• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    納他霉素在納塔爾鏈霉菌中的合成及其調(diào)控機制的研究進展

    2016-06-23 13:49:50盧詩瑤孫立潔袁麗霞朱薇薇姚建銘
    生物技術(shù)通報 2016年5期
    關(guān)鍵詞:基因簇霉菌結(jié)構(gòu)域

    盧詩瑤孫立潔,袁麗霞,朱薇薇姚建銘

    (1.中國科學(xué)院等離子體物理研究所,合肥 230031;2.武漢中科光谷綠色生物技術(shù)有限公司,武漢 430075)

    納他霉素在納塔爾鏈霉菌中的合成及其調(diào)控機制的研究進展

    盧詩瑤1孫立潔1,2袁麗霞1,2朱薇薇2姚建銘1

    (1.中國科學(xué)院等離子體物理研究所,合肥 230031;2.武漢中科光谷綠色生物技術(shù)有限公司,武漢 430075)

    納他霉素作為一種多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,是納塔爾鏈霉菌的次級代謝產(chǎn)物。它不僅能夠有效地抑制真菌的生長,還能夠抑制黃曲霉毒素的形成,因而廣泛應(yīng)用于食品防腐劑和真菌角膜炎的治療等領(lǐng)域。納他霉素首先由乙酸激活聚酮合酶(PKS)催化合成納他霉素的骨架環(huán),再由系列相關(guān)合成酶對其進行加工修飾,此過程涉及系列基因簇的表達調(diào)控機制,如轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子的調(diào)節(jié)、途徑特異性調(diào)節(jié)、總體調(diào)控、交叉調(diào)節(jié)及胞內(nèi)ROS調(diào)節(jié)等。完整的納他霉素分子形成后由胞內(nèi)轉(zhuǎn)運子運出胞外。結(jié)合納他霉素的研究進展,對其未來的研究方向進行了展望。

    納他霉素;納塔爾鏈霉菌;聚酮合成酶(PKS);轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子

    納他霉素是一種多烯類大環(huán)內(nèi)酯抗生素(圖1),是一種抗菌范圍廣、效率高的真菌抑制劑,主要由恰塔努加鏈霉菌(Streptomyces chmanovgensis)、褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces gilvosporeus)和納塔爾鏈霉菌(Streptoyces natalensis)等發(fā)酵合成[1]。它不僅能夠與膜上麥角固醇發(fā)生特異性作用來抑制真菌的生長[2],還能夠有效地抑制黃曲霉毒素的形成。由于對動物細胞毒性較低[3],廣泛應(yīng)用于食品防腐劑和真菌角膜炎的治療等領(lǐng)域[4]。

    納他霉素主要在納塔爾鏈霉菌生長的穩(wěn)定期中合成。在此期間,若某種營養(yǎng)素缺乏或受到其他環(huán)境信號的刺激,特異性調(diào)節(jié)子和總體調(diào)節(jié)子會被激活,從而通過級聯(lián)反應(yīng)或總體交互作用來激活納他霉素合成基因簇的表達[5]。

    圖1 納他霉素的分子結(jié)構(gòu)

    1 納他霉素在納塔爾鏈霉菌中的合成

    1.1 參與納他霉素合成的基因簇

    20 00年,Aparicio等[6]已經(jīng)基本完成了對參與納他霉素合成的基因測序,目前已知該序列共有19個基因,橫跨約100 kb。在納他霉素的合成過程中,首先由pimS0-pimS4編碼的I類聚酮合成酶(polyketidesynthase,PKS)合成納他霉素骨架環(huán);再由pimC、pim G、pimD、pimJ、pimK和pimI編碼的附加蛋白逐步對納他霉素骨架環(huán)進行加工修飾;最后由pimA、pimB和pimH編碼的蛋白將完整的納他霉素轉(zhuǎn)運出細胞;而pimE、pimM和pimR則編碼轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子,負責(zé)調(diào)控納他霉素合成基因的表達(圖2)。

    圖2 合成納他霉素的基因簇[6]

    1.2 納他霉素骨架環(huán)的構(gòu)成

    納他霉素大環(huán)內(nèi)酯環(huán)的合成是由I類PKS催化的,PKS包括13個同源的模塊,這些模塊分布在5個由pimS0-pimS4編碼的大的多功能酶PIMS0-PIMS4中。如表1所示,PIMS0由起始模塊和模塊0組成;PIMS1包括4個模塊,模塊1-4;PIMS2包括模塊5-10;PIMS3和PIMS4分別由模塊11和12構(gòu)成。骨架環(huán)的合成由PIMS0催化起始,它的結(jié)構(gòu)為CoA連接酶-ACP-KS-AT-ACP。合成開始時,CoA連接酶結(jié)構(gòu)域催化乙酸鹽形成?;佘账?,再由ACP結(jié)構(gòu)域?qū)⑵滢D(zhuǎn)移到相鄰的KS結(jié)構(gòu)域,KS會將生長的聚酮化合物鏈轉(zhuǎn)移到C端ACP上,為PimS1模塊1的KS提供乙酰單位,作為延長的第一步[7]。

    合成起始后,PIMS1的4個模塊分別完成骨架鏈延長的前4個循環(huán),并構(gòu)成大部分的多烯發(fā)色團。當(dāng)4個延伸步驟完成后,骨架鏈將轉(zhuǎn)移到PIMS2上繼續(xù)合成,PIMS2、PIMS3、PIMS4的8個模塊依次催化8個羧酸基本成分的結(jié)合,并對其進行修飾,產(chǎn)生納他霉素骨架環(huán)。其中PIMS2的模塊9的KR是非活性的,不能將C9的酮基還原成羰基。因此,C9酮基通過和C13羧基之間的相互作用,構(gòu)成了成熟納他霉素所需的半縮酮環(huán)。最后,PIMS4 C末端的硫酯酶結(jié)構(gòu)域(TE)在絲氨酸殘基活性位點?;a(chǎn)生?;?酶中間體,催化骨架延伸及環(huán)化的結(jié)束[8]。

