峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響

僧曉蘭，李英倫，施　飛，何曉利，葉　剛，趙　玲

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611130)

峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響

僧曉蘭，李英倫，施飛，何曉利，葉剛，趙玲

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611130)

[摘要]【目的】 研究峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響。【方法】 將96頭“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交斷奶仔豬隨機(jī)分為4組，每組24頭，分別飼喂基礎(chǔ)日糧、基礎(chǔ)日糧+硫酸粘桿菌素80 mg/kg、基礎(chǔ)日糧+峨眉雪膽微丸250 mg/kg、基礎(chǔ)日糧+峨眉雪膽微丸500 mg/kg的試驗(yàn)日糧，試驗(yàn)期為21 d，分別于飼喂后的第7，14和21天采集血樣和腸黏膜，測(cè)定斷奶仔豬的免疫功能指標(biāo)，研究峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響。【結(jié)果】 日糧中添加250 mg/kg峨眉雪膽微丸可促進(jìn)血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的生成，顯著提高補(bǔ)體C3、C4及免疫因子IL-6的質(zhì)量濃度(P<0.05)，并可在一定程度上降低炎性因子IL-1β的分泌，提高十二指腸、回腸、盲腸的免疫球蛋白A(SIgA)分泌，其中對(duì)十二指腸、盲腸SIgA的分泌有顯著促進(jìn)作用(P<0.05)?！窘Y(jié)論】 日糧中添加250 mg/kg峨眉雪膽微丸可增強(qiáng)斷奶仔豬的免疫功能。

[關(guān)鍵詞]斷奶仔豬；峨眉雪膽微丸；免疫功能；免疫球蛋白；黏膜免疫

Effects ofHemsleyaomeiensispellets on immune

function of weaned piglets

SENG Xiao-lan,LI Ying-lun,SHI Fei,HE Xiao-li,

現(xiàn)代養(yǎng)豬行業(yè)中，早期隔離斷奶技術(shù)[1]能夠改善仔豬生長(zhǎng)發(fā)育，提高養(yǎng)豬生產(chǎn)水平，但是會(huì)引發(fā)仔豬斷奶應(yīng)激綜合癥[2]，表現(xiàn)為腹瀉、生長(zhǎng)遲緩、消化不良、免疫力低下，出現(xiàn)僵豬，甚至死亡。長(zhǎng)期以來(lái)，人們主要依靠抗生素來(lái)控制仔豬斷奶引起的腹瀉，但抗生素會(huì)引起仔豬腸道微生物菌群失調(diào)和腸道發(fā)育受損[3-4]。已有研究表明，以中草藥提取物作為飼料添加劑，如中草藥復(fù)合多糖[5]、中草藥復(fù)方[6-7]等，可有效改善斷奶仔豬腸道微生物區(qū)系，促進(jìn)有益菌(乳酸桿菌)生長(zhǎng)，降低大腸桿菌數(shù)量，促進(jìn)腸道發(fā)育，從而有效降低腹瀉率，減少應(yīng)激反應(yīng)，提高仔豬的免疫力[8-9]。因而，在植物藥物中尋求能解決仔豬斷奶應(yīng)激綜合癥的飼料添加劑是比較熱門(mén)的研究課題。峨眉雪膽(HemsleyaomeiensisL.T.Shen et W.J.Chang)為葫蘆科雪膽屬植物，味苦，性寒，具有清熱解毒、健胃止痛、抗炎鎮(zhèn)咳、抗病毒[10-11]、抗腫瘤[12-14]等功效。雪膽塊根具有較高的應(yīng)用價(jià)值，在人醫(yī)上已有很多劑型[15]被廣泛應(yīng)用，但截至目前，將雪膽應(yīng)用于養(yǎng)豬生產(chǎn)的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。雪膽味極苦，直接在飼料中添加會(huì)影響飼料的適口性，若將其制備成微丸，則可以降低其對(duì)適口性的不利影響。本試驗(yàn)研究了峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響，以期為峨眉雪膽在養(yǎng)豬業(yè)中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1峨眉雪膽微丸1 g微丸含生藥峨眉雪膽1 g，由四川省川龍動(dòng)科藥業(yè)有限公司制備。

