核黃素含量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

劉丹天津市濱海新區(qū)塘沽街新港社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，天津　300456

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核黃素含量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

劉丹
天津市濱海新區(qū)塘沽街新港社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，天津300456

［摘要］實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制在實(shí)驗(yàn)室測(cè)定中起到重要作用，該次實(shí)驗(yàn)采用960型熒光光度計(jì)測(cè)定核黃素的熒光強(qiáng)度，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖，讀出所含核黃素含量的濃度，分別進(jìn)行精密度分析和準(zhǔn)確度分析，進(jìn)而判定實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度，精密度符合要求。說(shuō)明測(cè)定VB2藥片中核黃素含量的實(shí)驗(yàn)方法可靠。

［關(guān)鍵詞］質(zhì)量控制；核黃素；測(cè)定

在測(cè)定VB2藥片的核黃素含量的過(guò)程中，由于存在著由某些比較確定的原因引起的系統(tǒng)誤差和各種隨機(jī)因素引起的隨機(jī)誤差，使測(cè)得的結(jié)果不可能和真實(shí)值完全一致，誤差愈小則結(jié)果愈準(zhǔn)確。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，要采取減少誤差的有效措施，并需要用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法將分析數(shù)據(jù)予以適當(dāng)處理，以便能正確地評(píng)價(jià)分析結(jié)果的準(zhǔn)確度、精密度。

1　材料與方法

1.1材料

以市售吉林鹿王藥業(yè)生產(chǎn)的VB2為待測(cè)樣品，測(cè)定其中核黃素的含量。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器（1）960型熒光光度計(jì)；（2）電子天平。

1.2.2試劑（1）酸性水：取濃硫酸1.5 mL加蒸餾水稀釋至1 000 mL。（2）核黃素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（25 mg/L）精密稱(chēng)取25 mg的核黃素（分析純），然后用酸性水定容至1 000 mL，用棕色瓶盛裝，瓶子外用黑色塑料袋包裹，置于冰箱內(nèi)冷藏，備用，每間隔兩天重新配制；（3）核黃素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（1 mg/L）取核黃素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液4 mL，用酸性水稀釋到100 mL，用棕色容量瓶盛裝，瓶子外用黑色塑料袋包裹，臨用時(shí)配制；（4）維生素VB2片待測(cè)液取市售吉林鹿王藥業(yè)生產(chǎn)的VB2片（5 mg/片），用酸性水稀釋到1 000 mL，置于棕色容量瓶中，外面用黑色塑料袋包裹；（5）低亞硫酸鈉（Na2S2O4）；（6）維生素VB2片吉林鹿王藥業(yè)生產(chǎn)。

1.3方法

（1）采用960型熒光光度計(jì)，測(cè)定各個(gè)比色管中核黃素的熒光強(qiáng)度。如①空白品：20 mL酸性水；②標(biāo)準(zhǔn)品：取10 mL應(yīng)用液稀釋到100 mL后取20 mL。（0.1 mg/L）；③待測(cè)品：VB2稀釋到1000 mL（A液），取A液20 mL稀釋到1 000 mL后取20 mL。（0.1 mg/L）；④加標(biāo)樣品：10 mL標(biāo)準(zhǔn)+10 mL樣品，每天做一個(gè)批次，每次兩個(gè)平行樣，共做20批次。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖，在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出所含核黃素含量的濃度，分別進(jìn)行精密度分析和準(zhǔn)確度分析，并繪制準(zhǔn)確度控制圖與精密度控制圖。

（2）操作步驟。①配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：取7個(gè)50 mL容量瓶，用黑色塑料袋包裹后分別加入1～7 mL的核黃素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（1 mg/L），用酸性水稀釋到刻度，搖勻。②標(biāo)準(zhǔn)系列的熒光強(qiáng)度測(cè)定：嚴(yán)格按程序開(kāi)啟熒光光度計(jì)后預(yù)熱20 min，依次按照濃度從低到高的順序測(cè)量其熒光強(qiáng)度及加入低亞硫酸鈉后的熒光強(qiáng)度。③測(cè)定VB2藥片中核黃素含量：a.取8個(gè)25 mL的比色管用黑色塑料袋包裹至20 mL刻度線(xiàn)，分別標(biāo)注空白品、標(biāo)準(zhǔn)品、加標(biāo)樣品、待測(cè)品，分別取平行樣。b.嚴(yán)格按程序開(kāi)啟熒光光度計(jì)后預(yù)熱20 min，依次測(cè)定各個(gè)比色管的熒光強(qiáng)度及加入低壓硫酸鈉后的熒光強(qiáng)度。

2　結(jié)果

2.1核黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度測(cè)定值

以標(biāo)準(zhǔn)核黃素濃度為橫坐標(biāo)、熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（如圖1），VB2片待測(cè)液的濃度平均值C（VB2）為0.101 mg/L，則原待測(cè)液的濃度C（VB2）原=C（VB2）×100 mL/2 mL=5.05 mg/L。則藥片中VB2的含量就為C（VB2）原×1000 mL=5.05 mg/片。由核黃素標(biāo)準(zhǔn)系列得出回歸方程（r=0.997 52 P＜0.001）。

圖1　核黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖

2.220批次不同樣品的濃度

依次測(cè)定空白品，標(biāo)準(zhǔn)品，如標(biāo)樣品，待測(cè)品，并記錄數(shù)值。見(jiàn)表1。

表1　20批次不同樣品的濃度（mg/L）

2.3精密度分析

通過(guò)精密度控制圖分析該次實(shí)驗(yàn)精密度是否符合要求。精密度控制圖的繪制：記錄20批次樣品測(cè)定值，求出平均值）、標(biāo)準(zhǔn)差（S），并計(jì)算出中心線(xiàn)是縱坐標(biāo)為的、平行于橫軸的直線(xiàn)；分別為上下控制限；與-2S分別為上下警告限；以測(cè)定值為縱坐標(biāo)、樣品測(cè)定序號(hào)為橫坐標(biāo)繪圖。

