丹龍醒腦方對腦缺血再灌注大鼠半暗帶區(qū)神經(jīng)細胞凋亡與即早基因表達的影響

曹澤標，陳昱文，劉旺華,3，周小青,3*，陳娉婷，李　花,3

（湖南中醫(yī)藥大學1.中醫(yī)診斷學科，2.中醫(yī)診斷學湖南省重點實驗室，3.數(shù)字中醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南長沙410208；4.第一附屬醫(yī)院，湖南長沙410007）

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丹龍醒腦方對腦缺血再灌注大鼠半暗帶區(qū)神經(jīng)細胞凋亡與即早基因表達的影響

曹澤標1,2,4，陳昱文1,2，劉旺華1,2,3，周小青1,2,3*，陳娉婷1,2,4，李花1,2,3

（湖南中醫(yī)藥大學1.中醫(yī)診斷學科，2.中醫(yī)診斷學湖南省重點實驗室，3.數(shù)字中醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南長沙410208；4.第一附屬醫(yī)院，湖南長沙410007）

〔摘要〕目的探討丹龍醒腦方對局灶性腦缺血再灌注大鼠大腦皮質(zhì)半暗帶（ischemic penumbya, IP）區(qū)神經(jīng)細胞凋亡與即早基因c-fos、c-jun、c-myc表達的關(guān)系。方法將48只雄性SD大鼠隨機均分為假手術(shù)組,腦缺血再灌注（模型）組,尼莫地平組及丹龍醒腦方小、中、大劑量組（丹小組、丹中組、丹大組）。后五組用線栓法制備大腦中動脈栓塞再灌注（MCAO/R）模型，再灌注24 h進行神經(jīng)功能缺損評分后，取缺血側(cè)大腦皮質(zhì)，采用原位末端標記法（TUNEL）檢測凋亡的神經(jīng)細胞，免疫組化法分別檢測c-fos、c-jun、c-myc蛋白。結(jié)果與假手術(shù)組比較，其余各組的神經(jīng)功能缺損評分、神經(jīng)細胞凋亡指數(shù)（AI）及cfos、c-jun、c-myc蛋白的積分光密度（IOD）值均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05，P<0.01）；與模型組比較，尼莫地平組和丹龍醒腦方各劑量組的神經(jīng)功能缺損評分、神經(jīng)細胞AI及c-fos、c-jun、c-myc蛋白的IOD值均減小，差異有統(tǒng)計學意義（P< 0.05，P<0.01）；尼莫地平組、丹龍醒腦方各劑量組組間比較，各指標差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結(jié)論丹龍醒腦方能顯著降低腦缺血后神經(jīng)功能缺損和減少神經(jīng)細胞凋亡，其機制可能與下調(diào)即早基因c-fos、c-jun和c-myc的表達有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕丹龍醒腦方；腦缺血再灌注；神經(jīng)細胞凋亡；即早基因

缺血性腦卒中是威脅中老年人健康的常見疾病，給患者、家庭和社會帶來了沉重的負擔，已經(jīng)成為我國重大的公共衛(wèi)生問題[1]。腦卒中后神經(jīng)細胞損傷主要表現(xiàn)為壞死和凋亡，而凋亡引起的損害更嚴重、更持久。因此，阻斷神經(jīng)細胞凋亡的病理生理過程，減少神經(jīng)細胞凋亡，已成為目前研究缺血性腦卒中治療的熱點。課題組前期研究表明丹龍醒腦方可通過抑制死亡受體通路和線粒體通路以減少神經(jīng)細胞凋亡[2-3]。國內(nèi)外研究顯示，即早基因（immediate early genes，IEGs）在腦缺血后神經(jīng)細胞凋亡的調(diào)控中具有重要作用[4-5]。本研究即在前期基礎(chǔ)上，從該方對即早基因c-fos、c-jun、c-myc表達的影響，進一步探討丹龍醒腦方抑制神經(jīng)細胞凋亡的機制。