1.1.2試驗(yàn)動(dòng)物和日糧試驗(yàn)豬為“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交斷奶仔豬，由通威春源生態(tài)養(yǎng)殖公司提供。試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧參照NRC(1998)[16]豬營(yíng)養(yǎng)需要配制成粉料，日糧組成及其營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物處理與飼養(yǎng)管理選取96頭體質(zhì)量為(7.88±0.78) kg/頭的28日齡“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交斷奶仔豬，按性別、體質(zhì)量、窩源基本一致的原則隨機(jī)分為4組，每組24頭。其中第Ⅰ組為空白對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；第Ⅱ組為陽(yáng)性對(duì)照組(抗生素組),飼喂基礎(chǔ)日糧+硫酸粘桿菌素80 mg/kg的試驗(yàn)日糧；第Ⅲ、Ⅳ組為試驗(yàn)組，分別飼喂基礎(chǔ)日糧+峨眉雪膽微丸250 m g/kg、基礎(chǔ)日糧+峨眉雪膽微丸500 mg/kg的試驗(yàn)日糧。試驗(yàn)期為21 d。舍內(nèi)高床飼養(yǎng)，群飼，自由采食，自由飲水。日常管理和免疫程序按豬場(chǎng)常規(guī)方法進(jìn)行。

表 1　基礎(chǔ)日糧組成及其營(yíng)養(yǎng)水平

注：預(yù)混料向每kg日糧提供Cu 180 mg，F(xiàn)e 220 mg，Mn 55 mg，Zn 210 mg，I 0.3 mg，Se 0.3 mg，Co 0.3 mg，VA15 000 IU，VD33 700 IU，VE50 IU，VK4.5 mg，VB14 mg，VB212 mg，VB67.5 mg，VB1235 μg，生物素150 μg，泛酸35 mg，葉酸2.5 mg，煙酰胺50 mg，氯化膽堿550 mg。

Note:Per kilogram of diet provides：Cu 180 mg，F(xiàn)e 220 mg，Mn 55 mg，Zn 210 mg，I 0.3 mg，Se 0.3 mg，Co 0.3 mg，VA15 000 IU，VD33 700 IU，VE50 IU，VK4.5 mg，VB14 mg，VB212 mg，VB67.5 mg，VB1235 μg，Biotin 150 μg，Pantothenic acid 35 mg，F(xiàn)olic acid 2.5 mg，Nicotinamide 50 mg，Choline 550 mg.

1.2.2樣品采集與指標(biāo)測(cè)定分別在試驗(yàn)開(kāi)始后的第7，14和21天，從每組中隨機(jī)選取2頭接近平均體質(zhì)量、健康狀況較好的仔豬，空腹(當(dāng)日20：00停料)，次日前腔靜脈采血30 mL，分離血清，-20 ℃保存待測(cè)。將試豬宰殺，取十二指腸、空腸、回腸和盲腸中段50 cm，沿縱軸剪開(kāi)腸道，生理鹽水沖洗，用玻片刮下黏膜，并分裝保存于-70 ℃冰箱待測(cè)。

采用免疫比濁法測(cè)定血清免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)的質(zhì)量濃度，采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清補(bǔ)體(C3、C4)、細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6)和腸黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的質(zhì)量濃度。試驗(yàn)所用試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，具體操作步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.3數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS20.0軟件中的ANOVA模塊進(jìn)行單因素方差分析和Duncan’s多重比較。

2結(jié)果與分析

2.1峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬血清IgA、IgG、IgM的影響

由表2可知，Ⅲ組IgA含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，與Ⅱ組無(wú)顯著差異(P>0.05)；Ⅲ組IgA含量與Ⅳ組相比，在第7天無(wú)顯著差異，在第14和21天顯著降低(P<0.05)。Ⅲ組IgG含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；在第7和21天顯著高于Ⅱ組(P<0.05)，在第14天稍高于Ⅱ組；在第7天顯著高于Ⅳ組，在第21天顯著低于Ⅳ組。Ⅲ組IgM含量在第7天稍高于Ⅰ和Ⅱ組，在第14和21天顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組(P<0.05)，Ⅲ、Ⅳ組IgM含量隨用藥時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷升高。

表 2　峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬血清免疫球蛋白的影響

注：同行數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫(xiě)字母者表示差異顯著(P<0.05)。

Note：Data in each row with lowercase letters indicate significant difference (P<0.05).

