目前仍然比較空白??傮w而言,D3G/DON在30%左右,在谷物及其制品中污染比較普遍。而谷物及其制品是我國(guó)人民的主要糧食,因此,探尋谷物中DON及其衍生物4 種真菌毒素污染的控制措施,保證谷物安全具有重要意義。

    猜你喜歡
    掛面小麥粉谷物
    小麥粉加工及選購(gòu)
    糧食加工(2022年5期)2022-12-28 22:34:59
    白俄羅斯延長(zhǎng)小麥粉和蕎麥出口禁令
    烏克蘭谷物和油料作物庫(kù)存遠(yuǎn)低于2020年同期
    中江掛面:銀絲飄香九百年
    巴蜀史志(2021年2期)2021-09-10 13:17:04
    SPE-GC法在小麥粉中典型農(nóng)藥殘留物測(cè)定中的應(yīng)用
    烏克蘭谷物和油料作物庫(kù)存遠(yuǎn)低于2020年同期
    擊打式谷物加工農(nóng)具
    軍事文摘(2020年20期)2020-11-16 00:32:10
    一把掛面——脫貧攻堅(jiān)鄉(xiāng)村行走4
    “媽媽牌”掛面
    “媽媽牌”掛面
    国产不卡一卡二| 在线观看www视频免费| 美国免费a级毛片| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 青青草视频在线视频观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| av超薄肉色丝袜交足视频| 久久国产精品大桥未久av| 日韩精品免费视频一区二区三区| 不卡一级毛片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 午夜福利乱码中文字幕| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 国产1区2区3区精品| 日本黄色视频三级网站网址 | 高清黄色对白视频在线免费看| 操出白浆在线播放| 丁香六月欧美| 99国产极品粉嫩在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美日韩视频精品一区| 国产一区二区 视频在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 宅男免费午夜| 超色免费av| 久久ye,这里只有精品| 国产成+人综合+亚洲专区| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品九九99| 国产色视频综合| 制服人妻中文乱码| 欧美日韩黄片免| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品偷伦视频观看了| svipshipincom国产片| 高清欧美精品videossex| 亚洲精品在线观看二区| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲精品国产一区二区精华液| 99国产精品一区二区三区| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 日本一区二区免费在线视频| 在线观看舔阴道视频| 男人舔女人的私密视频| 岛国毛片在线播放| 精品国产乱码久久久久久男人| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产免费福利视频在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 十八禁网站网址无遮挡| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 天天操日日干夜夜撸| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 蜜桃在线观看..| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| videosex国产| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品亚洲av一区麻豆| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久热在线av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产精品熟女久久久久浪| 动漫黄色视频在线观看| 丝袜喷水一区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 午夜福利一区二区在线看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美日本中文国产一区发布| 成人亚洲精品一区在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产97色在线日韩免费| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲一区二区三区欧美精品| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 男人操女人黄网站| 亚洲av成人一区二区三| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲五月婷婷丁香| 日日夜夜操网爽| 成人国产一区最新在线观看| 黄频高清免费视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产视频一区二区在线看| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲色图综合在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产成人精品久久二区二区91| 国产精品久久电影中文字幕 | 久久久精品区二区三区| 999久久久国产精品视频| 18禁观看日本| 丝袜喷水一区| 午夜福利乱码中文字幕| 久久中文看片网| 欧美黑人欧美精品刺激| 精品少妇黑人巨大在线播放| 宅男免费午夜| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产福利在线免费观看视频| 久久亚洲真实| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产成人精品久久二区二区91| 国产区一区二久久| 高清欧美精品videossex| 麻豆成人av在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 免费黄频网站在线观看国产| 日韩欧美一区视频在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 男女边摸边吃奶| 久久人妻av系列| 久久久久久人人人人人| 精品免费久久久久久久清纯 | 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲,欧美精品.| 最黄视频免费看| 99久久99久久久精品蜜桃| tube8黄色片| 精品免费久久久久久久清纯 | 日韩一区二区三区影片| 欧美日本中文国产一区发布| 国产单亲对白刺激| 亚洲专区国产一区二区| 国产成人精品在线电影| 亚洲国产中文字幕在线视频| 男人舔女人的私密视频| 久久免费观看电影| 久久 成人 亚洲| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲一码二码三码区别大吗| 最近最新中文字幕大全电影3 | 天天影视国产精品| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 美女视频免费永久观看网站| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 在线观看免费视频网站a站| 国产欧美亚洲国产| 中国美女看黄片| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 人妻久久中文字幕网| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 午夜福利视频精品| 老司机在亚洲福利影院| 欧美精品亚洲一区二区| 国产精品亚洲一级av第二区| videos熟女内射| 国产精品二区激情视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 波多野结衣一区麻豆| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久人人97超碰香蕉20202| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲精品自拍成人| 久久这里只有精品19| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产欧美亚洲国产| 后天国语完整版免费观看| 黑人猛操日本美女一级片| 精品少妇久久久久久888优播| 在线 av 中文字幕| 美女视频免费永久观看网站| 欧美黑人精品巨大| 