應(yīng)用藥敏紙片法指導(dǎo)獸醫(yī)臨床用藥體會(huì)

徐強(qiáng)

摘 要：藥敏試驗(yàn)是指對(duì)敏感性不能預(yù)測(cè)的分離菌株進(jìn)行試驗(yàn)，在體外測(cè)試病原微生物對(duì)抗菌藥物的敏感程度，以指導(dǎo)獸醫(yī)臨床合理選擇治療藥物的微生物學(xué)試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)是獸醫(yī)臨床工作中的一項(xiàng)基本技能，而藥敏紙片法是藥敏試驗(yàn)中最普遍的方法。該文主要通過(guò)實(shí)例介紹了藥敏紙片法在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用及其指導(dǎo)意義，供同行參考。

關(guān)鍵詞：藥敏試驗(yàn)；藥敏紙片法；耐藥性；接種培養(yǎng)

中圖分類(lèi)號(hào) S854.52 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2016）08-111-02

近年來(lái)，隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，畜禽養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，動(dòng)物疾病也隨之增加，呈現(xiàn)出更加復(fù)雜化的特點(diǎn)。細(xì)菌性疾病作為危害畜牧業(yè)發(fā)展的一類(lèi)重要疾病，目前呈現(xiàn)出了多種發(fā)病狀態(tài)。大多養(yǎng)殖戶由于飼養(yǎng)管理技術(shù)不高、動(dòng)物疫病的預(yù)防意識(shí)不強(qiáng)，再加上缺乏動(dòng)物臨床診療知識(shí)，對(duì)臨床發(fā)生的動(dòng)物疾病很難進(jìn)行準(zhǔn)確診斷和針對(duì)性的治療，一旦發(fā)病，不能對(duì)其發(fā)病原因進(jìn)行有效分析，導(dǎo)致盲目濫用抗生素，不但沒(méi)有控制病情，還造成了病情的延誤，而且產(chǎn)生了大量的耐藥菌株，不少耐藥菌株對(duì)多種抗生素產(chǎn)生耐藥性。筆者在臨床診療中遇到過(guò)很多次應(yīng)用抗生素治療細(xì)菌性疾病無(wú)效的情況。為了提高抗生素對(duì)細(xì)菌性疾病的治療效果，合理使用抗生素，獸醫(yī)工作者常用到藥敏試驗(yàn)來(lái)指導(dǎo)我們臨床用藥，而藥敏紙片法是藥敏試驗(yàn)中最普遍的方法，筆者常在臨床中應(yīng)用該方法收到了較為滿意的效果。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 藥敏紙片的制備 藥敏紙片法中使用的藥敏紙片市場(chǎng)上很容易購(gòu)買(mǎi)到，但也可自制，具體方法如下：取定性濾紙，用打孔器打成直徑6mm的圓形小紙片，根據(jù)實(shí)際需要制成相應(yīng)數(shù)量。以制成100片為例，將100片圓片放入清潔干燥的小瓶或小平皿中，包扎，經(jīng)15磅高壓滅菌15～20min后，置37℃溫箱中使其完全干燥。將供試驗(yàn)的抗菌藥物按其有效濃度稀釋成1mL，加入上述含有100片紙片的小瓶?jī)?nèi)，不時(shí)翻動(dòng)，使濾紙片與藥液充分混合，浸泡30min即可，置于37℃溫箱過(guò)夜或陰涼處干燥備用。在溫箱中的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免藥物失效。干燥完成后密封，放置冰箱中保存，切勿受潮，一般能保存4～6個(gè)月。

1.2 接種培養(yǎng) 取發(fā)病動(dòng)物的病料或組織（如心、血、脾、肝臟、淋巴結(jié)等）無(wú)菌接種到培養(yǎng)基中，在37℃溫箱中培養(yǎng)24h，挑選典型菌落備用。在超凈工作臺(tái)中或酒精燈旁，用接種環(huán)挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物，以劃線方式接種到固體培養(yǎng)基表面，或用無(wú)菌生理鹽水稀釋菌落，用蘸有菌懸液的無(wú)菌棉簽均勻涂布到固體培養(yǎng)基表面，蓋上平板，室溫放置數(shù)分鐘。然后用無(wú)菌鑷子將紙片粘貼于固體培養(yǎng)基表面，一定要注意紙片與培養(yǎng)基表面要完全接觸，各紙片中心間距應(yīng)大于24mm，并記錄每種藥敏紙片的位置。貼完后放置15min，再置于37℃溫箱中培養(yǎng)12～18h后觀察結(jié)果。必要時(shí)，可做2組平行試驗(yàn)，以致實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確。

