4種藥物對烏鱧的急性毒性研究

于振海 朱永安 孟慶磊 朱樹人 王錫榮

摘 要：采用半靜態(tài)試驗方法研究了在水溫（28.3±1.5）℃、pH（8.01±0.12）、溶氧（4.6±0.5）mg/L條件下，敵百蟲、高錳酸鉀、硫酸銅、甲醛4種魚藥對烏鱧魚苗的急性毒性試驗。結(jié)果顯示：4種藥物96 h半致死濃度以硫酸銅的最低，為1.586 mg/L；甲醛的最高，為115.159 mg/L；4種藥物毒性大小依次為硫酸銅>敵百蟲>高錳酸鉀>甲醛；4種藥物的安全濃度大小依次為甲醛（35.529 mg/L）>敵百蟲（1.450 mg/L）>高錳酸鉀（1.277 mg/L）>硫酸銅（0.882 mg/L）， 其中，敵百蟲、甲醛和硫酸銅的安全濃度要高于常規(guī)用量，按照常規(guī)用量進行病害防治是安全的。高錳酸鉀的安全濃度在常規(guī)用量范圍內(nèi)，生產(chǎn)中可按照烏鱧對藥物的安全濃度進行病害防治。

關(guān)鍵詞：烏鱧；急性毒性；半致死濃度；安全濃度

中圖分類號：S948文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2016）05-0120-04

Abstract The acute toxicity of four kinds of drugs， dipterex， potassium permanganate， copper sulphate and formaldehyde， to larva of black-spot hybrid snakehead Channa argus were tested with the semi hydrostatic test method at the water temperature of （28.3±1.5）℃， pH of （8.01±0.12） and dissolved oxygen of （4.6±0.5） mg/L. The results showed that the median-lethal concentration （LC50） of copper sulphate for 96 hours was minimum of 1.586 mg/L， while that of formaldehyde was the highest of 115.159 mg/L. The toxicity of four drugs ranked in the order of copper sulphate， dipterex， potassium perman-ganate and formaldehyde. The safe concentration （SC） of four drugs ordered as formaldehyde （35.529 mg/L）， dipterex （1.450 mg/L）， potassium permanganate （1.277 mg/L） and copper sulphate （0.882 mg/L）. The SC of dipterex， formaldehyde and copper sulphate was higher than the conventional dosage， thus they were safe to be used to control corresponding diseases of Channa argus under the conventional dosage. The SC of potassium permanganate was in the conventional dosage range， so it could be used for disease prevention and control in accordance with the SC of Channa argus to drug in production.

Key words Channa argus； Acute toxicity； Median-lethal concentration （LC50）； Safe concentration（SC）

烏鱧（Channa argus）隸屬鱸形目鱧科鱧屬，俗稱有黑魚、孝魚、財魚、生魚 、蛇頭魚等[1]。烏鱧是一種適應(yīng)性強，對不良水溫、水質(zhì)及缺氧條件有較強耐受力，兇猛的肉食性名貴經(jīng)濟魚類，在江河湖塘等自然生態(tài)環(huán)境中很少發(fā)病。隨著烏鱧人工高密度養(yǎng)殖的發(fā)展，烏鱧各種疾病頻頻發(fā)生，主要病害有細菌性疾病、真菌性疾病和寄生蟲性疾病，常見的有腐皮病、腹水病、水霉病、小瓜蟲病和車輪蟲病，常造成嚴重的經(jīng)濟損失[2，3]。采用藥物進行病害防治是最直接、最有效和最經(jīng)濟的辦法[4]，有關(guān)水產(chǎn)藥物對魚類急性毒性研究表明，魚的種類不同、規(guī)格不同對藥物的安全濃度都存在一定差異[5]。用藥過程中因?qū)λ幬锏亩拘圆幻鳌舛仁褂貌划敹斐婶~中毒的情況時有發(fā)生[6]。