    1.3 納他霉素骨架環(huán)的修飾

    如表2和圖3所示,納他霉素骨架環(huán)合成后,PimG催化納他霉素骨架環(huán)的C4-C5雙鍵發(fā)生環(huán)氧化反應(yīng)形成環(huán)外羧基,而GDP-甘露糖被PimJ、PimC催化構(gòu)成GDP放線菌糖胺,最后由PimK催化放線菌糖胺連接在4,5-去環(huán)氧納他霉素骨架環(huán)上,構(gòu)成4,5-去環(huán)氧納他霉素。

    pimD失活的納塔爾鏈霉菌突變株只能合成4,5-去環(huán)氧納他霉素,這說明PimD是作為一種細胞色素P450單氧酶催化C4-C5雙鍵形成一個環(huán)氧,將4,5-去環(huán)氧納他霉素轉(zhuǎn)化成納他霉素[9,10]。這也是納他霉素合成的最后一步[11]。

    表1 PKS基因簇及其相關(guān)信息

    pimI還編碼一種硫酯酶,但它與pim4編碼的硫酯酶同源性很差。因此,這兩種酶來源不同。后來發(fā)現(xiàn),這兩種酶的作用也不同,PimI代表了Ⅱ型硫酯酶,參與從聚酮化合物中除去非生產(chǎn)性脫羧基延長?;?,促進產(chǎn)物的正確積累[12]。

    1.4 納他霉素的轉(zhuǎn)運

    完整的納他霉素形成后,由PimA、PimB所編碼的ABC跨膜轉(zhuǎn)運子負責(zé)將其運出胞外[13]。pimH基因位于納他霉素合成基因簇的最右端,由于其編碼蛋白與恥垢分枝桿菌乙胺丁醇抗性區(qū)域的膜蛋白Orf4有36%的同源性,Aparicio等[6]據(jù)此推測,它也可能編碼一種流出泵參與納他霉素的轉(zhuǎn)運。近年來,人們發(fā)現(xiàn)nysH、nysG(pimA、pimB的同源基因)失活的諾爾斯鏈霉菌突變體也可將制霉菌素運出胞外,證明鏈霉菌中存在除ABC轉(zhuǎn)運子外的其他轉(zhuǎn)運系統(tǒng),從而大大提高了PimH參與轉(zhuǎn)運納他霉素的可信度(表2)。

    表2 與納他霉素合成相關(guān)的基因所編碼蛋白的功能說明

    2 納他霉素合成的調(diào)控機制

    納他霉素合成的調(diào)控機制較為復(fù)雜,主要包括途徑特異性調(diào)控和總體調(diào)控等類型。途徑特異性調(diào)控基因位于調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的最底端,通過激活相關(guān)基因簇的表達調(diào)節(jié)納他霉素的合成。而總體多效調(diào)控基因一般不與納他霉素合成基因簇聯(lián)系在一起,它們可以對多種營養(yǎng)與環(huán)境壓力作出應(yīng)答,調(diào)控多個代謝途徑[14,15]。

    圖3 納他霉素骨架環(huán)的加工修飾過程

    2.1 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子的調(diào)節(jié)

    PimR和PimM是由納他霉素基因簇編碼的兩種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子,其編碼基因pimR和pimM位于納他霉素合成基因簇的最左端[16]。PimR屬于鏈霉菌抗生素調(diào)節(jié)蛋白(streptomyces antibiotic regulatory proteins,SARPs)型調(diào)節(jié)子,是一種途徑特異性調(diào)節(jié)蛋白,它的N端有SARP樣結(jié)構(gòu)域,C端有鳥苷酸環(huán)化酶的半同源結(jié)構(gòu)域和一個LuxR家族的大的ATP結(jié)合調(diào)節(jié)子[17]。PimM是一個高度保守的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子,其N端含PAS結(jié)構(gòu)域,C端含LuxR HTH模體[18],其中LuxR是一個DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域,而PAS結(jié)構(gòu)域是一個感應(yīng)結(jié)構(gòu)域,會限制DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)ζ浒袉幼拥挠H和力[19,20]。

    pimM失活的納塔爾鏈霉菌突變體不能產(chǎn)生納他霉素,而在納塔爾鏈霉菌野生型中擴增pimM會大大提高納他霉素產(chǎn)量。因此,PimM是納他霉素合成的激活子。Santos-Aberturas等[21]用RT-PCR和電泳遷移率分析實驗發(fā)現(xiàn),PimR通過調(diào)節(jié)PimM來調(diào)節(jié)納他霉素的合成。PimR作為一個轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子直接結(jié)合于pimM與pimR的整合區(qū)域,激活pimM表達PimM蛋白,PimM結(jié)合于納他霉素合成基因pimK、pimS2S3S4、pimI、pimJ、pimAB、pimE、pimS1和pimD的啟動子上,通過與RNA聚合酶的相互作用調(diào)控這些基因的表達。同時,PimM也激活其他分級調(diào)節(jié)子,從而調(diào)節(jié)pimC基因的表達。在這些蛋白的共同作用下,納他霉素開始合成[22]。

    2.2 途徑特異性調(diào)節(jié)

    途徑特異性調(diào)節(jié)是通過一種丁內(nèi)酯受體蛋白(butyrolactone receptor protein,Brp)應(yīng)答其同源丁內(nèi)酯分子,從而激活一系列途徑特異性調(diào)節(jié)基因編碼蛋白,這些蛋白被統(tǒng)稱為鏈霉菌抗生素調(diào)控蛋白家族[25,26]。

    2.2.1 PI因子的調(diào)節(jié)作用 Recio等[27]發(fā)現(xiàn),在納塔爾鏈霉菌中存在一種新型的群體感應(yīng)自誘導(dǎo)子(PI因子),它是一種納他霉素誘導(dǎo)子(圖4),在微摩爾濃度下即可誘導(dǎo)不產(chǎn)納他霉素的突變體合成納他霉素。據(jù)推測,PI因子的這種誘導(dǎo)作用可能是由γ-丁內(nèi)酯型受體介導(dǎo)的[28]。