2.4準(zhǔn)確度分析

通過(guò)待測(cè)樣品中核黃素含量的加標(biāo)回收率來(lái)判定該次實(shí)驗(yàn)中準(zhǔn)確度是否在控制之中。平均回收率=101.83%。經(jīng)測(cè)定1號(hào)樣品加標(biāo)回收率為100%，2號(hào)樣品加標(biāo)回收率為103.5%，3號(hào)樣品加標(biāo)回收率為103.55，4號(hào)樣品加標(biāo)回收率為103.3%，5號(hào)樣品加標(biāo)回收率為103.4%，6號(hào)樣品加標(biāo)回收率為100%，7號(hào)樣品加標(biāo)回收率為100%，8號(hào)樣品加標(biāo)回收率為100%，9號(hào)樣品加標(biāo)回收率為103.3%，10號(hào)樣品加標(biāo)回收率為103.4%，11號(hào)樣品加標(biāo)回收率為103.4%，12號(hào)樣品加標(biāo)回收率為103.4%，13號(hào)樣品加標(biāo)回收率為96.5%，14號(hào)樣品加標(biāo)回收率為95.6%，15號(hào)樣品加標(biāo)回收率為100%，16號(hào)樣品加標(biāo)回收率為100%，17號(hào)樣品加標(biāo)回收率為104.9%，18號(hào)樣品加標(biāo)回收率為105.8%，19號(hào)樣品加標(biāo)回收率為103.2%，20號(hào)樣品加標(biāo)回收率為103.4%。

3　討論

實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制雖然會(huì)增加一定的工作量，但它所換來(lái)的是數(shù)據(jù)可信性。所以要建立較全面的質(zhì)量控制，把所做的實(shí)驗(yàn)都加以控制，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性就十分有把握。樣品總標(biāo)準(zhǔn)差S（0.004 6）＜目標(biāo)值W（0.101），加標(biāo)樣總標(biāo)準(zhǔn)差S（0.004 9）＜目標(biāo)值W（0.005）；標(biāo)準(zhǔn)品總標(biāo)準(zhǔn)差S（0.005 5）＞目標(biāo)值W（0.005），但標(biāo)準(zhǔn)品總均方S2（0.3×10-4）/目標(biāo)值W2（0.0052）＜F（19，∝），所以加標(biāo)樣和標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的精密度均符合要求，平均加標(biāo)回收率為101.83%，在95%～105%之間。由準(zhǔn)確度控制圖可看出各點(diǎn)的分布情況：18個(gè)點(diǎn)的位置在中心線(xiàn)附近、上下控制限的區(qū)域內(nèi)浮動(dòng)，說(shuō)明測(cè)定工作的質(zhì)量處于較好控制水平；其中有2個(gè)點(diǎn)的位置在下警告限之外，但仍在下控制限的區(qū)域內(nèi)，提示可能存在誤差，但樣品測(cè)定結(jié)果尚可保留，準(zhǔn)確度符合要求。由精密度控制圖可看出各點(diǎn)的分布情況：20個(gè)點(diǎn)的位置在中心線(xiàn)附近、上下警告限之間的區(qū)域內(nèi)浮動(dòng)，說(shuō)明測(cè)定工作的精密度符合要求。實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的可能影響核黃素?zé)晒鈴?qiáng)度的因素：

①溶劑：該次實(shí)驗(yàn)所用溶劑為酸性水，主要考慮到核黃素極易分解，其在酸性條件下比較穩(wěn)定。

②溫度影響：在該次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室配有遮陽(yáng)窗簾，所用到的容器都已用黑色塑料袋包裹，避免實(shí)驗(yàn)過(guò)程中核黃素的分解，避光措施較好。

③激發(fā)光的照射對(duì)熒光強(qiáng)度的影響：實(shí)驗(yàn)測(cè)定過(guò)程中，要在放入比色皿前打開(kāi)蓋門(mén)，放入后立即讀數(shù)，以減少核黃素受激發(fā)光照射的時(shí)間，取出后立即關(guān)閉蓋門(mén)。

④溶液的pH值：該次實(shí)驗(yàn)所用的酸性水由于所需劑量較大，故如果多次配制易產(chǎn)生誤差，使酸性水的pH有所改變，會(huì)影響到測(cè)定結(jié)果。因此在該次實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)配好足夠的酸性水，保持酸性水的pH在5.6。由于濃硫酸比較粘稠，吸取濃硫酸時(shí)要盡量讓刻度吸管里的濃硫酸全部流下后再移走刻度吸管，以免濃硫酸殘留，影響測(cè)定結(jié)果。

⑤樣品濃度的影響：熒光分析應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行。

⑥試劑的配制對(duì)熒光強(qiáng)度的影響：由于實(shí)驗(yàn)中需要配制大量的溶液，故溶液配制的是否準(zhǔn)確直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。能否準(zhǔn)確無(wú)誤地配制溶液，就需要實(shí)驗(yàn)人員具有良好的操作技能及耐性。

4　結(jié)語(yǔ)

由準(zhǔn)確度控制圖、精密度控制圖可看出，實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度、精密度符合要求。說(shuō)明測(cè)定VB2藥片中核黃素含量的實(shí)驗(yàn)方法可靠、測(cè)定結(jié)果具有一定的準(zhǔn)確性和可靠性。

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［中圖分類(lèi)號(hào)］R927.2

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1672-5654（2016）03（b）-0108-03

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.08.108

收稿日期：（2015-12-19）