1材料與方法

1.1藥物、試劑及主要儀器

丹龍醒腦方由丹參15 g，三七12 g，地龍6 g，遠志15 g，石菖蒲12 g，淫羊藿10 g，菟絲子12 g等藥物組成，購自湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，并經(jīng)藥劑科鑒定為道地藥材。飲片浸泡半小時，首煎加6倍水，水沸后文火煎60 min；第二煎加3倍水，水沸后文火煎30 min，兩次藥汁混合。濾過，于水浴鍋內(nèi)蒸發(fā)濃縮至含生藥1.6 g/mL，滅菌分裝，4℃冰箱冷藏。尼莫地平膠囊，海南普利制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號：131261。

1.2動物

SPF級健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量250～280 g，由湖南斯萊克景達動物實驗公司提供，許可證號：SCXK(湘)2013-0005，動物合格證號：43004700013639。動物飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學SPF級實驗動物中心，許可證號：SYXK（湘）2009-0001。飼養(yǎng)環(huán)境為多層層流架，恒溫20～26℃，濕度控制在40％～70％，12 h光照/12 h黑暗，以標準飼料喂養(yǎng)并自由飲用三級過濾純凈水，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后開始造模。

1.3分組及給藥

造模前稱重，取體質(zhì)量為（280±20）g的健康大鼠48只，被毛染色法編號。運用隨機數(shù)字表法將大鼠均分為假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組、丹小組、丹中組和丹大組，每組8只。六組大鼠均于造模前3 d開始給藥，1次/d，并于第4次給藥20 min后造模，造模成功后于再灌注6、12、18 h各給藥1次。丹中組每日給藥劑量根據(jù)70 Kg成人每日服用82 g生藥劑量進行換算[6]，得出大鼠每日生藥劑量約為7.4 g/Kg，丹小組劑量為3.7 g/Kg，丹大組為14.8 g/Kg。尼莫地平組每日給藥劑量為10.8 mg/Kg，臨用前將尼莫地平膠囊去殼，內(nèi)容物用蒸餾水配成適當濃度混懸液，以保證給藥體積與丹龍醒腦方各劑量組相同；假手術(shù)組和模型組予等體積蒸餾水灌胃。

1.4造模及模型評價

參考Longa等[7]建立大腦中動脈栓塞再灌注（middle cerebral artery occlusion/ reperfusion，MCAO/R）模型。用10％水合氯醛（3.5 mL/kg）腹腔注射麻醉后，仰臥位固定。頸正中切口，分離暴露左側(cè)頸總動脈、頸外動脈、頸內(nèi)動脈和翼顎動脈。結(jié)扎翼顎動脈，在距頸動脈叉1 cm處結(jié)扎頸外動脈，并于結(jié)扎處遠心端用電凝器灼斷，游離頸外動脈。動脈夾夾閉頸總動脈，提起頸外動脈游離端使其與頸內(nèi)動脈成一直線，于頸外動脈結(jié)扎處近心端約0.5 cm處剪一切口，將線栓蘸取肝素后，由切口向頸內(nèi)動脈插入至有輕微阻力感停止（18.0±0.5）mm，固定線栓，造模過程中注意記錄插線時間，2 h后拔線實現(xiàn)再灌注。大鼠清醒后自由進食、進水。假手術(shù)組除不插線外，全過程同其它各組。待再灌注2 h大鼠完全清醒后，采用盲法對其神經(jīng)功能缺損進行評分并記錄。神經(jīng)功能評分參照Longa等[7]的5分制評分標準進行：0分無神經(jīng)缺損癥狀；l分右前肢不能完全伸直；2分向右旋轉(zhuǎn)；3分向右側(cè)傾倒；4分不能行走或昏迷。分值越高，說明動物行為障礙越嚴重，1～3分者為成功模型，余剔除。剔除后致大鼠數(shù)目不能滿足實驗要求則及時補充，保證每組8只。

1.5取材

大鼠于再灌注24 h進行神經(jīng)功能評分后灌流取材。具體方法：打開胸腔，將灌流針從左心室插入至升主動脈并固定，在右心耳剪一小口放血。迅速注入肝素化生理鹽水約200 mL，當從右心耳流出的液體變清亮后，緩慢注入4％多聚甲醛，灌流固定至肝臟變硬后，取全腦放入4％多聚甲醛固定液中固定24 h，取腦缺血區(qū)冠狀切面2～3 mm，脫水、透明、浸蠟、包埋。制作腦部冠狀切片，切片厚度為4 μm，隔4片取1切片行TUNEL法及免疫組化法檢測。