    圖4 PI(2,3-二氨基-2,3-雙(羥甲基)-1,4-丁二醇)的分子結(jié)構(gòu)

    后來,Vicente等[29]研究發(fā)現(xiàn),PI因子可以誘導(dǎo)pimT基因的表達,而pimT失活的納塔爾鏈霉菌突變體中PI因子的表達水平降低了50%,納他霉素產(chǎn)量降低了65%。由此可見,PimT是PI因子的轉(zhuǎn)運子,細胞在營養(yǎng)限制等條件下產(chǎn)生PI因子,隨后被PimT轉(zhuǎn)運出胞外,作為識別其他細胞的一種信號分子,其他菌株整合這種外來群體信號后,納他霉素基因開始表達。

    2.2.2 甘油、乙二醇、1,2或1,3-丙二醇的調(diào)節(jié)作用 除PI因子外,甘油、乙二醇、1,2或1,3-丙二醇也可以作為納他霉素合成的誘導(dǎo)因子或前體,誘導(dǎo)并提高納他霉素的合成[30]。后續(xù)實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),它們與PI誘導(dǎo)子的誘導(dǎo)機制不同,也不是PI因子的直接前體。據(jù)Li等[31]分析,這些物質(zhì)能提高納他霉素的產(chǎn)量的原因有兩種,一是丙醇作為前體,為納他霉素大環(huán)內(nèi)酯的合成提供了三碳單元;二是丙醇通過調(diào)節(jié)代謝的關(guān)鍵位點,使乙酰輔酶A的積累,并抑制了TCA循環(huán)、糖酵解途徑,以此促進納他霉素的合成。

    2.2.3 膽固醇氧化酶的調(diào)節(jié)作用 pimE基因位于納他霉素基因簇的中間,它是一種胞外型膽固醇氧化酶,對菌株的生長、分化沒有影響[23]。Mendes等[24]發(fā)現(xiàn),pimE失活的菌株不能產(chǎn)生納他霉素,而基因互補卻恢復(fù)了納他霉素的合成,證明PimE是納他霉素合成的一種信號蛋白。據(jù)此推測,PimE與其他膽固醇氧化酶可能作為一種真菌傳感器作用于麥角固醇(真菌細胞膜中主要的固醇類物質(zhì))并引起細胞應(yīng)答,再通過一系列信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)誘導(dǎo)納他霉素的合成。

    2.3 總體調(diào)控

    總體調(diào)控主要是通過雙組分系統(tǒng)來應(yīng)答一系列外部壓力信號,從而調(diào)控次級代謝過程。培養(yǎng)基中磷酸的濃度對納塔爾鏈霉菌的初級代謝和次級代謝均產(chǎn)生極大的影響,磷酸濃度會干擾一系列基因的表達,關(guān)系到鏈霉菌由初級代謝向次級代謝的轉(zhuǎn)變[32,33]。當(dāng)培養(yǎng)基中無機磷酸鹽濃度達到1 mmol/L時,納他霉素產(chǎn)量急劇下降;10 mmol/L時,所有納他霉素合成基因的表達都處于抑制狀態(tài)。Mendes等[35]克隆并測序了phoU-phoR-phoP 基因簇編碼的PhoR-PhoP雙組分系統(tǒng),構(gòu)建了phoP 缺失突變體及phoR-phoP 缺失突變體,二者都降低了對磷酸的敏感性,并且納他霉素產(chǎn)量都增加了80%。對上述兩種突變體進行PT-PCR及功能分析,結(jié)果表明,磷酸對納他霉素合成的調(diào)控是通過phoR-phoP修飾其他合成基因介導(dǎo)的。Rodríguez等[34]也提出,鏈霉菌中的雙組分系統(tǒng)是調(diào)節(jié)抗生素復(fù)雜代謝途徑中的關(guān)鍵。

    PhoR蛋白是一個標(biāo)準(zhǔn)的跨膜傳感激酶,它僅含有一個完整的跨膜結(jié)構(gòu)域和一個額外的短的疏水尾部,可以感應(yīng)外部信號。PhoP是OmpR家族的一類DNA結(jié)合應(yīng)答調(diào)節(jié)子,其C端含有DNA結(jié)合域[36]。phoU-phoR-phoP 基因位于納他霉素合成基因簇之外,PhoP檢測到外部磷酸信號時會結(jié)合于phoU-phoR整合區(qū)域啟動子-35區(qū)域附近的PHO盒(PhoP結(jié)合序列)上,并通過招募RNA聚合酶及穩(wěn)定RNA聚合酶-DNA啟動子復(fù)合物進行自調(diào)節(jié),誘導(dǎo)phoU-phoR基因大量轉(zhuǎn)錄,隨后PhoP通過一些途徑特異性調(diào)節(jié)子的級聯(lián)反應(yīng),發(fā)生磷酸化和去磷酸化,抑制納他霉素合成基因pimS1、pimS4、pimC和pimG的表達,導(dǎo)致納他霉素產(chǎn)物的減少[35]。

    2.4 交叉調(diào)節(jié)

    在鏈霉菌代謝中,某些營養(yǎng)限制信號,如磷酸[37]、氮源[38]、葡萄糖或其他容易利用的碳源[39],通過轉(zhuǎn)換成總體調(diào)節(jié)子,激活途徑特異性調(diào)節(jié)子來調(diào)控納他霉素合成的初級和次級代謝過程。Borodina等[40]研究發(fā)現(xiàn),磷酸果糖激酶基因在調(diào)控天藍色鏈霉菌的次級代謝中發(fā)揮重要作用,而這種酶又是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶。因此,糖酵解過程中的磷酸化中間產(chǎn)物可能作為碳調(diào)控和磷酸調(diào)控的整合分子將兩種信號途徑串聯(lián)起來。