2.2峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬血清補(bǔ)體C3、C4的影響

由表3可知，在飼喂不同日糧后的第7，14和21 d，各組仔豬血清補(bǔ)體C3、C4質(zhì)量濃度均表現(xiàn)為Ⅲ組>Ⅳ組>Ⅱ組>Ⅰ組，且Ⅲ組補(bǔ)體C3、C4質(zhì)量濃度顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組(P<0.05)。

表 3　峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬血清補(bǔ)體水平的影響

注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫(xiě)字母者表示差異顯著(P<0.05)。表4同。

Note：Data in each column with lowercase letters indicate significant difference (P<0.05).The same for Table 4.

2.3峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬血清IL-6、IL-1β的影響

由表4可知，Ⅲ組IL-6含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組(P<0.05)；Ⅲ組IL-1β含量顯著低于Ⅰ組，但在第14和21天時(shí)顯著高于Ⅱ和Ⅳ組(P<0.05)。

表 4　峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬血清IL-1β、IL-6的影響

2.4峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬腸黏膜SIgA的影響

由圖1可知，Ⅲ組十二指腸、盲腸SIgA含量顯著高于Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅳ組(P<0.05)。Ⅳ組回腸SIgA含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組(P<0.05)；Ⅲ組回腸SIgA含量在第7和21天顯著高于Ⅱ組(P<0.05)，空腸SIgA含量顯著低于其他3組。十二指腸SIgA含量表現(xiàn)為Ⅲ組>Ⅱ組>Ⅳ組>Ⅰ組，空腸SIgA含量表現(xiàn)為Ⅰ組>Ⅱ組>Ⅳ組>Ⅲ組。

圖 1　峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬腸黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)質(zhì)量濃度的影響

3討論

3.1峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬血清免疫球蛋白的影響

體液免疫主要由IgG、IgM、IgA及補(bǔ)體介導(dǎo)，血清免疫球蛋白(lgG、lgA、IgM)質(zhì)量濃度可以反映機(jī)體的體液免疫水平，IgG、IgM和IgA質(zhì)量濃度越大代表體液免疫功能越強(qiáng)，反之則相反[17]。馬玉芳等[18]研究表明，中藥復(fù)方(由黃芪、魚(yú)腥草、刺五加等組成的復(fù)方中藥添加劑Ⅰ，由黃芪、金銀花、茯苓等組成的復(fù)方中藥添加劑Ⅱ)能夠促進(jìn)斷奶仔豬血清免疫球蛋白IgG、IgA的分泌，提高仔豬免疫力。楊侃侃等[19]研究表明，在斷奶仔豬日糧中添加800 mg/kg刺五加多糖能夠顯著提高斷奶仔豬血清的IgG、IgA、IgM水平。李國(guó)忠[20]研究發(fā)現(xiàn)，添加 0.15% 發(fā)酵黃芩日糧組斷奶仔豬血清IgA、IgG、 IgM水平較基礎(chǔ)飼糧組分別提高36.8%，33.1%和22.9%，且顯著高于抗生素組。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加250，500 mg/kg峨眉雪膽微丸日糧組斷奶仔豬血清IgG、IgM、IgA水平總體較空白對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照組有所提高，表明峨眉雪膽微丸能夠提高斷奶仔豬體液免疫水平，增強(qiáng)斷奶仔豬免疫力。關(guān)于峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬免疫球蛋白的影響機(jī)理，還有待于進(jìn)一步研究。

