QuEChERS—GC—ECD快速測(cè)定葡萄和土壤中苯醚甲環(huán)唑殘留

羅雪婷　吳迪　潘洪吉　張希躍　矯健

摘要[目的]對(duì)苯醚甲環(huán)唑在葡萄和土壤中的殘留分析方法進(jìn)行探討并測(cè)定其殘留消解動(dòng)態(tài)。[方法]采用乙腈提取、基質(zhì)固相分散凈化后，GCμECD外標(biāo)法定量。[結(jié)果]在葡萄和土壤樣品中添加0.01～2.00 mg/L苯醚甲環(huán)唑，葡萄的平均回收率為88.5%～107.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.2%～6.8%；土壤的平均回收率為85.9%～115.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～7.3%；苯醚甲環(huán)唑在葡萄中的消解動(dòng)態(tài)方程為y=1.165e-0.11x，在土壤中的消解動(dòng)態(tài)方程為y=0.172e-0.04x，其在葡萄中半衰期為6.3 d，在土壤中半衰期為17.3 d。[結(jié)論]該方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度高，前處理簡(jiǎn)單，儀器耗材普遍易得，能夠?yàn)榇笠?guī)模監(jiān)測(cè)苯醚甲環(huán)唑的殘留情況提供參考。

關(guān)鍵詞 苯醚甲環(huán)唑；殘留；葡萄；土壤；消解動(dòng)態(tài)

中圖分類號(hào) S481+.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2016）05-083-03

Abstract[Objective]To discuss the residue analysis methods of difenoconazole in grapes and soils， and to detect the residue degradation dynamics.[Method]Detection was carried out by acetonitrile method， quantitative external standard method， and matrix solidphase dispersion after purification.[Result]When adding 0.01-2.00 mg/L difenoconazole in blank grape and soil sample， the average recovery rate of grape was 88.5%-107% with 4.2%-6.8% relative standard deviation； the average recovery rate of soil was 85.9%-115.9% with 1.7%-7.3% relative standard deviation. Digestion dynamic equation of difenoconazole in grape was y=1.165 e-0.11x， that in soil was y=0.172 e-0.04 x. The halflife periods in grape and soil were 6.3 and 17.3 d， respectively.[Conclusion]This method has high sensitivity， accuracy and precision with simple pretreatment and widely available instruments， which provides references for the largescale monitoring of difenoconazole residue.

Key words Difenoconazole； Residue； Grape； Soil； Degradation dynamics

苯醚甲環(huán)唑（Difenoconazole）又名惡醚唑，通用名“世高”，是一種三唑類廣譜殺菌劑，能夠有效防治黑星病、黑痘病、白腐病、斑點(diǎn)落葉病、白粉病、褐斑病、銹病、條銹病、赤霉病等，廣泛應(yīng)用于果樹、蔬菜等作物，在國(guó)內(nèi)登記使用在番茄、芹菜、荔枝、葡萄樹、蘋果樹、洋蔥、大蒜、石榴、柑橘樹、大白菜、茶樹、蘆筍、西瓜、菜豆、黃瓜、辣椒、葡萄、水稻、小麥、大豆、玉米、花生、煙草、薔薇科觀賞花卉等多種作物上。

2014年CAC規(guī)定葡萄中苯醚甲環(huán)唑的MRL值為3 mg/kg[1]。我國(guó)已制定了柑橘、蘋果等16種水果上的苯醚甲環(huán)唑最大殘留限量值[2]（MRL值），但對(duì)于苯醚甲環(huán)唑在葡萄上的MRL值尚未制定。開展葡萄中苯醚甲環(huán)唑殘留的探討，不僅可應(yīng)用于田間用藥指導(dǎo)、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)，還將為殘留限量的制定累積數(shù)據(jù)。