    在磷酸饑餓或氮饑餓引起細胞初級代謝不平衡的情況下,細胞會產(chǎn)生一系列的應(yīng)答機制去清除過剩的營養(yǎng),并產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物。它們之間的交互作用較為復(fù)雜,不僅影響參與氮源轉(zhuǎn)運和同化的基因的表達,還直接影響了氮源調(diào)節(jié)子的表達[41]。有研究報道,雙組分系統(tǒng)中的PhoP蛋白會結(jié)合到某些參與氮同化作用基因的啟動子上,調(diào)控氮的代謝[42]。然而,在納塔爾鏈霉菌中碳源、氮源、磷酸之間的交叉調(diào)節(jié)機制尚不甚清楚,有待進一步研究。

    2.5 胞內(nèi)ROS的調(diào)節(jié)

    眾所周知,納他霉素的產(chǎn)量在很大程度上依賴于溶解氧的水平,低濃度O2會限制菌株的生長及納他霉素的合成,而高濃度O2會誘導(dǎo)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)的升高和細胞的氧化損傷。因此,適當(dāng)增加溶氧量可以提高納他霉素的產(chǎn)量[43]。2011年,Beites等[44]闡明了胞內(nèi)ROS調(diào)節(jié)納他霉素合成的機制,氧氣消耗會誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生更多的ROS,尤其是胞內(nèi)H2O2將PimM蛋白作為直接或間接靶標(biāo),通過氧化還原機制調(diào)控并提高納他霉素的合成。然而,當(dāng)胞內(nèi)H2O2超過某個閾值時,會對細胞產(chǎn)生毒性作用,降低納他霉素的產(chǎn)量。2013年,Tiago等[45]發(fā)現(xiàn)胞內(nèi)NADPH/NADH比例和通過BACC(支鏈氨基酸)代謝的生物合成的前體細胞的有效性是氧化應(yīng)激條件下納他霉素合成的重要影響因素。

    3 展望

    提高納他霉素產(chǎn)量一直是微生物發(fā)酵產(chǎn)納他霉素研究的核心內(nèi)容。目前,國內(nèi)主要采用誘變技術(shù)進行菌株選育,這在一定程度上可以提高納他霉素的產(chǎn)量,但增幅程度受到該技術(shù)自身局限性的限制。研究納他霉素的合成及其分子調(diào)控機制,為傳統(tǒng)誘變技術(shù)向基因工程技術(shù)過渡奠定了理論基礎(chǔ)?;蚬こ碳夹g(shù)能夠有目的地對相關(guān)基因進行定向改造,不僅從源頭上提高納他霉素基因的表達水平及其產(chǎn)量,還可降低誘變技術(shù)的盲目性和隨機性。因此,基因工程菌種技術(shù)很可能代表納他霉素未來的研究和開發(fā)方向。

    [1]Wang S, Liu F, Hou Z, et al. Enhancement of natamycin production on Streptomyces gilvosporeus by chromosomal integration of theVitreoscilla hemoglobingene(vgb)[J]. World J Microbiol Biotechnol, 2014, 30(4):1369-1376.

    [2]te Welscher YM, ten Napel HH, Balagué MM, et al. Natamycin blocks fungal growth by binding specifically to ergosterol without permeabilizing the membrane[J]. J Biol Chem, 2008, 283(10):6393-6401.

    [3]Prajna NV, Mascarenhas J, Krishnan T, et al. Comparison of natamycin and voriconazole for the treatment of fungal keratitis[J]. Arch Ophthalmol, 2010, 6:672-678.

    [4]王春艷, 劉樹立. 納他霉素的研究概況及其在食品工業(yè)中的應(yīng)用[J]. 中國食品添加劑, 2007, 2:169-173.

    [5]Martín JF, Liras P. Reprogramming microbial metabolic pathways[M]. Netherlands:Springer Netherlands, 2012:115-138.

    [6]Aparicio JF, Fouces R, Mendes MV, et al. A complex multienzyme system encoded by five polyketide synthase genes is involved in the biosynthesis of the 26-membered polyene macrolide pimaricin in Streptomyces natalensis[J]. Chem Biol, 2000, 7(11):895-905.

    [7]Aparicio JF, Colina AJ, Ceballos E, et al. The biosynthetic gene cluster for the 26-membered ring polyene macrolide pimaricin a new polyketide synthase organization encoded by two subclusters separated by functionalzation genes[J]. J Biol Chem, 1999, 274(15):10133-10139.

    [8]Sharma KK, Boddy CN. The thioesterase domain from the pimaricin and erythromycin biosynthetic pathways can catalyze hydrolysis of simple thioester substrates[J]. Bioorg Med Chem Lett, 2007, 17(11):3034-3037.

    [9]Kells PM, Ouellet H, Santos-Aberturas J, et al. Structure of cytochrome P450 pimd suggests epoxidation of the polyene macrolide pimaricin occurs via a hydroperoxoferric intermediate[J]. Chem Biol, 2010, 17(8):841-851.

    [10]Santos-Aberturas J, Engel J, Dickerhoff J, et al. Exploration of the substrate promiscuity of biosynthetic tailoring enzymes as a new source of structural diversity for polyene macrolide antifungals[J]. ChemCatChem, 2015, 7(3): 490-500.

    [11]Mendes MV, Recio E, Fouces R, et al. Engineered biosynthesis of novel polyenes:A pimaricin derivative produced by targeted gene disruption in Streptomyces natalensis[J]. Chem Biol, 2001, 8(7):635-644.

    [12]Kim BS, Cropp TA, Beck BJ, et al. Biochemical evidence for an editing role of thioesterase II in the biosynthesis of the polyketide pikromycin[J]. J Biol Chem, 2002, 277(50):48028-48034.

    [13]Davidson AL, Dassa E, Orelle C, et al. Structure, function, and evolution of bacterial ATP-binding cassette systems[J]. Microbiol Mol Biol R, 2008, 72(2):317-364.

    [14]Liu G, Chater KF, Chandra G, et al. Molecular regulation of antibiotic biosynthesis in streptomyces[J]. Microbiol Mol Biol R, 2013, 77(1):112-143.

    [15]Yoon V, Nodwell JR. Activating secondary metabolism with stress and chemicals[J]. J Ind Microbiol Biot, 2014, 41(2):415-424.