提高自身抵抗力是降低烏鱧發(fā)病的選擇之一，通過良種繁育獲得的選育群體能夠提高烏鱧對病害的抵抗力。山東省淡水漁業(yè)研究院以微山湖烏鱧為基礎(chǔ)群進行選育繁殖獲得了健康苗種，為研究烏鱧選育群體對常用水產(chǎn)藥物的耐受性，保證選育群體的病害防治過程中合理用藥，安全用藥，開展了烏鱧選育群體的常用水產(chǎn)藥物的急性毒性試驗。試驗針對烏鱧常見病害，如水霉病、小瓜蟲病、車輪蟲病等，選擇4種常用藥物對烏鱧選育群體苗種進行急性毒性試驗，以獲得4種常用藥物的安全濃度和毒性等級，從而確定合適的藥物及用藥濃度。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用魚體長（5.6±1.1） cm，體重（4.2±0.7） g。身體健康，游泳活潑，無病、無傷、無畸形。在試驗條件下暫養(yǎng)3 d，每天投食1次，試驗開始前24 h停止投食。

試驗用藥、藥品規(guī)格及生產(chǎn)廠家等見表1。

1.2 試驗條件

試驗在規(guī)格60 cm×40 cm×40 cm的白色塑料箱內(nèi)進行。時間為2015年9月7～18日，每個周期4 d。試驗用水為養(yǎng)殖場用深井水，水質(zhì)符合漁業(yè)水質(zhì)標準（GB11607-89），水溫（28.3±1.5）℃、pH值（8.01±0.12）、溶氧（4.6±0.5）mg/L。每箱盛水30 L，魚苗8尾，每日測一次水溫、pH值、溶氧。

1.3 試驗操作

采用半靜態(tài)試驗，參照盧玲等[7]的方法在室內(nèi)進行。試驗期間不投餌，甲醛具有揮發(fā)性，為保證藥液質(zhì)量濃度，每隔24 h 更換一次。試驗開始和結(jié)束時，測定試驗容器中受試物濃度。

1.3.1 預(yù)試驗 用以確定正式試驗所需濃度范圍。每個濃度組放入5條魚，用靜態(tài)方式進行，不設(shè)平行組，試驗持續(xù)48～96 h。每日至少兩次記錄各容器內(nèi)的死魚數(shù)，并及時取出死魚。

1.3.2 正式試驗 根據(jù)預(yù)試驗得出的結(jié)果，在包括使魚全部死亡的最低濃度和96 h魚類全部存活的最高濃度之間至少設(shè)置5個濃度組，以幾何級數(shù)排布，濃度間隔系數(shù)為2[8]。根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，得到的4種藥物正式試驗濃度（表2）。每個試驗濃度組設(shè)2個平行，每一系列設(shè)一個不投放藥物的空白對照。試驗溶液調(diào)節(jié)至相應(yīng)溫度后，從馴養(yǎng)魚群中隨機取出魚并隨機迅速放入各試驗容器中。同一試驗，試驗用魚在30 min內(nèi)分組完畢。

在24、48、72、96 h時檢查受試魚狀況，以試驗對象失去活力、對外界刺激無反應(yīng)為死亡標準[9]。應(yīng)在試驗開始后3 h或6 h觀察各試驗組魚苗的狀況，并記錄異常行為。

1.4 數(shù)據(jù)處理

半致死濃度（LC50）、安全濃度（SC）采用寇氏法計算[10]：

2 結(jié)果與分析

2.1 4種藥物對烏鱧魚苗的致死率

整個試驗過程中空白對照組沒有出現(xiàn)死魚現(xiàn)象，即致死率為零。敵百蟲、高錳酸鉀、硫酸銅、甲醛4種藥物對烏鱧的毒性試驗見表3。

敵百蟲、高錳酸鉀、硫酸銅和甲醛的最低濃度組96 h致死率分別為25%、6.25%、0、0。敵百蟲和硫酸銅最高濃度組24 h致死率均為18.75%，高錳酸鉀和甲醛最高濃度組24 h致死率均為100%。4種藥物最高濃度組96 h致死率均為100%。高錳酸鉀7.905 mg/L濃度組 和14.057 mg/L濃度組24 h致死率都達到100%（表3）。

烏鱧在敵百蟲藥液中中毒癥狀表現(xiàn)為對外界刺激反應(yīng)遲緩，上下游竄，逐漸失去平衡，最后死亡沉于箱底。烏鱧在高濃度敵百蟲藥液中開始時反應(yīng)并不劇烈，隨著時間延長才逐漸出現(xiàn)中毒癥狀，中毒癥狀出現(xiàn)時間相對較晚。死亡的烏鱧體色發(fā)白，體表粘液增多。敵百蟲濃度為10.000 mg/L時，烏鱧約6 h出現(xiàn)中毒癥狀，約8 h開始死亡，24 h致死率為18.75%，48 h致死率為87.50%，96 h致死率為100%。濃度為1.000 mg/L時，烏鱧無明顯中毒癥狀，24 h和48 h致死率均為零，96 h致死率為25.00%（表3）。

