育肥豬群豬圓環(huán)病毒與大腸桿菌混合感染的診斷

劉　濤，王　瑞，曲哲會，何書海，鐘長銀（信陽農林學院，河南信陽464000；.河南省正陽縣畜牧局，河南正陽463600）

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育肥豬群豬圓環(huán)病毒與大腸桿菌混合感染的診斷

劉濤1，王瑞1，曲哲會1，何書海1，鐘長銀2
（信陽農林學院，河南信陽464000；2.河南省正陽縣畜牧局，河南正陽463600）

豬圓環(huán)病毒是動物病毒中最小的一員，研究發(fā)現PCV-2型對豬具有致病性，主要感染6～12周齡豬，可引起豬的先天性顫抖和豬斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合征等病型。而大腸桿菌在臨床上主要是一種條件性致病菌，在遇到特殊情況，會產生多種毒素造成機體多種病變特征，其中以仔豬黃痢、仔豬白痢和仔豬水腫病最為常見，在育肥豬階段發(fā)病較為少見。臨床上引起育肥豬群腹瀉的常見傳染性因素主要是豬增生性回腸炎、溫和性豬瘟。而由圓環(huán)病毒與大腸桿菌混合感染引起的育肥豬只腹瀉病例較為少見，近期通過臨床及實驗室工作，筆者確診一例規(guī)?；i場育肥豬圓環(huán)病毒與大腸桿菌混合感染病例，現將該案例的診治分析報告如下。

1　發(fā)病情況及臨床癥狀

駐馬店市正陽縣一母豬存欄450頭豬場，110～115日齡階段的育肥豬從2014年10月中旬陸續(xù)開始出現頑固性腹瀉，拉黃色稀糞，繼而消瘦，衰竭而死，病程一般持續(xù)20 d左右。發(fā)病率在5%，死亡率在70%。該場在發(fā)病期間使用過氟苯尼考、替米考星、楊樹花口服液，但治愈率很低。

2　病理變化

2.1大體病變尸體嚴重營養(yǎng)不良，明顯消瘦，貧血，全身皮膚蒼白，切開皮膚見皮下較干燥，從血管斷端流出少量稀薄而凝固不全的血液。肺臟多膨脹不全、質地變實，腸系膜淋巴結腫大出血，結腸袢淡黃色膠胨樣水腫（見中插彩版圖1）。肝臟淤血、腫大，呈暗紅色，膽汁瘀滯，膽囊萎縮（見中插彩版圖2）。心臟暗紅，外膜血管呈樹枝狀充血，心室擴張，尤以右心室明顯，心尖變鈍、質地較軟。脾臟輕度腫大，因增生而質地堅實，切面干燥、平滑。胃內容物少，并因胃內有膽汁逆流而呈黃色。黏膜腫脹，有點狀出血，黏膜面上覆有較多黏液，呈卡他性炎癥變化，在胃的無腺部與有腺部的交界處可見有小潰瘍。腸黏膜有點狀出血，腸壁淋巴小結腫大。

2.2組織病變淋巴結被膜和實質中的血管充血，淋巴竇擴張，其內充滿單核細胞和其他炎性細胞，并見大量含鐵黃紅素沉積。在單核細胞、淋巴細胞中可檢出嗜堿性胞漿和核內包涵體。腎小管上皮發(fā)生嚴重的顆粒變性，部分脫落，腎間質中有大量結締組織增生，伴有大量單核細胞和淋巴細胞浸潤。肝竇內有較多的血液，肝細胞發(fā)生輕度的脂肪變性，小葉結締組織增生。脾竇內有大量單核細胞浸潤，脾白髓萎縮，網狀細胞增生。

3　實驗室檢驗

3.1主要試劑引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。動物總RNA快速提取試劑盒，購自上海捷瑞生物工程有限公司；基因組RNA反轉錄試劑盒，購自Thermo公司；2ⅹPower PCR Master Mix，購自北京百泰克生物技術公司；DNA Marker，購自寶生物工程（大連）有限公司。

3.2引物設計與合成根據GenBank已發(fā)表的序列，應用PrimerPremier5. 0軟件設計豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒、豬圓環(huán)病毒引物。上游引物：5′-CCTGCACCGCGTAGAACTG-3′，下游引物：5′-GCGAAACGCCTGGTAAGC-3′。引物擴增特異性目的片段，出現540 bp大小條帶判斷為PRRSV經典株陽性，出現450 bp大小條帶判斷為PRRSV缺失株陽性。上游引物5′-CTCCCTGGGT?GGTCTAAG-3′，下游引物：5′-GGTTCCTCCACTCCCATTG-3′。出現290 bp大小條帶判斷為CSFV陽性。上游引物：5′-ATGGGCATCGGCGACTACCT-3′；下游引物：5′-GCGAGAAGAGCTGCGAGTGGA-3′。引物擴增特異性目的片段，出現270 bp大小條帶判斷為PRV陽性。上游引物：5′-GTTATGGTATG?GCGGGAGG-3′；下游引物：5′-CCGCTCTGTGCCCTTTGA-3′。引物擴增特異性目的片段，出現189 bp大小條帶判斷為PCV陽性。