    [16]Jang BY, Hwang YI, Choi SU. Effects of pimM and pimR on the increase of natamycin production in Streptomyces natalensis[J]. J Korean Soc Appl Bi, 2011, 54(1):141-144.

    [17]Antón N, Martin JF, Mendes MV, et al. Identification of PimR as a positive regulator of pimaricin biosynthesis in Streptomyces natalensis[J]. J Bacteriol, 2004, 186(9):2567-2575.

    [18]Antón N, Santos-Aberturas J, Mendes MV, et al. PimM, a PAS domain positive regulator of pimaricin biosynthesis in Streptomyces natalensis[J]. Microbiology, 2007, 153(9):3174-3183.

    [19]Santos-Aberturas J, Payero TD, Vicente CV, et al. Functional conservation of PAS-LuxR transcriptional regulators in polyene macrolide biosynthesis[J]. Metab Eng, 2011, 13(6):756-767.

    [20]Vicente CM, Santos-Aberturas J, Payero TD, et al. PAS-LuxR transcriptional control of filipin biosynthesis in S. avermitilis[J]. Appl Microbiol Biot, 2014, 98(22):9311-9324.

    [21]Santos-Aberturas J, Vicente CV, Payero TD, et al. Hierarchical control on polyene macrolide biosynthesis:PimR modulates pimaricin production via the PAS-LuxR transcriptional activator PimM[J]. PLoS ONE, 2012, 7(6):e38536.

    [22]Santos-Aberturas J, Vicente CM, Guerra SM, et al. Molecular control of polyene macrolide biosynthesis direct binding of the regulator pimm to eight promoters of pimaricin genes and identification of binding boxes[J]. J Biol Chem, 2011, 286(11):9150-9161.

    [23]Aparicio JF, Martn JF. Microbial cholesterol oxidase:Bioconversion enzymes or signal proteins?[J]. Mol Biosyst, 2008, 4(8):804-809.

    [24]Mendes MV, Recio E, Antón N, et al. Cholesterol oxidases act as signaling proteins for the biosynthesis of the polyene macrolidepimaricin[J]. Chem Biol, 2007, 14(3):279-290.

    [25]Tezuka T, Ohnishi Y. Microbial production[M]. Japan:Springer Japan, 2014:179-190.

    [26]Martín JF, Liras P. Engineering of regulatory cascades and networks controlling antibiotic biosynthesis in Streptomyces[J]. Curr Opin Microbiol, 2010, 3(3):263-273.

    [27]Recio E, Colina A, Rumbero A, et al. PI factor, a novel type quorum sensing inducer elicits pimaricin production in Streptomyces natalensis[J]. J Biol Chem, 2004, 279(40):41586-41593.

    [28]Nodwell JR. Are you talking to me? A possible role for γ-butyrolactones in interspecies signaling?[J]. Mol Microbiol, 2014, 94(3):483-485.

    [29]Vicente CM, Santos-Aberturas J, Guerra SM, et al. PimT, an amino acid exporter controls polyene production via secretion of the quorum sensing pimaricin-inducer PI-factor in Streptomyces natalensis[J]. Microb Cell Fact, 2009, 8(1):426-433.

    [30]Recio E, Aparicio JF, Rumbero A, et al. Glycerol, ethylene glycol and propanediol elicit pimaricin biosynthesis in the PI-factor defective strain Streptomyces natalensis npi287 and increase polyene production in several wild type actinomycetes[J]. Microbiology, 2006, 152:3147-3156.

    [31]Li M, Chen S, Li J, et al. Propanol addition improves natamycin biosynthesis of Streptomyces natalensis[J]. Appl Biochem Biotechnol, 2014, 172(7):3424-3432.

    [32]Sanche S, Demain AL. Metabolic regulation of fermentation processes[J]. Enzyme Microb Tech, 2002, 31(7):895-906.

    [33]Nieselt K, Battke F, Herbig A, et al. The dynamic architecture of the metabolic switch in Streptomyces coelicolor[J]. BMC Genomics, 2010, 11(1):150-155.

    [34]Rodríguez H, Rico S, Díaz M, et al. Two-component systems in Streptomyces:key regulators of antibiotic complex pathways[J]. Microb Cell Fact, 2013, 12(4):491-494.

    [35]Mendes MV, Tunca S, Antón N, et al. The two-component phoR-phoP system of Streptomyces natalensis:inactivation or deletion of phoP reduces the negative phosphate regulation of pimaricin biosynthesis[J]. Meta Eng, 2007, 9(2):217-227.

    [36]Martín JF. Phosphate control of the biosynthesis of antibiotics and other secondary metabolites is mediated by the PhoR-PhoP system:an unfinished story[J]. J Bacteriol, 2004, 186(16):5197-5201.

    [37]Rodríguez-García A, Barreiro C, Santos-Beneit F, et al. Genomewide transcriptomic and proteomic analysis of the primary response to phosphate limitation in Streptomyces coelicolor M145 and in a DphoP mutant[J]. Proteomics, 2007, 7(14):2410-2429.

    [38]Tiffert Y, Supra P, Wurm R, et al. The Streptomyces coelicolor GlnR regulon:identification of new GlnR targets and evidence for a central role of GlnR in nitrogen metabolism in actinomycetes[J]. Mol Microbiol, 2008, 67(4):861-880.

    [39]Rigali S, Titgemeyer F, Barends S, et al. Feast or famine:the global regulator DasR links nutrient stress to antibiotic production by Streptomyces[J]. EMBO Rep, 2008, 9(7):670-675.

    [40]Borodina I, Siebring J, Zhang J, et al. Antibiotic overproduction in Streptomyces coelicolor A3 2 mediated by phosphofructokinase deletion[J]. J Biol Chem, 2008, 283(37):25186-25199.

    [41]Martín JF, Sola-Landa A, Santos-Beneit F, et al. Cross-talk of global nutritional regulators in the control of primary and secondary metabolism in Streptomyces[J]. Microb Biotechnol, 2011, 4(2):165-174.