馬克思主義創(chuàng)始人在《共產(chǎn)黨宣言》中指出，無產(chǎn)階級運動是為大多數(shù)人謀利益的運動，中國共產(chǎn)黨自成立之日起，就將為人民謀利益這一價值目標一以貫之于社會主義革命、建設(shè)和改革的實踐中。新時代下，“帶領(lǐng)人民創(chuàng)造美好生活，是我們黨始終不渝的奮斗目標，必須始終將人民的利益擺在至高無上的地位?！保?］(P44)作為物質(zhì)財富和精神成果的創(chuàng)造者，主體的一切創(chuàng)造成果應(yīng)該惠及全體人民、由全體人民共享，尤其要重視弱勢群體、貧困人口的生存狀況。為此，習近平同志提出“精準扶貧”，幫助困難群眾解決基本的物質(zhì)生活需求和精神文化需求，實現(xiàn)全體人民共同富裕。

1.6指標檢測

1.6.1神經(jīng)功能缺損評分各組于再灌注24 h取材前采用盲法進行神經(jīng)功能缺損評分，依據(jù)改良大鼠神經(jīng)功能缺損評分（masao-neurological severity scores, m-NSS）法[8]，從運動、感覺、平衡能力及生理反射對大鼠各項生理功能進行等級評分，正常計0分，異常者根據(jù)量表及嚴重程度計1～6分，各項累加，總分最高18分，分值越高表示神經(jīng)功能損害越嚴重。

1.6.2大腦皮質(zhì)缺血半暗帶區(qū)（ischemic penumbya, IP）區(qū)神經(jīng)細胞凋亡檢測采用TUNEL法。切片脫蠟至水，蛋白酶K室溫孵育15 min；破膜液破膜10 min；TdT和dUTP按1∶9混合加在切片上37℃水浴鍋孵育60 min；3％過氧化氫避光孵育20 min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；加適量converter-POD 37℃水浴鍋孵育30 min；DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片。同時設(shè)立陽性(加DNaseI,1 μg/mL)和陰性對照(不加TdT)。在顯微鏡高倍視野（×400）下觀察，經(jīng)圖像分析系統(tǒng)每個切片隨機選擇5個視野，計數(shù)陽性細胞數(shù)，以細胞核呈棕黃色著色并符合形態(tài)學上的特征改變，如染色體濃縮、核碎裂、核周有染色體聚集等為陽性細胞，并用凋亡指數(shù)(apoptotic index，AI)表示。AI=陽性細胞數(shù)／全部細胞數(shù)×100％，取其平均值。

1.6.3大腦皮質(zhì)IP區(qū)即早基因表達產(chǎn)物c-fos、cjun、c-myc蛋白檢測采用免疫組化法。切片脫蠟入水，0.1 mol/L的EDTA抗原修復液進行微波修復；3％過氧化氫室溫處理20 min以滅活內(nèi)源性過氧化物酶；每片滴加稀釋到相應(yīng)溶度的一抗50 μL，4℃過夜，每片滴加二抗50 μL，37℃孵育2 h，DAB顯色，蒸餾水終止顯色，脫水，二甲苯透明后中性樹脂封片。陰性對照實驗中采用磷酸鹽緩沖液代替一抗，其他步驟如上。每組內(nèi)每張切片隨機挑選5 個200倍視野進行拍照。拍照時盡量讓組織充滿整個視野,保證每張照片的背景光一致。應(yīng)用Image-Pro Plus6.0軟件選取相同的棕黃色作為判斷所有照片陽性的統(tǒng)一標準，對每張照片進行分析得出每張照片陽性細胞的積分光密度值（integrated optical density，IOD），IOD值越大，陽性表達越強。

1.7統(tǒng)計學方法

2結(jié)果

2.1各組神經(jīng)功能缺損評分比較

與假手術(shù)組比較，其余各組的神經(jīng)功能缺損評分均明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；與模型組比較，尼莫地平組、丹龍醒腦方各劑量組的評分均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；尼莫地平組、丹龍醒腦方各劑量組組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