3.2峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬血清補(bǔ)體C3、C4的影響

補(bǔ)體是機(jī)體非特異性免疫的主要組成部分，參與機(jī)體的保護(hù)性免疫應(yīng)答和自身穩(wěn)定功能，協(xié)助抗體和吞噬細(xì)胞殺滅病原微生物，擔(dān)負(fù)機(jī)體非特異性抗感染作用。血清補(bǔ)體C3水平升高表明補(bǔ)體系統(tǒng)的核心成分，即發(fā)揮效應(yīng)功能的關(guān)鍵成分的水平有所升高；補(bǔ)體C4水平升高說(shuō)明激活補(bǔ)體系統(tǒng)的能力增強(qiáng)。黃其春等[21]報(bào)道，在日糧中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2%或0.3%銀杏葉提取物(EGB)，可促進(jìn)血清補(bǔ)體C3、C4的生成。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬血清補(bǔ)體C3、C4的質(zhì)量濃度表現(xiàn)為250 mg/kg峨眉雪膽微丸日糧組>500 mg/kg峨眉雪膽微丸日糧組>抗生素組>空白對(duì)照組，其中250 mg/kg峨眉雪膽微丸能夠顯著提高血清補(bǔ)體C3、C4的質(zhì)量濃度，表明峨眉雪膽微丸具有提高斷奶仔豬非特異性抗感染的作用，可以有效增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫。至于峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬補(bǔ)體C3、C4質(zhì)量濃度影響的機(jī)理，尚有待于進(jìn)一步探討。

3.3峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬血清IL-1β、IL-6的影響

仔豬斷奶應(yīng)激期內(nèi)對(duì)機(jī)體物質(zhì)代謝具有特殊意義的細(xì)胞因子主要是IL-6和IL-1β。IL-6是由活化的T淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等分泌的一種蛋白分子，能夠刺激B細(xì)胞分化成熟并分泌IgG，還可使有絲分裂原誘導(dǎo)的T細(xì)胞產(chǎn)生IL-2，對(duì)T殺傷細(xì)胞的分化發(fā)揮作用。在仔豬斷奶應(yīng)激期，巨噬細(xì)胞釋放的IL-1β等前炎性細(xì)胞因子可促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖和分化，從而提高動(dòng)物機(jī)體的抵抗力。但這些細(xì)胞因子的過(guò)度分泌會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生負(fù)面影響，即導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的重新分配，將用于維持生長(zhǎng)和骨骼肌沉積的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)向于維持免疫反應(yīng)，從而降低了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用效率，最終影響機(jī)體生長(zhǎng)[17]。有關(guān)中藥對(duì)機(jī)體細(xì)胞因子質(zhì)量濃度影響的研究較少。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，添加250 mg/kg峨眉雪膽微丸日糧組仔豬血清IL-6顯著升高，IL-1β顯著低于空白對(duì)照組，表明250 mg/kg峨眉雪膽微丸能夠提高血清免疫因子IL-6水平，并在一定程度上降低炎性因子IL-1β的質(zhì)量濃度，通過(guò)提高細(xì)胞因子水平，進(jìn)而提高細(xì)胞免疫來(lái)降低斷奶應(yīng)激對(duì)機(jī)體的危害，提高斷奶仔豬的免疫力。這與伍松陵等[22]對(duì)樸菇多糖粉可增加免疫因子IL-6(質(zhì)量濃度為203.6 pg/mL)分泌、降低炎性因子IL-1β(質(zhì)量濃度為36.1 pg/mL)分泌的結(jié)果相比，250 mg/kg峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬細(xì)胞因子水平(IL-6質(zhì)量濃度384.3 ng/L、IL-1β質(zhì)量濃度19.5 ng/L)的作用更強(qiáng)。至于峨眉雪膽微丸對(duì)機(jī)體細(xì)胞因子的作用機(jī)理，也有待深入研究。