久久久久精品人妻al黑| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲天堂av无毛| 日本wwww免费看| 欧美中文综合在线视频| 超碰成人久久| 午夜免费成人在线视频| 露出奶头的视频| 香蕉国产在线看| 欧美大码av| 午夜福利影视在线免费观看| 午夜精品国产一区二区电影| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 人成视频在线观看免费观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久青草综合色| 欧美精品高潮呻吟av久久| 黄片大片在线免费观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产一卡二卡三卡精品| 国产区一区二久久| 动漫黄色视频在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲五月婷婷丁香| 日韩中文字幕视频在线看片| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲av日韩在线播放| 69精品国产乱码久久久| 精品欧美一区二区三区在线| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久精品国产综合久久久| 十八禁高潮呻吟视频| 视频区欧美日本亚洲| 黄片大片在线免费观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲午夜理论影院| 亚洲精品在线美女| 亚洲,欧美精品.| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 久热爱精品视频在线9| 另类亚洲欧美激情| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 免费观看av网站的网址| 中文字幕av电影在线播放| 男女无遮挡免费网站观看| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲中文av在线| 女警被强在线播放| 久久久久久久久免费视频了| 岛国在线观看网站| 涩涩av久久男人的天堂| 女人久久www免费人成看片| 亚洲熟女精品中文字幕| 色视频在线一区二区三区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| av天堂在线播放| 天堂动漫精品| 国产av又大| 黄色怎么调成土黄色| 女性被躁到高潮视频| 色在线成人网| 满18在线观看网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| av欧美777| 国产一区二区在线观看av| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产精品av久久久久免费| 精品一区二区三区av网在线观看 | 中文欧美无线码| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产精品 欧美亚洲| 少妇粗大呻吟视频| 视频区欧美日本亚洲| 中文字幕人妻熟女乱码| 黄色丝袜av网址大全| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 丝袜喷水一区| 国产在线视频一区二区| 交换朋友夫妻互换小说| 中文字幕色久视频| 午夜91福利影院| 妹子高潮喷水视频| h视频一区二区三区| 久久人妻熟女aⅴ| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产99久久九九免费精品| 黄色 视频免费看| 亚洲人成77777在线视频| 国产一区二区在线观看av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精品 国内视频| 一本久久精品| 免费高清在线观看日韩| 国产亚洲欧美精品永久| 我要看黄色一级片免费的| 日韩欧美国产一区二区入口| 露出奶头的视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 日韩欧美国产一区二区入口| 日本一区二区免费在线视频| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲av第一区精品v没综合| 夫妻午夜视频| 国产精品1区2区在线观看. | 一区二区三区乱码不卡18| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久久精品94久久精品| 麻豆乱淫一区二区| 国产伦理片在线播放av一区| 99热国产这里只有精品6| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲黑人精品在线| 亚洲专区字幕在线| 久久久欧美国产精品| 99热国产这里只有精品6| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 午夜免费成人在线视频| 国产精品av久久久久免费| 国产精品免费大片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 精品久久久久久电影网| 99久久人妻综合| 99精品久久久久人妻精品| 国产亚洲一区二区精品| 久久性视频一级片| 国产亚洲一区二区精品| 国产色视频综合| 亚洲精品成人av观看孕妇| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产午夜精品久久久久久| 精品第一国产精品| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久热在线av| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久久精品94久久精品| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲成国产人片在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 脱女人内裤的视频| 免费在线观看影片大全网站| 99在线人妻在线中文字幕 | 黄色视频,在线免费观看| 日本vs欧美在线观看视频| 成年人午夜在线观看视频| www.999成人在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产精品熟女久久久久浪| 考比视频在线观看| tocl精华| 精品少妇内射三级| 久久精品国产a三级三级三级| 日本av免费视频播放| 国产亚洲av高清不卡| 欧美在线一区亚洲| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 天天操日日干夜夜撸| 欧美精品一区二区免费开放| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久久视频综合| 欧美人与性动交α欧美软件| 日韩视频在线欧美| 国产黄色免费在线视频| 怎么达到女性高潮| 国产男靠女视频免费网站| 交换朋友夫妻互换小说| 夫妻午夜视频| 动漫黄色视频在线观看| 99国产综合亚洲精品| 正在播放国产对白刺激| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久人妻熟女aⅴ| 窝窝影院91人妻| 精品人妻在线不人妻| 人人妻人人澡人人看| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产午夜精品久久久久久| 91麻豆av在线| 在线观看www视频免费| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 人人妻人人澡人人看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲综合色网址| 黄色 视频免费看| 后天国语完整版免费观看| 亚洲精品国产区一区二| 一区在线观看完整版| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 黄色视频在线播放观看不卡| 久久精品成人免费网站| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久热在线av| 中文字幕制服av| 丝袜美腿诱惑在线| 一级毛片电影观看| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲av电影在线进入| 成人18禁在线播放| 三上悠亚av全集在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 精品第一国产精品| 精品亚洲成国产av| 男女免费视频国产| 国产精品一区二区在线不卡| videos熟女内射| tocl精华| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产一区二区激情短视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 欧美成人免费av一区二区三区 | 高清视频免费观看一区二区| 一级毛片精品| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 极品教师在线免费播放| 欧美性长视频在线观看| 久久亚洲真实| 亚洲中文字幕日韩| av福利片在线| 亚洲美女黄片视频| 一级片'在线观看视频| avwww免费| 正在播放国产对白刺激| 欧美日本中文国产一区发布| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产有黄有色有爽视频| 精品福利观看| 成年人黄色毛片网站| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产区一区二久久| 一区二区日韩欧美中文字幕| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 悠悠久久av| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产一区二区三区综合在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 高清黄色对白视频在线免费看| www.