3.3細菌分離無菌采集病豬的脾、肝、淋巴結、肺臟及結腸膠胨樣滲出物若干份。無菌操作，分別接種于麥康凱培養(yǎng)基、高鹽瓊脂培養(yǎng)基上，37.5℃，培養(yǎng)24 h。麥康凱培養(yǎng)基上長出粉紅色菌落，高鹽培養(yǎng)基上不生長。涂片、革蘭染色、鏡檢，可見到革蘭陰性短桿菌。

3.4生化試驗革蘭陰性分離菌發(fā)酵乳糖、阿拉伯糖、甘露醇、半乳糖、甘露糖，產酸產氣，發(fā)酵木糖，不發(fā)酵山梨醇，水解水楊苷。綜合其培養(yǎng)特性鑒定為大腸桿菌。

3.5藥敏試驗用下列藥物進行藥敏試驗，包括恩諾沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、大觀霉素、新霉素、鏈霉素、氨芐青霉素、舒巴坦鈉、丁胺卡那霉素、慶大霉素、強力霉素、林可霉素、阿莫西林、頭孢拉啶、菌必治。藥敏結果顯示菌必治、舒巴坦鈉及恩諾沙星高敏。

圖3　PCR擴增產物的電泳M：DNA分子質量標準；1：PRV PCR產物；2：PCV2 PCR產物；3：CSFV-PRRSV PCR產物

3.6豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病病毒、豬圓環(huán)病毒檢測結果。

4　討論

結合臨床、病理變化及實驗室病原檢測工作，顯示該豬場發(fā)病豬只感染有圓環(huán)病毒及大腸桿菌。

圓環(huán)病毒在自然界廣泛存在（Allan和Ellis，2000），據歐美一些國家報道，在一些圓環(huán)病毒控制較差的豬場，保育豬和生長豬腸炎的發(fā)病率明顯增加，究其原因同飼料中添加抗生素的限制和圓環(huán)病毒2型所造成的免疫抑制有關，從而導致腸道病原菌的增殖和危害。常見的病原菌有細胞內勞森菌、密螺旋體、沙門菌等。而此次從發(fā)病場分離出來的則是大腸桿菌。

大腸桿菌性腹瀉與病菌、環(huán)境條件和宿主因素的相互作用有關。一般認為產志賀毒素大腸桿菌或產vero毒素大腸桿菌可誘發(fā)病灶水腫。

本例中病豬膽囊萎縮或膽汁瘀滯，表明膽汁分泌嚴重不足及膽道被阻塞。膽汁對脂肪的消化和吸收具有重要作用。當膽道被阻塞，膽汁不能進入十二指腸時，脂肪的消化和吸收就會發(fā)生障礙，可引起脂肪痢。膽鹽能抑制結腸對鈉和水的吸收，如果小腸吸收膽鹽發(fā)生障礙，大量膽鹽進入結腸，常引起水瀉。

因此該場對本病的控制應從對因和對癥兩方面入手：（1）對因控制：據了解，該場并未使用圓環(huán)疫苗進行免疫接種。從檢測情況看，建議該場今后將圓環(huán)疫苗引入免疫程序中，針對圓環(huán)病毒的感染，建議在80日齡開始使用七清敗毒顆粒連續(xù)用藥10～15 d。結合該場運行時間已超過10年，豬舍老化較為嚴重，建議加強生物安全和飼養(yǎng)管理措施。豬舍應當保持一定程度的清潔衛(wèi)生，飼養(yǎng)密度適中，嚴禁與早已斷奶的育肥豬混群飼養(yǎng)，同時嚴格把握好原料關，減少或杜絕霉變原料進場。注意對豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、偽狂犬病、氣喘病的疫苗接種，提高群體的免疫水平，減少圓環(huán)病毒的發(fā)病風險。另可根據藥敏結果，使用阿莫西林含舒巴坦鈉及恩諾沙星聯(lián)合用藥；（2）對癥：選用龍膽瀉肝散來疏肝利膽，喂以麩皮粥，或喂給適量的鹽類瀉劑，如芒硝、硫酸鎂等，幫助病豬進行胃腸調理。后期喂以微生態(tài)制劑，調節(jié)腸道菌群，促進康復。

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中圖分類號：S858.28

文獻標志碼：B

文章編號：0529-6005（2016）05-0050-02

收稿日期：2015-01-09

基金項目：信陽市科技攻關項目（130017）

作者簡介：劉濤（1979-）男，副教授，碩士，研究方向為規(guī)?；i場疫病控制技術，E-mail：decai178@163.com