2.2各組皮質(zhì)IP區(qū)神經(jīng)細胞凋亡的比較

與假手術(shù)組比較，其余各組AI明顯增大，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；與模型組比較，尼莫地平組、丹龍醒腦方各劑量組的AI均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05，P<0.01）；尼莫地平組、丹龍醒腦方各劑量組組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1、圖1。

表1　各組神經(jīng)功能缺損評分及AI比較　（±s，n=8）

表1　各組神經(jīng)功能缺損評分及AI比較　（±s，n=8）

注：與假手術(shù)組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P< 0.01。

組別假手術(shù)組模型組尼莫地平組丹小組丹中組丹大組劑量（g/Kg）--10.8×10-33.7 7.4 14.8 F P神經(jīng)功能缺損評分（分）0.0±0.0 11.7±2.5** 7.0±1.6**△△7.5±2.1**△△6.8±1.7**△△6.0±1.6**△△41.53 0.00 AI（％）4.65±2.33 40.46±5.87** 24.03±6.52**△△29.63±4.08**△25.46±4.43**△△22.37±6.25**△△140.09 0.00

2.3各組c-fos、c-jun、c-myc蛋白表達的比較

與假手術(shù)組比較，其余各組的c-fos、c-jun 及c-myc蛋白的IOD值均增大，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05，P<0.01）；與模型組比較，尼莫地IP，IP區(qū)細胞損害以凋亡為主要特征，但缺血半暗帶由于存在側(cè)支循環(huán)，缺血超早期尚有大量存活的神經(jīng)元，如果能在短時間內(nèi)，迅速恢復血流，則該區(qū)腦組織的損傷可逆，神經(jīng)細胞可存活并恢復功能。因此，及時挽救或減少IP區(qū)神經(jīng)細胞凋亡已成為治療缺血性腦卒中的關(guān)鍵[10]。

注：A、B、C、D、E、F分別代表假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組、丹小組、丹中組、丹大組。圖1　各組大鼠IP區(qū)神經(jīng)細胞凋亡的比較（TUNEL法，10×40，棕色為陽性細胞）

IEGs是細胞接受刺激后短時間內(nèi)表達的一族基因，在腦缺血后神經(jīng)細胞凋亡的基因調(diào)控中具有重要作用。IEGs家族主要包括fos、jun、myc和erg家族，被第二信使介導的相關(guān)過程激活后，數(shù)分鐘內(nèi)即可表達，并具有一定的時相性[11]。即早基因的表達產(chǎn)物主要為c-fos、c-jun、c-myc蛋白，它們具有DNA結(jié)合活性，充當?shù)谌攀?，直接或間接地激發(fā)其它一些持續(xù)存在時間較長的被稱為“晚效應(yīng)基因”的表達，從而發(fā)揮對神經(jīng)細胞凋亡的調(diào)控作用。其中，以c-fos、c-jun和c-myc最為重要。一般情況下，c-fos基因在許多組織都是低水平表達，但當受到如缺血、缺氧等外界刺激時，它的表達水平會有顯著的改變，可出現(xiàn)過度表達，其產(chǎn)物c-fos蛋白由胞質(zhì)轉(zhuǎn)入核內(nèi)，與c-jun基因的蛋白產(chǎn)物c-jun蛋白形成fos-jun異源二聚體，調(diào)節(jié)相應(yīng)遲發(fā)性基因的表達，促進細胞凋亡。有研究顯示，大鼠缺血再灌注24 h腦組織c-fos蛋白表達至高峰，與此同時神平組、丹龍醒腦方各劑量組的c-fos、c-jun及c-myc蛋白的IOD值均明顯減小，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；尼莫地平組、丹龍醒腦方各劑量組組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

表2　各組c-fos、c-jun和c-myc蛋白的IOD值比較?。ā纒，n=8）

表2　各組c-fos、c-jun和c-myc蛋白的IOD值比較　（±s，n=8）

注：與假手術(shù)組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，△△P<0.01。

組別假手術(shù)組模型組尼莫地平組丹小組丹中組丹大組劑量（g/Kg）--10.8×10-33.7 7.4 14.8 F P c-fos 394.6±88.0 1 670.2±192.2** 849.3±182.1**△△874.6±98.7**△△853.9±106.8**△△683.2±109.2*△△30.44 0.00 c-jun 38.0±18.5 583.4±60.2** 324.5±39.5**△△346.1±53.9**△△317.8±51.9**△△290.1±58.7**△△36.46 0.00 c-myc 560.9±251.7 6 946.5±1 135.2** 2 941.0±977.7**△△2 995.8±1 069.5**△△2 830.2±1 074.8**△△2 608.5±803.9*△△14.47 0.00