烏鱧在高錳酸鉀藥液中的中毒癥狀表現(xiàn)為不安，反應(yīng)比較劇烈，不停游竄，時而躍出水面，后趨于安靜，逐漸失去平衡，直至最后死亡。死亡后的魚體表皮破損，呈絮狀，顏色為紫黑色。高錳酸鉀濃度為25.000 mg/L時，魚苗約10 min即出現(xiàn)中毒癥狀，約0.5 h開始死亡，24 h致死率為100%。7.905、14.057、25.00 mg/L濃度組的24、48 h及96 h致死率均達到100%。2.500 mg/L濃度組24 h和48 h的致死率為零，約75 h出現(xiàn)死亡，96 h致死率為6.25%（表3）。

烏鱧在低濃度硫酸銅藥液中開始時無明顯反應(yīng)，隨著時間延長逐漸表現(xiàn)出中毒癥狀，逐漸失去平衡，初期能夠自行恢復(fù)正常姿態(tài)，后期徹底失去平衡，沉于箱底。放入高濃度組中時，需要較長時才出現(xiàn)中毒跡象，反應(yīng)出竄游不安，逐漸對外界刺激失去反應(yīng)，最后失去平衡，沉于箱底。當硫酸銅濃度為5.000 mg/L時，約5 h出現(xiàn)中毒癥狀，約9 h開始死亡，24 h致死率僅為18.75%，48、96 h致死率均為100%。0.500 mg/L濃度組24、48 h和96 h致死率均為零（表3）。

烏鱧在高濃度甲醛藥液中表現(xiàn)為焦躁不安，來回游竄，出現(xiàn)浮頭現(xiàn)象，初期對外界刺激能做出反應(yīng)，后期逐漸失去平衡，沉于箱底。死亡后魚體僵硬，鰓蓋擴張，口張開。低濃度組中烏鱧反應(yīng)較為平靜，高濃度組反應(yīng)劇烈，中毒癥狀很快就表現(xiàn)出來。試驗箱中甲醛濃度為300.000 mg/L時，約0.2 h開始出現(xiàn)中毒癥狀，約0.5 h魚苗開始死亡，24 h致死率達100%。191.683 mg/L濃度組24 h致死率也為100%。濃度為50.000 mg/L時，24、48 h和96 h致死率均為零（表3）。

2.2 4種藥物的半致死濃度（LC50）和安全濃度

根據(jù)式（1）和式（2）得到4種藥物的半致死濃度和安全濃度（表4）。敵百蟲和硫酸銅半致死濃度均為48 h>96 h>24 h，高錳酸鉀和甲醛半致死濃度均為24 h >48 h>96 h。4種藥物半致死濃度大小依次為甲醛>高錳酸鉀>敵百蟲>硫酸銅。4種藥物的安全濃度大小依次為甲醛（35.529 mg/L）>敵百蟲（1.450 mg/L）>高錳酸鉀（1.277 mg/L）>硫酸銅（0.882 mg/L）。

3 結(jié)論與討論

3.1 4種藥物對烏鱧的毒性評價

半致死濃度（LC50）用來衡量藥物對試驗魚毒性的大小，其值越小，藥物毒性越大；其值越大，毒性越低[11，12]。以96 h 為魚類急性毒性分級標準，分為極高毒（<1 mg/L）、高毒（1～10 mg/L）、中毒（10～100 mg/L）和低毒（>100 mg/L）4個等級[8]。本試驗中4種藥物對烏鱧96 h LC50值依次為甲醛>高錳酸鉀>敵百蟲>硫酸銅，按照藥物對烏鱧毒性大小依次為硫酸銅>敵百蟲>高錳酸鉀>甲醛。4種藥物中硫酸銅、敵百蟲和高錳酸鉀是高毒藥物，甲醛是低毒藥物。

4種藥物24、48 h和96 h致死率與濃度梯度均呈正相關(guān)，說明隨藥物濃度增加，藥物對試驗魚的毒性效應(yīng)也相應(yīng)增加。隨著試驗進行，魚苗24、48、96 h死亡率依次遞增，說明隨時間延長，4種藥物對試驗魚的毒性效應(yīng)相應(yīng)提高。

