基于NMR的免疫抑制小鼠模型血清代謝組學研究

斯皮熱古麗·阿布都卡地，阿里木·帕塔爾，古孜力克孜·阿布都克熱木

(新疆醫(yī)科大學 1.公共衛(wèi)生學院、2.中心實驗室，新疆 烏魯木齊　830011)

?

基于NMR的免疫抑制小鼠模型血清代謝組學研究

斯皮熱古麗·阿布都卡地1，阿里木·帕塔爾2，古孜力克孜·阿布都克熱木1

(新疆醫(yī)科大學 1.公共衛(wèi)生學院、2.中心實驗室，新疆 烏魯木齊830011)

摘要:目的采用核磁共振氫譜(1H-NMR)代謝組學技術(shù)分析免疫抑制小鼠血清代謝物變化特點。方法將20只KM小鼠隨機分為正常組和模型組，模型組用環(huán)磷酰胺建立免疫抑制模型，對其血清進行1H-NMR檢測，采用正交偏最小二乘判別法(OPLS-DA)對NMR圖譜進行分析，并確定兩組小鼠血清差異性代謝物。結(jié)果與正常組小鼠比較，模型組小鼠血清谷氨酰胺、糖蛋白、不飽和脂類、VLDL、LDL、丙酮含量減少，亮氨酸、丙氨酸、酪氨酸、組氨酸、乳酸、甘氨酸、肌酸、蛋氨酸、纈氨酸、β-羥丁酸和肉堿含量增多。結(jié)論免疫抑制小鼠體內(nèi)存在代謝網(wǎng)絡(luò)的失調(diào)，具體表現(xiàn)為脂肪酸β-氧化、糖酵解和蛋白質(zhì)分解過程加劇，脂肪動員被抑制。

關(guān)鍵詞:環(huán)磷酰胺；免疫抑制；特異性代謝物；代謝組學；小鼠；氫譜核磁共振

已有資料顯示，許多疾病的發(fā)生發(fā)展與機體的免疫功能紊亂有關(guān)，免疫功能的失調(diào)往往導致機體各種組織器官的損傷[1]。目前，在免疫學研究領(lǐng)域上，常用環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)復制免疫抑制動物模型，評價一些中西醫(yī)藥物對免疫功能紊亂性疾病的療效，但是Cy導致免疫抑制的物質(zhì)基礎(chǔ)及全身代謝變化特點還不清楚。代謝組學(metabonomic)是研究生物體內(nèi)源性某些特殊意義的代謝產(chǎn)物的質(zhì)和量的變化規(guī)律，從微觀角度區(qū)分不同的代謝狀態(tài)，并根據(jù)不同的代謝表型區(qū)分出不同的內(nèi)外因素對機體的作用方式，反映機體內(nèi)生理和病理變化過程[2-3]。因此，本實驗采用1H核磁共振代謝組學技術(shù)，觀察Cy誘導的免疫抑制小鼠血清中特異性代謝物，從代謝水平探討該模型的形成機制，期望能為以后的臨床診斷和療效評價提供新的實驗依據(jù)。

1材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1動物6周齡SPF級♂昆明小鼠20只，平均體質(zhì)量為(20±2)g，購自新疆醫(yī)科大學動物實驗中心，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(新)2011-0004，實驗動物實施許可證號：SYXK(新)2011-0001。

1.1.2儀器設(shè)備Inova600 MHz 超導核磁共振波譜儀(美國瓦里安公司)；流式細胞儀(美國Beckman Coulter公司)；低溫離心機(德國Eppendorf公司)；電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)。

1.1.3藥物與試劑Cy購自Sigma公司；重水(Deuterium oxide)購自北京百靈威科技有限公司；氯化鈉分析純(NaCl)購自天津永晟精細化工有限公司；磷酸氫二鉀(K2HPO4·3H2O)和磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O)購自天津市福晨化學試劑廠；抗小鼠CD4(FITC標記)、CD8(PE/cy5標記)的熒光抗體，購自Biolegend公司；紅細胞裂解液購自Beckman Coulter公司；磷酸鹽緩沖液(PBS緩沖液)購自賽默飛世爾生物化學制品(北京)有限公司。