    [42]Rodríguez-García A, Sola-Landa A, Apel K, et al. Phosphate control over nitrogen metabolism in Streptomyces coelicolor:direct and indirect negative control of glnR, glnA, glnII and amtB expression by the response regulator PhoP[J]. Nucleic Acids Res, 2009, 37(10):3230-3242.

    [43]el-Enshasy HA, Farid MA, el-Sayed el SA. Influence of inoculum type and cultivation conditions on natamycin production by Streptomyces natalensis[J]. J Basic Microb, 2000, 40(5-6):333-342.

    [44]Beites T, Pires SDS, Santos CL, et al. Crosstalk between ROS homeostasis and secondary metabolism in S. natalensis ATCC 27448:modulation of pimaricin production by intracellular ROS[J]. PLoS One, 2011, 6(11):e27472.

    [45]Beites T, Rodríguez-García A, Moradas-Ferreira P, et al. Genomewide analysis of the regulation of pimaricinproduction in Streptomyces natalensis by reactive oxygen species[J]. Appl Microbiol Biot, 2014, 98(5):2231-2241.

    (責(zé)任編輯 狄艷紅)

    Research Progress on the Biosynthetic and Regulatory Mechanisms of Natamycin in Streptomyces natalensis

    LU Shi-yao1SUN Li-jie1,2YUAN Li-xia1,2ZHU Wei-wei2YAO Jian-ming1
    (1. Institute of Plasma Physics,Chinese Academy of Sciences,Hefei 230031;2. Wuhan Zhongke Optics Valley Green Biotechnology Co.,Ltd.,Wuhan 430075)

    Natamycin,a polyene-macrolide antibiotic,is a secondary metabolite produced by Streptomyces natalensis. It can not only effectively inhibit the growth of fungi,but also depress the generation of aflatoxin. Thus,it is widely used in the fields such as food preservatives,remedial reagent of fungal keratitis,etc. Skeleton ring of natamycin is firstly synthesized by the catalyst of acetic acid-activated polyketone synthase,and then modified by some other correlated synthases,involving the regulation and expression mechanisms of natamycin biosynthesis-related genes(i.e.,transcriptional regulator’s regulation,pathway-specific regulation,global regulation,and cross-talk regulation,as well as ROS regulation,etc). A matured molecule of natamycin can be exported out of cells through intracellular transporters. Finally,perspective in the future has been proposed based on the research progress of latest reports.

    natamycin;Streptoyces natalensis;polyketone synthase(PKS);transcriptional regulators

    10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.05.004

    2015-08-04

    國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(“863”計劃)(2014AA021703),留學(xué)回國人員科研啟動基金[教外司留(2013)693號],安徽省自然科學(xué)基金面上項目(1508085MB3),湖北省科技支撐計劃項目(2014BGD019)