3討論

細胞凋亡的概念最早是由Kerr等[9]于1972年首次提出，是指生物體內(nèi)絕大多數(shù)細胞在一定的發(fā)育階段發(fā)生的由基因調(diào)控的、自主的、有序的死亡過程。在局灶性腦梗死病灶中，包繞在梗死灶周圍的是經(jīng)元凋亡也達高峰，表明c-fos的激活可進一步誘導神經(jīng)元凋亡，使神經(jīng)細胞凋亡數(shù)量明顯增加[5]。c-myc是調(diào)控細胞周期的重要基因，既可誘導細胞增生，也可介導細胞凋亡。細胞在c-myc基因作用下出現(xiàn)哪種結(jié)果，取決于細胞接受的外來信號[12]。高氏等[13]研究發(fā)現(xiàn)，c-myc蛋白和mRNA于再灌注6 h即開始出現(xiàn)，24 h達高峰，以后則呈下降趨勢；與之相應(yīng)的是，大鼠缺血再灌注損傷后6 h腦組織即有少量TUNEL陽性細胞，隨著再灌注時間的延長損傷區(qū)陽性細胞逐漸增多，24 h陽性細胞數(shù)達高峰，表明超急性期腦缺血再灌注這一不良信號能夠引起c-myc蛋白和mRNA表達增加，從而引發(fā)神經(jīng)細胞凋亡。

本研究通過線栓法成功復制了MCAO/R大鼠模型，采用常規(guī)的預給藥3 d和造模后頻繁給藥，并基于上述文獻對MCAO/R大鼠神經(jīng)細胞凋亡、即早基因表達于再灌注24 h達到高峰的認識，采取再灌注24 h取材觀察丹龍醒腦方對皮質(zhì)IP區(qū)神經(jīng)細胞凋亡與即早基因c-fos、c-jun和c-myc表達的影響。結(jié)果表明，丹龍醒腦方能顯著降低腦缺血后神經(jīng)功能缺損評分和減少神經(jīng)細胞凋亡，還能顯著下調(diào)c-fos、c-jun和c-myc的表達，提示下調(diào)即早基因的表達可能為丹龍醒腦方減少神經(jīng)細胞凋亡的機制之一。

丹龍醒腦方為周小青教授經(jīng)驗方，是抗缺血性腦損傷的臨床效方，用于治療腦卒中及其后遺癥已有多年。課題組十余年的研究也表明，該方對于缺血性腦損傷，不僅能促進神經(jīng)再生，還能多環(huán)節(jié)干預包括神經(jīng)細胞凋亡在內(nèi)的級聯(lián)反應(yīng)[14]，而本研究再一次驗證了該結(jié)論。丹龍醒腦方以丹參為君，田七、遠志、石菖蒲為臣，佐以地龍、淫羊藿、菟絲子，共奏活血通絡(luò)、化痰開竅、補腎溫通之功。研究表明，補腎活血化痰類方藥具有顯著的抗神經(jīng)細胞凋亡作用，對缺血再灌注腦組織損傷具有保護作用[15]。賈占紅等研究顯示，具有活血通絡(luò)功效的竹葉總皂苷可通過抑制c-fos、c-jun蛋白表達，從而減少腦缺血后神經(jīng)細胞凋亡[16]；辛隨成等發(fā)現(xiàn)中藥組和針藥結(jié)合組可通過下調(diào)c-myc的表達而抑制腦缺血損傷神經(jīng)細胞凋亡[17]，均與本研究結(jié)果一致?，F(xiàn)代藥理學也證實，三七總皂苷[18]、丹參酮ⅡA[19]、石菖蒲提取液[20]能有效地抑制腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)細胞凋亡，淫羊藿素有抗Aβ肽致大鼠原代培養(yǎng)神經(jīng)細胞凋亡作用[21]。研究還表明，三七皂苷Rg1、Rb1可通過抑制cfos、c-jun的表達而降低腦細胞凋亡[22]，丹參能抑制腦缺血后c-fos基因的表達而發(fā)揮腦保護作用[23]。而這些都可能是丹龍醒腦方減少神經(jīng)細胞凋亡及與下調(diào)即早基因表達有關(guān)的理論和物質(zhì)基礎(chǔ)。