1.2方法

1.2.1分組與造模將20只♂ KM小鼠，隨機分成正常組和模型組，各組10只。動物模型的建立參照文獻[4]，以小劑量多次給藥方式進行，即正常組腹腔注射生理鹽水，模型組將Cy以50 mg·kg-1的量連續(xù)腹腔注射7 d造模，造模成功后，以40 mg·kg-1的量每5 d腹腔注射1次維持免疫低下模型，并連續(xù)到30 d。

1.2.2確認造模成功

1.2.2.1T細胞亞群(CD4+T、CD8+T、CD4/CD8)的測定[5]采眼靜脈血至EDTA抗凝管中，并取100 μL抗凝血，分別加0.5 μL和1.25 μL的CD4、CD8熒光抗體，室溫孵育30 min后，加0.5 mL紅細胞裂解液作用5～10 min，血液變透明后加1 mL PBS溶液離心(1 000 r·min-1，5 min)，棄上清，再加0.5 mL PBS溶液重懸細胞后上流式細胞儀檢測。

1.2.3代謝組學檢測及分析[6]

1.2.3.1至樣品的采集與處理小鼠空腹12 h后，采眼靜脈血至離心管中，并以3 000 r·min-1的速度離心10 min分離血清，取200 μL血清，混于400 μL 的磷酸緩沖液(用重水將0.9 g的NaCl、0.8298 g的K2HPO4、0.1418 g的NaH2PO4配成100 mL，pH值為7.4)，室溫放置10 min后，低溫離心機4℃，10 000 r·min-1的速度離心10 min，取550 μL上清液加入到5 mm核磁管中。

1.2.3.2血清1H-NMR譜圖測定將Inova 600型核磁共振波譜儀調(diào)用弛豫編輯脈沖序列(Carr-Purcell-Meiboom-Gill,CPMG脈沖序列)(relaxation delay-90°-t1-90°-tm-90°-ACQ)進行測定。測定條件與參考文獻推薦的步驟[6]一致，采用預飽和方式抑制水峰。選出在一維譜中質(zhì)量較好的樣品進行二維譜測試，指認譜網(wǎng)中各種峰。

1.2.3.3氫譜數(shù)據(jù)分析和代謝標志物鑒定采用線寬為0.3Hz的指數(shù)窗函數(shù)，對血清1H-NMR圖譜進行傅里葉變換后，用Topspin2.0軟件進行基線校正，并以a-D葡萄糖5.233 ppm的質(zhì)子信號為標準定標。對CPMG數(shù)據(jù)將范圍為δH=9.0～0.5 ppm區(qū)域的所有圖譜以每0.003 ppm段設(shè)為一個積分段進行自動積分，并刪掉在5.21～4.68 ppm范圍內(nèi)的水峰區(qū)域。將剩余積分值進行歸一化處理之后，用SIMCA-P+11軟件進行正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA分析)，并通過自動規(guī)格化處理(UV)進行模式質(zhì)量評價，具體用R2X、R2Y、Q2等指標進行質(zhì)量評價，其中R2X表示X的變異百分比，R2Y表示Y的變異百分比，Q2表示累計預測結(jié)果的真實性，即Q2>0.4時認為預測結(jié)果可接受，Q2>0.9時預測結(jié)果更可靠。根據(jù)最小樣本量(本次實驗中由于模型組中3只小鼠死亡，最小樣本量定為7只)將OPLS-DA分析所得相關(guān)系數(shù)|r|值的顯著性閾值定為0.707，如|r|>0.707可視為該代謝物在兩組間差異有顯著性(P<0.05)，|r|越接近于l表示其差異性越大，反之越小，相關(guān)系數(shù)的正值或負值表示代謝物的增多或減少趨勢。

2結(jié)果

2.1兩組小鼠T細胞亞群的比較

Tab 1結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組小鼠CD4+T細胞百分率和CD4/CD8比值明顯降低(P<0.05)，提示造模成功。

GroupCD4+T/%CD8+T/%CD4/CD8Control38.44±3.718.59±1.414.57±0.81Model25.44±3.939.71±2.112.73±0.68t7.6051.3995.511P0.0000.1790.000