    盧詩瑤,女,博士研究生,研究方向:納他霉素的合成工藝與改良;E-mail:lushiyao2015@163.com

    孫立潔,副研究員,E-mail:ljsun@ipp.ac.cn;姚建銘,研究員,E-mail:jmyao@ipp.ac.cn

    猜你喜歡
    基因簇霉菌結(jié)構(gòu)域
    揭示水霉菌繁殖和侵染過程
    冬瓜高通量轉(zhuǎn)錄組測序及分析
    蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域劃分方法及在線服務(wù)綜述
    重組綠豆BBI(6-33)結(jié)構(gòu)域的抗腫瘤作用分析
    組蛋白甲基化酶Set2片段調(diào)控SET結(jié)構(gòu)域催化活性的探討
    霉菌的新朋友—地衣
    地衣和霉菌
    泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域與泛素化信號的識別
    腸球菌萬古霉素耐藥基因簇遺傳特性
    遺傳(2015年5期)2015-02-04 03:06:55
    海洋稀有放線菌 Salinispora arenicola CNP193 基因組新穎PKS 和NRPS基因簇的發(fā)掘
    人妻夜夜爽99麻豆av| 国产亚洲一区二区精品| 国产又色又爽无遮挡免| 午夜日本视频在线| 91久久精品国产一区二区三区| 性色avwww在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲天堂av无毛| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 国产69精品久久久久777片| 美女被艹到高潮喷水动态| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 五月玫瑰六月丁香| 国产片特级美女逼逼视频| 国产大屁股一区二区在线视频| 黄色配什么色好看| 亚洲自拍偷在线| av一本久久久久| 国产 精品1| 夜夜爽夜夜爽视频| 在线观看av片永久免费下载| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产老妇伦熟女老妇高清| 免费黄频网站在线观看国产| 永久网站在线| 国产亚洲91精品色在线| 简卡轻食公司| 国产探花在线观看一区二区| 久久精品人妻少妇| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲国产色片| 人人妻人人看人人澡| 99热网站在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 国产成人a区在线观看| 全区人妻精品视频| 高清日韩中文字幕在线| 在线 av 中文字幕| 波多野结衣巨乳人妻| 国产爱豆传媒在线观看| 欧美精品国产亚洲| 最近2019中文字幕mv第一页| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产综合懂色| 边亲边吃奶的免费视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲成人久久爱视频| 秋霞伦理黄片| 久久99精品国语久久久| 91在线精品国自产拍蜜月| 91精品国产九色| 欧美激情国产日韩精品一区| 视频区图区小说| 69av精品久久久久久| 亚洲av不卡在线观看| 日本熟妇午夜| 亚洲av.av天堂| 一区二区三区乱码不卡18| 国产日韩欧美亚洲二区| av.在线天堂| 亚洲av免费在线观看| 毛片女人毛片| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 男女啪啪激烈高潮av片| 校园人妻丝袜中文字幕| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 一区二区av电影网| 婷婷色综合www| av在线老鸭窝| 亚洲av欧美aⅴ国产| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产综合精华液| av一本久久久久| 日韩av不卡免费在线播放| 国产永久视频网站| 黄片无遮挡物在线观看| 日韩伦理黄色片| 91久久精品国产一区二区成人| 中文字幕制服av| 一个人看的www免费观看视频| 99热网站在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 久久久欧美国产精品| 亚洲真实伦在线观看| 日本免费在线观看一区| 精品久久久久久电影网| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 3wmmmm亚洲av在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美一区二区亚洲| 亚洲图色成人| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美国产精品一级二级三级 | 综合色av麻豆| 亚洲久久久久久中文字幕| 老司机影院毛片| 亚洲av.av天堂| 国产精品熟女久久久久浪| 国产欧美日韩精品一区二区| 深夜a级毛片| 一个人观看的视频www高清免费观看| 欧美成人午夜免费资源| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 激情五月婷婷亚洲| 成年av动漫网址| 国产av码专区亚洲av| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 久久精品久久久久久久性| 看免费成人av毛片| 777米奇影视久久| 水蜜桃什么品种好| 伦理电影大哥的女人| 久久久久久久久大av| 国内精品宾馆在线| 亚洲人成网站在线观看播放| 日本与韩国留学比较| av国产精品久久久久影院| 丝瓜视频免费看黄片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲国产欧美人成| 成年av动漫网址| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲av一区综合| 免费黄网站久久成人精品| 在线天堂最新版资源| 少妇的逼好多水| 秋霞在线观看毛片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲四区av| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久久欧美国产精品| 成人亚洲欧美一区二区av| 永久免费av网站大全| 精品人妻视频免费看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 国产毛片a区久久久久| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲怡红院男人天堂| 国产高清国产精品国产三级 | 99热6这里只有精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲无线观看免费| 亚州av有码| 免费在线观看成人毛片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国产成人a区在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 日韩人妻高清精品专区| 国产精品女同一区二区软件| 下体分泌物呈黄色| 亚洲va在线va天堂va国产| 18禁在线播放成人免费| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲精品日本国产第一区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲av不卡在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 草草在线视频免费看| 久久6这里有精品| 欧美丝袜亚洲另类| 免费少妇av软件| 欧美区成人在线视频| 亚洲怡红院男人天堂| 国产成人a∨麻豆精品| 午夜精品国产一区二区电影 | 男的添女的下面高潮视频| 国产成年人精品一区二区| 成人无遮挡网站| 99久久人妻综合| 99久久九九国产精品国产免费| 深夜a级毛片| 日韩强制内射视频| 热99国产精品久久久久久7| 99热这里只有精品一区| 搞女人的毛片| 在线看a的网站| 精品一区二区免费观看| 中国国产av一级| 欧美xxxx性猛交bbbb| 男女无遮挡免费网站观看| 身体一侧抽搐| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲最大成人手机在线| 国产成人a区在线观看| 日本免费在线观看一区| 各种免费的搞黄视频| 一区二区三区免费毛片| av线在线观看网站| 在线观看一区二区三区激情| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 亚洲av中文av极速乱| 欧美激情在线99| 夜夜爽夜夜爽视频| 精品一区二区免费观看| 日韩欧美精品免费久久| 晚上一个人看的免费电影| 久热这里只有精品99| 亚洲电影在线观看av| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲国产欧美在线一区| 91精品伊人久久大香线蕉| 干丝袜人妻中文字幕| kizo精华| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产亚洲最大av| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲无线观看免费| 日韩欧美精品v在线| 色视频在线一区二区三区| 欧美 日韩 精品 国产| 国产探花极品一区二区| 欧美日韩精品成人综合77777| 一区二区三区四区激情视频| 中文字幕制服av| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 各种免费的搞黄视频| 插阴视频在线观看视频| 熟女av电影| 国产精品一及| 99热这里只有精品一区| 国产 一区精品| 一本一本综合久久| 成人亚洲精品一区在线观看 | 一区二区三区四区激情视频| 国产伦理片在线播放av一区| 国产男女内射视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 黄片无遮挡物在线观看| 免费黄色在线免费观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 69人妻影院| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲av成人精品一二三区| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产精品一区二区性色av| 欧美zozozo另类| a级一级毛片免费在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲欧美精品专区久久| 国产精品一区www在线观看| h日本视频在线播放| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 黄片wwwwww| 精品人妻熟女av久视频| 大话2 男鬼变身卡| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久久精品欧美日韩精品| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲美女视频黄频| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久精品人妻少妇| 人妻少妇偷人精品九色| 天堂中文最新版在线下载 | 欧美日本视频| 久久久精品94久久精品| 高清视频免费观看一区二区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产综合懂色| 美女国产视频在线观看| 亚洲图色成人| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲精品第二区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 十八禁网站网址无遮挡 | 亚洲av男天堂| 免费黄网站久久成人精品| 国产黄频视频在线观看| 少妇 在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 99久国产av精品国产电影| 成年版毛片免费区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲欧洲日产国产| 日韩一区二区视频免费看| 日韩制服骚丝袜av| 欧美高清性xxxxhd video| 全区人妻精品视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产午夜精品一二区理论片| 国产成人福利小说| 可以在线观看毛片的网站| 久久久久久伊人网av| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲精品成人久久久久久| 