1.3 結(jié)果判定 用抑菌圈的直徑（φ）表示，抑菌圈的直徑越大，抑菌效果越好。即抑菌圈直徑（φ）≥20mm者為高度敏感；抑菌圈直徑16≤（φ）<20mm者為中度敏感；抑菌圈直徑10≤（φ）<16mm者為低度敏感；抑菌圈直徑（φ）<10mm者為耐藥。

2 臨床實(shí)例

貴池區(qū)梅龍街道某一養(yǎng)雞場(chǎng)飼養(yǎng)肉雞1 100余只，2013年4月12日開(kāi)始發(fā)病，發(fā)病當(dāng)日為36日齡，4月13日上午10：00許，筆者到現(xiàn)場(chǎng)時(shí)，約有15%發(fā)病，已經(jīng)死亡8只，病雞表現(xiàn)為采食量下降，體溫升高，精神沉郁，羽毛松亂，離群呆立，縮頸閉眼，頭?？s于翅下，不愿走動(dòng)，排淡黃色或黃白色稀便，泄殖腔下方羽毛潮濕，污穢粘連，有的呼吸困難，張口伸頸，咳嗽、打嗆。解剖癥狀明顯的兩只雞，發(fā)現(xiàn)實(shí)質(zhì)器官充血、淤血；氣囊發(fā)炎，氣囊壁渾濁，有黃白色纖維素性滲出物；肝腫脹，有灰白色壞死灶；肺充血淤血；脾、腎臟腫大；心包積液，心外膜有散在出血點(diǎn)；腸炎腹水等癥狀，筆者根據(jù)臨床癥狀和病理變化懷疑是大腸桿菌感染（后經(jīng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和生化實(shí)驗(yàn)證實(shí)）。隨后將解剖的兩只雞取其心肝組織，于當(dāng)日上午11：00在貴池區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心實(shí)驗(yàn)室做了藥敏試驗(yàn)（藥敏紙片法），4月15日上午08：00，藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示該菌株對(duì)氟苯尼考和硫酸新霉素敏感，筆者隨即告知養(yǎng)殖戶把治療藥物更換為氟苯尼考和硫酸新霉素。治療效果明顯，4月13日10：00到15日08：00共死亡23只雞，15日當(dāng)天死亡9只雞，15日之后共死亡7只雞。

3 總結(jié)與體會(huì)

隨著新型致病菌的不斷出現(xiàn)，每種致病菌對(duì)不同的抗菌藥物的敏感性不同，同種細(xì)菌的不同菌株對(duì)同一抗菌藥物的敏感性也有差異，也就是說(shuō)再好的抗菌藥物和再好的獸醫(yī)人員，都不能保證所用的抗菌藥物是特效藥物，因此藥敏試驗(yàn)在獸醫(yī)工作中有著日益重要的實(shí)際意義。藥敏試驗(yàn)中的藥敏紙片法因其操作簡(jiǎn)單、成本較低的特點(diǎn)，被大多數(shù)獸醫(yī)工作者所青睞。該方法優(yōu)點(diǎn)如下：一是能夠經(jīng)濟(jì)、有效地測(cè)定細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感程度，指導(dǎo)獸醫(yī)臨床合理用藥，使獸醫(yī)工作者能夠及時(shí)準(zhǔn)確的用藥，避免了抗生素的濫用，既節(jié)約了藥物的使用，又縮短了動(dòng)物病程，給養(yǎng)殖戶挽回了許多不必要的損失；二是可以及時(shí)選擇敏感藥物治療動(dòng)物疾病，規(guī)范了抗菌藥物的使用，延長(zhǎng)了新藥的使用壽命，還可以為新研制藥物性能評(píng)估提供有價(jià)值的信息；三是可以及時(shí)掌握各種菌種和菌株的耐藥性，對(duì)流行病學(xué)調(diào)查建立監(jiān)控，同時(shí)采取相應(yīng)的措施預(yù)防和控制細(xì)菌性疾病的流行，為動(dòng)物疫病預(yù)防與控制機(jī)構(gòu)提供防治依據(jù)，有效控制區(qū)域性的細(xì)菌性疫病的發(fā)生。因此，獸醫(yī)工作人員要重視藥敏紙片法在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用。 （責(zé)編：張宏民）