2.2兩組小鼠血清1H-NMR譜的OPLS-DA分析結(jié)果

從OPLS-DA分析得到的平面分布圖和3D空間分布圖可見，所有樣本均分布在95%的置信區(qū)間內(nèi)，兩組分布區(qū)域完全分開，而且該分析模型具有很好的可解釋性(R2X=0.375，R2Y=0.921)及可預測性(Q2=0.616)，因此認為兩組的血清代謝物有一定差異性(Fig 1)。根據(jù)OPLS-DA分析所得的相關(guān)系數(shù)，確定兩組小鼠血清差異性代謝成分的化學位移與差異程度，即與正常組比較，有差異代謝物的相關(guān)系數(shù)正值表示該代謝物在模型組小鼠血清中為升高的代謝物，反之亦然。從Tab 2可看出，與正常組比較，模型組小鼠血清中亮氨酸、酪氨酸、組氨酸、乳酸、甘氨酸、肌酸、蛋氨酸、纈氨酸、β-羥丁酸、肉堿、色氨酸等代謝物含量增多，糖蛋白、不飽和脂類、丙酮、VLDL、LDL、谷氨酰胺含量減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3討論

環(huán)磷酰胺是臨床上常用的治療惡性腫瘤的一種烷化劑，其通過與DNA非特異性的結(jié)合，使DNA變形、失活，表現(xiàn)出非特異性細胞毒性作用，特別是對骨髓造血組織、淋巴組織等增殖分化較快組織的細胞毒性作用較大，能通過影響DNA合成進而抑制RNA和蛋白質(zhì)合成，此外，還具有很強的肝腎毒性[7]。本次實驗中免疫抑制模型小鼠體內(nèi)谷氨酰胺、糖蛋白、不飽和脂類、VLDL、LDL、丙酮、亮氨酸、丙氨酸、酪氨酸、組氨酸、乳酸、甘氨酸、肌酸、蛋氨酸、纈氨酸、β-羥丁酸和肉堿等17種代謝物均發(fā)生變化，而這些代謝物的改變一定程度上反映了Cy在小鼠體內(nèi)誘發(fā)的一系列病理變化過程。

Fig 1　OPLS-DA score plot(A) and 3D plot (B) derived from1H-NMR spectra of serum in normal group(■) and Cy model group(●)

Tab 2　Main differences of serous metabolites and their correlation coefficient in two groups of mice

S:singlet; d:doublet; dd:doublet of doublets; m:multiplet; q:quartet

谷氨酰胺是體內(nèi)許多組織合成的非必需氨基酸，其具有減少組織、器官的自由基損傷，提高機體的抗氧化能力和保護腸道黏膜的作用[8]。因此，體內(nèi)谷氨酰胺含量的下降能加劇機體的氧化損傷和免疫力的進行性下降。糖蛋白參與細胞識別功能的同時，也是細胞造血等機體生理功能中必不可少的蛋白質(zhì)，具有保護上皮細胞的完整性、增加淋巴細胞數(shù)和增強免疫力的功能[9]。糖蛋白的下降表示上皮細胞受到損傷?？偟膩碇v，血清中谷氨酰胺、糖蛋白含量的下降是細胞膜受到損傷，機體自由基損傷加重，免疫力下降的預示。本實驗中模型組小鼠血清谷氨酰胺和糖蛋白含量降低，明確顯示出Cy的免疫抑制作用。另外，模型組小鼠血清中亮氨酸、酪氨酸、組氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、纈氨酸、色氨酸和丙氨酸含量增多，提示這些氨基酸是在機體免疫力降低等高分解狀態(tài)下形成量增多[10]，表明Cy引起的細胞損傷加速了蛋白質(zhì)的分解而抑制了蛋白質(zhì)的合成。