目前，國(guó)內(nèi)苯醚甲環(huán)唑的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法主要分為兩大類：一類為前處理方法相對(duì)較繁瑣，其使用儀器為氣相色譜儀、液相色譜儀[3-7]；第二類所使用儀器為液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀[8-11]，對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備配置和人員技術(shù)水平要求較高。另外國(guó)外也有苯醚甲環(huán)唑殘留檢測(cè)方面的報(bào)道，相對(duì)處理方法也較繁瑣[11-14]。筆者采用改良的QuEChERS[15]方法進(jìn)行樣品前處理，氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器進(jìn)行分析，以期為大規(guī)模監(jiān)測(cè)苯醚甲環(huán)唑的殘留情況提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 供試材料為葡萄（巨峰）。

1.2 試劑、儀器與耗材 30%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑（上?；莨饣瘜W(xué)有限公司）；苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品（99%，美國(guó)Chemservice公司），甲苯（色譜純，迪馬公司），PSA （乙二胺基N丙基，迪馬公司）。

氣相色譜儀：安捷倫6890μECD ， 旋渦混合器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司），超聲波清洗機(jī)（北京市天海雙龍醫(yī)療設(shè)備有限責(zé)任公司），離心機(jī)（長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司），0.22 μm有機(jī)系濾膜（北化黎明）。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理——改進(jìn)的QuEChERS方法。①葡萄。稱取5.0 g葡萄樣品，加5 mL甲苯，渦旋2 min，于超聲波發(fā)生器中超聲30 min。以5 000 r/min離心5 min。取3 mL上清液于10 mL 離心管中， 加入200 mg PSA， 渦旋2 min，以8 000 r/min離心5 min后取上清液過0. 22 μm 濾膜。待氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)。②土壤處理同葡萄樣品處理。

1.3.2 儀器條件。

色譜柱：HP5 30.00 m×0.25 mm×0.25 μm；進(jìn)樣口溫度：230 ℃；柱溫：初始柱溫150 ℃，保持3 min，以20 ℃/min的速率升溫至240 ℃，保持2 min，再以5 ℃/min的速率升溫至260 ℃，保持10 min，然后，以25 ℃/min的速率升溫至280 ℃，保持4 min；檢測(cè)器溫度：300 ℃；柱流量：1.5 mL/ min；進(jìn)樣量：1 μL；保留時(shí)間：22.494 min。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線。

準(zhǔn)確稱取99%苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品10.10 mg，用甲苯溶解至10 mL，得到1 000 mg/L的甲苯母液。逐級(jí)稀釋，用0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500、1.000、2.000、5.000 mg/L苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)

1.4.1 30%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑在葡萄中的消解動(dòng)態(tài)。

選取葡萄園內(nèi)有代表性的地塊，設(shè)3個(gè)重復(fù)試驗(yàn)小區(qū)，每小區(qū)面積20 m2， 施藥時(shí)期為葡萄生長(zhǎng)至成熟個(gè)體50%大小時(shí)施藥，施藥時(shí)應(yīng)保證用于動(dòng)態(tài)試驗(yàn)的葡萄均勻著藥。施藥劑量為制劑量450 mg/kg （667倍液）處理，施藥后2 h、1、3、5、7、14、21、30、45 d取樣。

隨機(jī)在試驗(yàn)小區(qū)內(nèi)6～12個(gè)采樣點(diǎn)采集6～8串（不少于1 kg）生長(zhǎng)正常、無病害、半成熟或成熟的果實(shí)，采集部位遍及上中下部，去梗，混勻后縮分，留250 g樣品2份，分別裝入封口樣品容器中，于-20 ℃冰箱保存?zhèn)錅y(cè)定。小區(qū)邊行和每行距離兩端0.5 m內(nèi)不采樣。

1.4.2 30%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑在土壤中的消解動(dòng)態(tài)。