精华液| 国产高清视频在线播放一区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 后天国语完整版免费观看| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 两个人免费观看高清视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 精品乱码久久久久久99久播| 色尼玛亚洲综合影院| 日韩免费av在线播放| 天天操日日干夜夜撸| 一本大道久久a久久精品| 波多野结衣av一区二区av| 欧美日韩一级在线毛片| 一区二区三区激情视频| 国产福利在线免费观看视频| av国产精品久久久久影院| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产av又大| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲精品一二三| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品1区2区在线观看. | 免费不卡黄色视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 天天添夜夜摸| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 国产免费现黄频在线看| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久久久久久精品吃奶| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 两个人看的免费小视频| 五月开心婷婷网| 美国免费a级毛片| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲熟女毛片儿| 最黄视频免费看| videos熟女内射| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲av成人一区二区三| 男女下面插进去视频免费观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 黄色片一级片一级黄色片| 波多野结衣av一区二区av| 午夜成年电影在线免费观看| 99国产精品免费福利视频| 午夜日韩欧美国产| 男女下面插进去视频免费观看| 成人特级黄色片久久久久久久 | 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 精品人妻1区二区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产精品免费一区二区三区在线 | 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 国产精品.久久久| 欧美人与性动交α欧美软件| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日韩大片免费观看网站| 国产不卡av网站在线观看| 国产精品电影一区二区三区 | 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 热99久久久久精品小说推荐| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 少妇 在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 91成人精品电影| 国产精品 欧美亚洲| 天堂动漫精品| 国产在视频线精品| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲 国产 在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产亚洲精品一区二区www | 久久久久久久久免费视频了| 极品教师在线免费播放| 黄色视频在线播放观看不卡| 久9热在线精品视频| 精品人妻1区二区| 在线播放国产精品三级| 女人久久www免费人成看片| 国产精品国产高清国产av | 精品国产乱子伦一区二区三区| 黑丝袜美女国产一区| 9热在线视频观看99| 一区在线观看完整版| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品一区二区三区av网在线观看 | 久久青草综合色| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲精品在线美女| 久久久久视频综合| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久免费观看电影| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产午夜精品久久久久久| 欧美激情久久久久久爽电影 | 精品一区二区三卡| 一级毛片女人18水好多| 日本a在线网址| 动漫黄色视频在线观看| 日韩大片免费观看网站| 国产精品二区激情视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲五月婷婷丁香| 免费黄频网站在线观看国产| 最新美女视频免费是黄的| 午夜福利在线免费观看网站| 一级黄色大片毛片| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 咕卡用的链子| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 超碰97精品在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 中文字幕精品免费在线观看视频| 香蕉国产在线看| tube8黄色片| 亚洲精品久久午夜乱码| 交换朋友夫妻互换小说| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲欧洲日产国产| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲五月色婷婷综合| 夜夜夜夜夜久久久久| 日韩欧美三级三区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久小说| 人妻 亚洲 视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲精品自拍成人| 日本五十路高清| 国产一区二区 视频在线| 精品国产乱码久久久久久男人| 精品国产亚洲在线| 中文字幕色久视频| 啦啦啦 在线观看视频| 午夜激情av网站| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国精品久久久久久国模美| 久久免费观看电影| 丁香六月天网| 午夜免费鲁丝| 国产成人精品久久二区二区91| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久ye,这里只有精品| 香蕉丝袜av| 国产成人欧美| 免费av中文字幕在线| 亚洲九九香蕉| 不卡一级毛片| 多毛熟女@视频| 老司机影院毛片| 不卡一级毛片| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲av电影在线进入| 久久久久久免费高清国产稀缺| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 日韩免费高清中文字幕av| 国产av又大| 国产av一区二区精品久久| netflix在线观看网站| 91国产中文字幕| 国产不卡一卡二| 亚洲欧美一区二区三区久久| 两性夫妻黄色片| 久久狼人影院| 午夜日韩欧美国产| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲国产欧美网| 久久午夜亚洲精品久久|