β-羥丁酸和丙酮是脂肪酸在肝細胞線粒體內(nèi)β-氧化所產(chǎn)生的中間物，肉堿是脂肪酸β-氧化過程中將活化的脂酰CoA從細胞液轉(zhuǎn)入到線粒體必不可少的轉(zhuǎn)運體[11-12]。丙酮可在一系列酶的催化下轉(zhuǎn)變?yōu)楸峄蛉樗?，也可隨尿排出或經(jīng)肺呼出體外，而β-羥丁酸是酸性物質(zhì)，其含量的增多能導致酮癥酸中毒。因此，β-羥丁酸和肉堿含量的升高可預示體內(nèi)脂肪酸β-氧化過程的加劇。本實驗中模型組小鼠血清中β-羥丁酸、肉堿含量升高，丙酮含量減少，可認為免疫抑制小鼠體內(nèi)脂肪酸β-氧化過程加劇。血清中的不飽和脂類、VLDL、LDL是脂肪分解的產(chǎn)物，其中VLDL是在肝細胞中生成，LDL是在血漿內(nèi)由VLDL轉(zhuǎn)變而產(chǎn)生[13]。分析血清中不飽和脂類、VLDL、LDL含量的降低可能是由于以下原因引起：① 體內(nèi)載脂蛋白質(zhì)合成減少，使肝細胞合成的三酰甘油不能及時釋放出血液內(nèi)；② 小鼠對脂類化合物利用率的下降；③ 肌酸具有降低膽固醇、極低密度脂蛋白和甘油三酯的作用[14]，因此肌酸含量的增多與VLDL和LDL含量的下降有關(guān)；④ 脂肪酸β-氧化過程的加劇使VLDL、LDL合成原料減少[15]。而體內(nèi)不飽和脂類、VLDL、LDL水平是反映機體脂肪動員水平的重要指標，因此模型組小鼠血清中不飽和脂類、VLDL、LDL含量的下降提示免疫抑制小鼠體內(nèi)脂肪動員的抑制。

乳酸是糖酵解過程的終產(chǎn)物，在炎癥、吞噬細胞侵入、嚴重貧血、呼吸障礙、循環(huán)障礙、腎或肝等組織局部損傷或缺氧時，由于血管明顯擴張，血管內(nèi)皮受損，大量的液體從血管內(nèi)滲出到組織間隙，產(chǎn)生局部供血不足和缺氧，導致機體糖酵解加速[16-17]。本次實驗中模型組小鼠體內(nèi)乳酸含量增多，可能是由于Cy骨髓抑制作用所誘發(fā)的貧血和肝腎組織損傷而引起的。當然，脂肪酸β-氧化產(chǎn)物丙酮含量降低也對乳酸含量增多有一定影響。另外，脂肪、糖類和氨基酸均是通過各種反應參與能量代謝，本實驗中脂肪酸β-氧化和糖酵解過程的加劇[15]、脂肪動員的抑制[18]可能預示免疫抑制小鼠體內(nèi)能量產(chǎn)生不足，導致動物機體長時間處于耗能狀態(tài)，這可能是Cy免疫抑制小鼠形體消瘦、懶怠的原因之一。

綜上，Cy引起免疫抑制的病理機制涉及到機體的氨基酸代謝、脂肪代謝、糖代謝和能量代謝的紊亂，表現(xiàn)出整體機能的平衡失調(diào)，使機體處于免疫功能紊亂的狀態(tài)。

(致謝：本次實驗在新疆醫(yī)科大學動物實驗中心和新疆醫(yī)科大學核磁共振實驗室完成，在此特別感謝支持經(jīng)濟和學術(shù)指導方面的阿里木·帕塔爾教授，動物實驗中心的王忠老師和核磁共振實驗室的巴吐爾·買買提明老師。)

參考文獻:

[1]許洲斌.玉屏風散對免疫抑制小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA3表達及免疫調(diào)節(jié)作用的研究[D].廣州：廣州醫(yī)學院,2013.

[1]Xu Z B. Effects of Yupingfeng powder on transcription factor T-bet,GATA3 of immunosuppressive mice and immunoregulation[D].Guangzhou: Guangzhou Medical College, 2013.

[2]He W,Sung S Y,Jinho K,et al.A new NMR-based metabelomics approach for the diagnosis of biliary tract cancer[J].JHepatol,2010,52(2):228-33.

[3]盧偉,馬曉麗,蘭怡,等.兩色金雞菊醇提物對自發(fā)性高血壓大鼠尿液的代謝組學研究[J].中國藥理學通報,2014,30(9):1311-5.

[3] Lu W, Ma X L,Lan Y, et al. Effect of alcohol extract fromCoreopsistinctoriaNutt. on spontaneous hypertension rats by metabolomic methods[J].ChinPharmacolBull, 2014, 30(9):1311-5.