3.4峨眉雪膽微丸對(duì)斷奶仔豬腸黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的影響

SIgA與腸道健康密切相關(guān)。消化道黏膜是動(dòng)物機(jī)體抵抗病原微生物進(jìn)入體內(nèi)的第一道屏障，腸黏膜免疫主要是局部組織及免疫活性細(xì)胞在病原或抗原刺激下誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答反應(yīng)，小腸黏膜層中SIgA細(xì)胞是消化道黏膜免疫的物質(zhì)基礎(chǔ)。SIgA與腸上皮細(xì)胞刷狀緣表面分布的致密糖衣、堿性磷酸酶、杯狀上皮細(xì)胞分泌的黏液組成機(jī)體與外界的一層屏障，阻止絕大部分外來(lái)抗原、致病原的侵入，SIgA還可通過(guò)黏膜淋巴組織與抗原結(jié)合，增強(qiáng)淋巴細(xì)胞直接殺傷靶細(xì)胞的能力，與分泌液中的抗菌物質(zhì)如溶菌酶有協(xié)同作用[23]。晏家友等[24]研究發(fā)現(xiàn)，微膠囊型復(fù)合酸化劑可以提高斷奶仔豬十二指腸、空腸、回腸黏膜抗體的SIgA分泌量。本試驗(yàn)研究表明，250 mg/kg峨眉雪膽微丸日糧組仔豬十二指腸、盲腸SIgA的分泌顯著升高，回腸SIgA有所提高，表明250 mg/kg峨眉雪膽微丸能夠顯著提高斷奶仔豬腸道黏膜的SIgA含量，使斷奶仔豬黏膜免疫能力提高，從而增強(qiáng)腸道的抗感染能力，促進(jìn)腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，維護(hù)斷奶仔豬的腸道健康。

4結(jié)論

日糧中添加250 mg/kg峨眉雪膽微丸可促進(jìn)斷奶仔豬血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的生成，顯著提高補(bǔ)體C3、C4的水平以及免疫因子IL-6的分泌(P<0.05)，在一定程度上降低炎性因子IL-1β的分泌，顯著提高十二指腸、盲腸SIgA的分泌，進(jìn)而有效提高斷奶仔豬的免疫能力。

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YE Gang,ZHAO Ling
(CollegeofVeterinaryMedicine,SichuanAgriculturalUniversity,Chengdu,Sichuan611130,China)
Abstrast: 【Objective】 The effects ofHemsleyaomeiensispellets on immune function of weaned piglets were reported in this paper.【Method】 A total of 96 weaned crossbred piglets at the age of 28 days were randomly divided into 4 groups,with 3 replicates per group and 8 piglets per replicate.In blank control group,piglets were fed with basal diet.The experimental group was fed with same basal diet supplemented with 250 mg/kg and 500 mg/kgHemsleyaomeiensispellets while the control group was fed with supplements of 80 mg/kgSulfatecolielement.After 21 days,the intestinal mucosa and blood samples were collected and used to represent immune function.【Result】 Adding 250 mg/kgHemsleyaomeiensispellets to diets of weaned piglets increased serum IgG,IgM,and IgA,significantly increased concentrations of complements C3,C4 and the secretion of IL-6 (P<0.05),while reduced content of IL-1β.The secretion of immune globulin SIgA for duodenum,ileum,and cecum was increased as well,especially for duodenum and cecum (P<0.05).【Conclusion】 Adding 250 mg/kgHemsleyaomeiensispellets to diets enhanced immune function of weaned piglets.

Key words：weaned piglets;Hemsleya omeiensis pellets;immue function;immune globulin;mucosal immunity

DOI：網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間:2016-05-0314:0510.13207/j.cnki.jnwafu.2016.06.006

[收稿日期]2014-11-04

[基金項(xiàng)目]四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目“中獸藥創(chuàng)制與產(chǎn)業(yè)應(yīng)用”(2013NZ0019)

[作者簡(jiǎn)介]僧曉蘭(1991-)，女，河南三門(mén)峽人，在讀碩士，主要從事天然藥物與中獸藥研究。E-mail:sengxiaolan@163.com [通信作者]李英倫(1965-)，男，四川綿陽(yáng)人，教授，博士，主要從事天然藥物與中獸藥研究。E-mail:liyinglun01@163.com

[中圖分類(lèi)號(hào)]S858.283.72；S816.7

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)]1671-9387(2016)06-0034-06

網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20160503.1405.012.html