免费在线观看成人毛片| 男人舔奶头视频| 五月天丁香电影| 最近中文字幕2019免费版| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 人人妻人人看人人澡| 久久久国产一区二区| av在线app专区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 午夜精品国产一区二区电影 | 欧美xxxx性猛交bbbb| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 91久久精品国产一区二区成人| 99re6热这里在线精品视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 男人添女人高潮全过程视频| 国产男人的电影天堂91| 亚洲av成人精品一区久久| 久久99热这里只有精品18| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 亚洲天堂国产精品一区在线| 高清日韩中文字幕在线| 国产 一区 欧美 日韩| 99久久精品热视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 最近最新中文字幕免费大全7| 99热这里只有精品一区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 如何舔出高潮| 久久久久精品久久久久真实原创| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日本与韩国留学比较| 秋霞在线观看毛片| 国产精品福利在线免费观看| 超碰97精品在线观看| 久久久午夜欧美精品| 国产精品一区www在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 22中文网久久字幕| 秋霞在线观看毛片| 日本与韩国留学比较| 人妻系列 视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久久久精品性色| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产人妻一区二区三区在| av天堂中文字幕网| 精品久久久久久久久av| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲色图av天堂| 久久人人爽人人爽人人片va| 中文字幕制服av| 黄色日韩在线| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 最近的中文字幕免费完整| 中文资源天堂在线| 国产精品一区二区性色av| 国产高清国产精品国产三级 | 国产片特级美女逼逼视频| 久久久久国产网址| 日韩av免费高清视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲内射少妇av| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产精品无大码| 美女高潮的动态| 亚洲精品,欧美精品| 三级国产精品片| 只有这里有精品99| 免费看av在线观看网站| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲不卡免费看| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美成人午夜免费资源| 成人国产av品久久久| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久这里有精品视频免费| 少妇的逼好多水| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲国产欧美人成| 国产精品人妻久久久久久| 激情 狠狠 欧美| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 婷婷色综合大香蕉| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产精品一及| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 少妇的逼好多水| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 黄色怎么调成土黄色| 国产欧美亚洲国产| 97热精品久久久久久| 欧美区成人在线视频| 99久久精品国产国产毛片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久99精品国语久久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久久久久伊人网av| 国产一区有黄有色的免费视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲性久久影院| av在线播放精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 九九在线视频观看精品| 下体分泌物呈黄色| 2021天堂中文幕一二区在线观| 男人狂女人下面高潮的视频| 草草在线视频免费看| 国产大屁股一区二区在线视频| xxx大片免费视频| 日韩欧美一区视频在线观看 | 欧美精品国产亚洲| 欧美高清成人免费视频www| 成人漫画全彩无遮挡| 一个人看视频在线观看www免费| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久久久久久久人人人人人人| 春色校园在线视频观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲精品第二区| 深夜a级毛片| 欧美高清性xxxxhd video| 99久久中文字幕三级久久日本| 午夜精品一区二区三区免费看| 男女边吃奶边做爰视频| 一个人看视频在线观看www免费| 午夜福利视频精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 热99国产精品久久久久久7| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品国产三级国产专区5o| 成人黄色视频免费在线看| 成年av动漫网址| 日韩大片免费观看网站| 可以在线观看毛片的网站| 中国国产av一级| 国产欧美亚洲国产| 禁无遮挡网站| 2022亚洲国产成人精品| 中文字幕免费在线视频6| 99久久精品热视频| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲国产色片| 国产 一区精品| 99久久人妻综合| 在线观看三级黄色| 国产毛片在线视频| 97热精品久久久久久| 国产免费一级a男人的天堂| 久久久久性生活片| 午夜福利视频1000在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 欧美丝袜亚洲另类| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲丝袜综合中文字幕| 黄色怎么调成土黄色| av天堂中文字幕网| 在线免费十八禁| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲久久久久久中文字幕| 97超视频在线观看视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 一二三四中文在线观看免费高清| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久久久性生活片| 久久99热这里只有精品18| 男女无遮挡免费网站观看| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲成色77777| 国产淫片久久久久久久久| 免费看a级黄色片| 丝瓜视频免费看黄片| 大片电影免费在线观看免费| 99re6热这里在线精品视频| 丰满少妇做爰视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 免费看日本二区| 最近最新中文字幕免费大全7| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 色播亚洲综合网| av.在线天堂| 日韩一区二区三区影片| 精品一区二区免费观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 男男h啪啪无遮挡| 永久免费av网站大全| 免费看av在线观看网站| 丰满人妻一区二区三区视频av| 人妻 亚洲 视频| 久久久久久久精品精品| 在线天堂最新版资源| 秋霞在线观看毛片| 精品一区二区免费观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产免费视频播放在线视频| 大话2 男鬼变身卡| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 大码成人一级视频| 国产成人一区二区在线| 欧美成人一区二区免费高清观看| 男人舔奶头视频| 欧美成人午夜免费资源| 国国产精品蜜臀av免费| 看十八女毛片水多多多| 国产精品一区www在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲在线观看片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 九九在线视频观看精品| 久久99热6这里只有精品| 亚洲av.av天堂| 在线播放无遮挡| 欧美成人一区二区免费高清观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美成人午夜免费资源| 男女国产视频网站| 成人亚洲欧美一区二区av| 免费黄色在线免费观看| 亚洲伊人久久精品综合| 免费av观看视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲av二区三区四区| 国产成人aa在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲在线观看片| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲无线观看免费| 免费观看性生交大片5| 日本熟妇午夜| 丝袜美腿在线中文| 国产一区二区三区综合在线观看 | 久久99热这里只有精品18| 久久久a久久爽久久v久久| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 人妻一区二区av| 国精品久久久久久国模美| 波野结衣二区三区在线| 最后的刺客免费高清国语| 国产成人精品久久久久久| 国产成人aa在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲av成人精品一二三区| videos熟女内射| 久久久国产一区二区| 免费av观看视频| 久久99热这里只频精品6学生| 九草在线视频观看| 久久久久精品性色| 日本wwww免费看| 赤兔流量卡办理| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 18禁在线播放成人免费| 国产午夜福利久久久久久| 又爽又黄无遮挡网站| 国产av不卡久久| h日本视频在线播放| 少妇熟女欧美另类| 97超视频在线观看视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 乱系列少妇在线播放| www.色视频.com| 高清视频免费观看一区二区| 久久久久网色| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲熟女精品中文字幕| av专区在线播放| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久久久久久久久久丰满| 国产精品女同一区二区软件| 成人毛片60女人毛片免费| 国产久久久一区二区三区| 欧美性感艳星| 我的老师免费观看完整版| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲精品国产成人久久av| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 香蕉精品网在线| a级毛片免费高清观看在线播放| 高清午夜精品一区二区三区| 晚上一个人看的免费电影| 激情五月婷婷亚洲| 欧美三级亚洲精品| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 波野结衣二区三区在线| 美女高潮的动态| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲成人av在线免费| 国产69精品久久久久777片| 国产黄a三级三级三级人| 欧美日韩综合久久久久久| 极品教师在线视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 欧美丝袜亚洲另类| 啦啦啦在线观看免费高清www| 少妇高潮的动态图| 青春草国产在线视频|