[4]汪禎.千佛菌對環(huán)磷酰胺模型小鼠Th1、Th2類細胞因子表達的調(diào)節(jié)作用[D].咸陽：陜西中醫(yī)學院,2011.

[4]Wang Z. To study the effect of Grifola frondosa on immunoregulation of cyclophosphamide model mice through regulating the gene expression between Th1 and Th2 cytokines[D]. Xianyang: Shanxi College of Traditional Chinese Medicine,2011.

[5]張武德,張李峰,程衛(wèi)東,等.比較用紅芪和用黃芪的經(jīng)典補益方對免疫抑制小鼠免疫功能的影響[J].北京中醫(yī)藥大學學報,2012,35(10):688-91.

[5]Zhang W D, Zhang L F, Cheng W D, et al. Influences of classic tonifying and replenishing formulas containing Hongqi (Radix Hedyseri) and Huangqi (Radix Astragali) on immune function in immunosuppressive mice[J].JBeijingUnivTraditChinMed,2012, 35(10):688-91.

[6]嚴興海,巴吐爾·買買提明,李春燕,等.基于核磁共振的腎虛痰瘀型哮喘患者血漿的代謝組學研究[J].新疆醫(yī)科大學學報,2010,33(3):228-33.

[6]Yan X H, Batur M, Li C Y, et al. Plasma metabonomics study on the asthma diagnosed as Shenxutanyu syndrome in traditional Chinese medicine with NMR[J].JXinjiangMedUniv,2010,33(3):228-33.

[7]張長城,姜美杰,趙海霞,等.竹節(jié)參總皂苷對環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠免疫功能的影響[J].中成藥,2011,33(7):1134-8.

[7]Zhang C C, Jiang M J, Zhao H X, et al. Effects of total saponins ofPanaxjaponicusRhizoma on cyclophosphamide-induced immunosuppressive mice[J].ChinTraditPatMed, 2011,33(7):1134-8.

[8]楊中良,楊秀云,李劍,等.基于1H NMR代謝組學研究豚鼠膽固醇膽石形成的特征性代謝物[J].中國中醫(yī)藥科技,2015,22(1):1-3.

[8]Yang Z L, Yang X Y, Li J, et al. Serum characteristic metabolites for formation of cholesterol cholocystolithiasis in Guinea pigs by1H NMR-based metabonomics[J].ChinJTraditMedSciTechnol, 2015,22(1):1-3.

[9]徐衛(wèi)方,哈木拉提·吾甫爾,李風森,等.基于代謝組學分析COPD腎虛痰瘀證與異常黑膽質(zhì)證共性特征[J].科技導報,2013,31(24):55-61.

[9]Xu W F, Upur H, Li F S, et al .Common characteristics of COPD of traditional Chinese medicine kidney depletion-phlegm-stasis syndrome and Uygur medicine abnormal savda syndrome based on metabonomics[J].SciTechnolRev, 2013,31(24):55-61.

[10]劉衛(wèi)紅,張琪,張蕾,等.三仁湯對大鼠高脂血癥模型血脂及代謝產(chǎn)物譜的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,31(1):52-7.

[10] Liu W H, Zhang Q, Zhang L, et al. Effects of Sanren decoction on plasma lipids and the metabolic profiles of hyperlipidemia rat model [J].ChinJIntegrTraditWestMed, 2011,31(1):52-7.

[11]劉梅森,林漢卿,李鐘,等.清伙靈對大鼠積滯化熱證干預作用的代謝組學研究[J].中國實驗方劑學雜志,2014,20(5):118-22.

[11] Liu M S, Lin H Q, Li Z, et al. Metabonomic study of intervention effects of Qinghuoling on stagnant heat syndrome in rats[J].ChinJExpTraditMedForm, 2014,20(5):118-22.

[12]Liang X P,Chen X,Liang Q L,et al.Metabonomic study of Chinese medicine shuanglong formula as all effective treatment for myocardial infarction in rats[J].ProteomeRes,2011,10(2):790-9.

[13]Tan G G,Liao W T,Dong X,et al.Metabonomic profiles delineate the effect of traditional Chinese medicine sini decoction on myocardial infarction rats[J].PLoSOne,2012,7(4):e34157.