綜上所述，丹龍醒腦方能顯著降低腦缺血后神經(jīng)功能缺損和減少神經(jīng)細胞凋亡，下調(diào)即早基因cfos、c-jun和c-myc的表達可能為其機制之一。本研究在前期基礎(chǔ)上進一步探索了丹龍醒腦方抑制神經(jīng)細胞凋亡的作用靶點和環(huán)節(jié)，為其臨床應(yīng)用提供了新的實驗依據(jù)，也有利于該藥新藥的開發(fā)。但由于只選取再灌注24 h對三個基因的表達進行平行觀察，因此該方對即早基因的時效動態(tài)變化和各基因之間相互作用的影響，還有待進一步探討。

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（本文編輯楊瑛）

Effects of Danlong Xingnao Prescription on Neural Cell Apoptosis and Expression of Immediate Early Gene in Schemic Penumbra of Rats with Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury

CAO Zebiao1,2,4, CHEN Yuwen1,2, LIU Wanghua1,2,3, ZHOU Xiaoqing1,2,3, CHEN Pingting1,2,4, LI Hua1,2,3
（1.Institute of Diagnostics in Chinese Medicine, 2.Provincial Key Laboratory of Diagnostics in Chinese Medicine, 3.Collaborative Center for Research and Innovation of Digital Chinese Medicine, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, Hunan 410208, China. 4.The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, Hunan 410007, China）

Abstract〔〕Objective To investigate the relationship of Danlong Xingnao Prescription (DLXNP) on neural cell apoptosis and expression of c-fos, c-jun and c-myc in ischemic penumbra of rats with cerebral ischemia-reperfusion injury (MCAO/R). Methods 48 male SD rats were randomly divided into the sham -operation group, cerebral ischemia-reperfusion injury (model) group, nimodipine group, small, medium, high dose of DLXNP groups. The middle cerebral artery occlusion/ reperfusion models were prepared by suture method. The neural function defect scale was evaluated after 24 hours of reperfusion, researchers carried out, and the ischemic side of brain cortex was taken out. The nerve cells of apoptosis were detected by using terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling (TUNEL) method, and the expression of c-fos, c-jun and c-myc was determined by immunohistochemistry. Results Compared with the operation group, the neural function defect scale, apoptotic index (AI) and integrated optical density (IOD) of c-fos, c-jun, c-myc were increased, the differences were statistically significant (P<0.05, P<0.01). Compared with model group, the neural function defect scale, AI and IOD of c-fos, c-jun, c-myc in nimodipine group and DLXNP groups were reduced (P <0.05, P <0.01); The defferences between nimodipine groupbook=2,ebook=5and different doses of DLXNP groups were not statistically significant in all indicators (P>0.05). Conclusion Danlong Xingnao pecipe can lower the neural function defect and reduced neural cell apoptosis, which may relate to the down -regulated expression of c-fos, c-jun and c-myc.

Keywords〔〕Danlong Xingnao prescription；cerebral ischemia reperfusion; neural cell apoptosis; immediate early genes

〔通訊作者〕*周小青，男，博士，教授，博士研究生導師，E-mail：zxq5381@sohu.com。

〔作者簡介〕曹澤標，男，在讀碩士研究生，研究方向為腦血管病的中醫(yī)診治。

〔基金項目〕國家自然科學基金項目（81373702，81473567，81202632）；教育部博士點基金項目（20124323120003）；湖南省自然科學基金（13JJ3097）；湖南省教育廳科研項目（14B134，15K092）；湖南中醫(yī)藥大學“一方”研究生創(chuàng)新項目（2015YF02）。

〔收稿日期〕2015-11-17

〔中圖分類號〕R285.5

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2016.04.001