選取果園無植被土地20 m2，單獨(dú)施藥，施藥濃度為高劑量制劑量450 mg/kg （667倍液），施藥后2 h、1、3、5、7、14、21、30、45 d取樣。隨機(jī)取點(diǎn)5～10個(gè)，用土鉆采集0～10 cm土層的土壤1～2 kg，除去土壤中的碎石、雜草和植物根莖等雜物，混勻后采用四分法留樣300 g，裝入封口樣品容器中，粘好標(biāo)簽，貯存于-20 ℃冰箱中保存。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 以y軸為苯醚甲環(huán)唑峰面積，x軸為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，苯醚甲環(huán)唑在0.005～5.000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=7 876x+406.4，相關(guān)系數(shù)r=0.999；表明在試驗(yàn)條件下儀器響應(yīng)信號(hào)與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.2 靈敏度、準(zhǔn)確度和精確度

該方法對(duì)苯醚甲環(huán)唑的最低檢出量為5.0×10-12g，在葡萄和土壤中的最低檢出濃度為0.010 mg/kg。分別在葡萄和土壤樣品中添加0.01～2.00 mg/L苯醚甲環(huán)唑，葡萄的平均回收率為88.5%～107.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.2%～6.8%（表1），土壤的平均回收率為85.9%～115.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～7.3%（表2），添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均符合農(nóng)殘?jiān)囼?yàn)要求。

2.3 方法凈化效果 通過該方法處理的葡萄、土壤空白樣品和添加樣品，在分析過程中排除了雜質(zhì)干擾，說明該方法具有良好的凈化效果（圖2）。

2.4 殘留消解動(dòng)態(tài)

從表3和4可以看出，苯醚甲環(huán)唑消解動(dòng)態(tài)趨勢(shì)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)模式，苯醚甲環(huán)唑在葡萄中的消解動(dòng)態(tài)方程為y=1.65e-0.11x，在土壤中的消解動(dòng)態(tài)方程為y=0.172e-0.04x；葡萄中苯醚甲環(huán)唑半衰期為6.3 d，土壤中苯醚甲環(huán)唑半衰期為17.3 d。從圖2和3可以看出，苯醚甲環(huán)唑在葡萄中的消解前期相對(duì)較快。在確保苯醚甲環(huán)唑得到安全使用的前提下，參照其他國(guó)家已有的MRL值和安全間隔期，建議30%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑防治葡萄白腐病，制劑用量48～75 mg/kg（4 000～6 000倍液），噴霧施藥3～4次，施藥間隔10～15 d，推薦的安全間隔期為7 d，推薦MRL值為0.5 mg/kg。

3 結(jié)論與討論

該試驗(yàn)以傳統(tǒng)的QuEChERS前處理法為基礎(chǔ)，用甲苯替代乙腈作為提取液，一方面，甲苯極微溶于水，提取液中的含水量很少，易于除水；另一方面，甲苯極性較弱，相對(duì)提取的色素、糖類較少，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)QuEChERS方法除雜不徹底的缺陷；第三方面，該試驗(yàn)采用渦旋和超聲的提取方法，減少了人員誤差的同時(shí)，使前處理可以批量進(jìn)行，節(jié)約了人力資源，提高了檢測(cè)效率；第四方面，使用試劑量少，節(jié)約成本，減少了環(huán)境污染；第五方面，該方法采用的儀器、材料方便易得，適用于在各級(jí)檢測(cè)單位推廣使用；第六方面，該方法在葡萄和土壤中的最低檢出濃度為0.010 mg/kg。在0.005～5.000 mg/L范圍內(nèi)，峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度呈良好的線性關(guān)系。表明該方法檢測(cè)靈敏度、精確度較高，滿足生產(chǎn)實(shí)際中的檢測(cè)要求。

另外，目前我國(guó)尚未制定苯醚甲環(huán)唑在葡萄中的最大殘留限量值，CAC（食品法典委員會(huì)）2014年規(guī)定葡萄中苯醚甲環(huán)唑最大殘留限量值（MRL值）為3 mg/kg，日本規(guī)定在葡萄中MRL值為0.5 mg/kg，歐盟規(guī)定在葡萄中MRL值為0.5 mg/kg。通過對(duì)其殘留消解動(dòng)態(tài)的研究，結(jié)合已經(jīng)制定最大殘留限量值的國(guó)家和地區(qū)，建議苯醚甲環(huán)唑在葡萄上的MRL值為0.5 mg/kg。

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