[14]買吾拉尼江· 依孜布拉,巴吐爾· 買買提明,娜祖科· 庫爾班塔依,等.基于NMR 代謝組學方法研究異常黑膽質(zhì)成熟劑對異常黑膽質(zhì)型2型糖尿病大鼠的作用機制[J].新疆醫(yī)科大學學報,2013,36(4):411-8.

[14] Mawlanjan H, Batur M, Nazuk K, et al. NMR metabonomic study of abnormal savda munziq's mechanism of effect to the abnormal savda syndrome type 2 diabetes rats[J].JXinjiangMedUniv,2013,36(4):411-8.

[15]王勇,李中峰,陳建新,等.基于NOESY序列核磁共振技術(shù)冠心病血瘀證代謝組學的實驗研究心肌缺血[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,31(10):1364-8.

[15] Wang Y, Li Z F, Chen J X, et al. Experimental study on metabonomics of coronary heart disease myocardial ischemia of blood stasis syndrome based on the NOESY pulse NMR[J].ChinJIntegrTraditWestMed,2011,31(10):1364-8.

[16]江來,萬小健,卞金俊,等.重癥胰腺炎大鼠血液的核磁共振譜代謝組學研究[J].上海醫(yī)學,2009,32(11):999-1002.

[16] Jiang L, Wan X J, Bian J J, et al. Metabolism study on blood of rats with severe acute pancreatitis by1H nuclear magnetic resonance and pattern recognition[J].ShanghaiMedJ, 2009,32(11):999-1002.

[17]車文體,李麗萍,眭維國,等.腎移植前后患者血清中代謝物的動態(tài)研究[J].國際移植與血液凈化雜志,2012,10(5):12-8.

[17] Che W T, Li L P, Sui W G, et al. Dynamic study on metabolites in serum with patients before and after renal transplantation[J].IntJTransplantHemopurif, 2012,10(5):12-8.

[18]鄒忠杰,龔夢鵑,王淑美,等.雙黃連口服液抗炎作用的代謝組學研究[J].中成藥, 2013,35(1):15-9.

[18] Zou Z J, Gong M J, Wang S M, et al. Metabonomic assessment of Shuanghuanglian oral liquid on acute inflammation[J].ChinTraditPatMed,2013,35(1):15-9.

Metabolic analysis of immune suppression mice based on NMR

SIPIREGULI Abudoukadi1, ALIMU Pataer2, GUZILIKEZI Abudoukeremu1

(1.CollegeofPublicHealth, 2.CentralLaboratory,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract:AimTo analyze the characteristics of serum metabolites in immune suppression mice by using1H NMR-based metabonomics.MethodsTwenty male Kunming(KM) mice were randomly divided into two groups: normal group and cyclophosphamide(Cy) model group. Cy model group was given Cy to induce immune suppression. NMR technology was used to find out the variability of serum metabolites by the method of OPLS-DA.ResultsCompared with normal group, Cy model group showed a significant decrease in the serum levels of glutamine, glycolprotein, unsaturated lipid, VLDL, LDL, acetone and showed a significant increase in the serum levels of leucine, alanine, tyrosine, histidine, lactate, glycine, creatine, metheionine, valine, β-hydrocxy butyrate and carnitine.ConclusionsImmune suppression mice are imbalanced in metabolic network. These findings indicate that lipid metabolism-related metabolites are decreased, however, β-oxidation of fatty acid, proteolysis and glycolysis level are increased.

Key words:cyclophosphamide; immune suppression;characteristic metabolites; metabonomics;; mice;1H-nuclear magnetic resonance

收稿日期:2016-01-28,修回日期:2016-02-27

基金項目：國家自然科學基金資助項目(No 81360425)

作者簡介：斯皮熱古麗·阿布都卡地(1989-)，女，碩士生，研究方向：營養(yǎng)與健康，E-mail:416690633@qq.com;

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.06.022

文獻標志碼：A

文章編號：1001-1978(2016)06-0853-05

中國圖書分類號：R-332；R349.1；R363-332；R445.2；R446.11；R979.1

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-5-25 15:39網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160525.1539.044.html

阿里木·帕塔爾(1962-)，男，博士，教授， 研究方向：營養(yǎng)與健康,通訊作者,E-mail:alimpatar@sina.com