3.2 4種藥物對烏鱧的用藥安全

敵百蟲為膽堿酯酶抑制劑，能將膽堿酯酶的活性點磷酸化而抑制其活性，因其在魚體內(nèi)殘留量少、殘留時間短而被廣泛用于防治體外寄生甲殼類、單殖吸蟲及腸內(nèi)寄生的部分蠕蟲，常用劑量為0.2 ～0.5 mg/L[13]。試驗中敵百蟲對烏鱧的安全濃度為1.450 mg/L，高于常用劑量，但其在毒性分級標準中屬高毒，在烏鱧魚苗養(yǎng)殖過程中可選用該藥物進行病害防治，但需精確控制用藥劑量和用藥時間，注意觀察，謹慎使用。

甲醛具有廣譜性殺滅細菌、寄生蟲、真菌、芽孢和病毒的作用，已被廣泛應(yīng)用于水生動物疾病防治，且使用劑量較大，常規(guī)用量為10～30 mg/L[14]。試驗中，甲醛的安全濃度為35.529 mg/L，高于常規(guī)用量范圍，其毒性分級屬低毒，因此可以作為生產(chǎn)中病害防治藥物。甲醛使用成本較高，因此生產(chǎn)中一般用浸泡方式防治病害。

高錳酸鉀是一種常用的外用消毒藥物，具有很強的氧化性，一般作為消毒劑用來治療細菌、真菌、寄生蟲類等疾病和設(shè)施、工具的消毒，生產(chǎn)上常用遍灑濃度為1～2 mg/L[15] 。試驗中，高錳酸鉀對烏鱧的安全濃度為1.277 mg/L，處于常規(guī)用量范圍內(nèi)，因此高錳酸鉀可以作為烏鱧養(yǎng)殖過程中病害防治藥物，但試驗過程中烏鱧對高錳酸鉀反應(yīng)較為劇烈，所以注意控制使用劑量。

硫酸銅在生產(chǎn)中主要用于殺滅鞭毛蟲、車輪蟲、斜管蟲等寄生蟲，尤其對殺滅寄生于魚體體表及魚鰓的車輪蟲具有獨特作用[16]。硫酸銅常用潑灑濃度為0.5～0.7 mg/L[17]。試驗中，硫酸銅的安全濃度為0.882 mg/L，稍高于常規(guī)用量，因此硫酸銅可以作為烏鱧養(yǎng)殖過程中病害防治的藥物，但硫酸銅屬高毒藥物，使用時需注意觀察，謹慎使用。

4種藥物中敵百蟲、甲醛和硫酸銅的安全濃度要高于常規(guī)用量，按照常規(guī)用量進行病害防治是安全的，高錳酸鉀在常規(guī)用量范圍內(nèi)，生產(chǎn)中可按照烏鱧對藥物的安全濃度進行病害防治。該結(jié)果與徐德平等[18]研究結(jié)果不一致，分析原因可能是試驗條件不同、魚苗體質(zhì)規(guī)格差異、藥物有效成分含量以及試驗魚苗本身對藥物耐受性方面存在差異造成的，其中最主要的原因可能是烏鱧選育群體的魚苗對藥物有更強的耐受能力。在生產(chǎn)上選用藥物除了從藥物的半致死濃度和安全濃度上考慮之外，還需結(jié)合藥物的常用濃度及用藥時間綜合考慮。

參 考 文 獻：

[1]

朱林，李應(yīng)森，馮曉宇，等.烏鱧主要病害的診斷和防治[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2011，50（10）：2074-2077.

[2] 張培玉，姚淑敏，李桂芝.烏鱧常見疾病及防治 [J].經(jīng)濟動物學報，2003，7（1）：40-43.

[3] 吳同磊，單曉楓，王桂芹，等.烏鱧主要病害的研究進展[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2011（9）：29-31.

[4] 楊先樂，鄭宗林. 我國漁藥使用現(xiàn)狀、存在的問題及對策[J].上海水產(chǎn)大學學報，2007，16（4）：374-380.

[5] 施鋼，陳剛，張健東，等. 4種水產(chǎn)藥物對藍點笛鯛幼魚急性毒性試驗[J]. 南方水產(chǎn)科學，2011，7（3）：50-55.

[6] 楊鶯鶯，陳畢生，陳福華，等. 5種常用水產(chǎn)藥物對網(wǎng)紋石斑魚的急性毒性試驗[J].上海水產(chǎn)大學學報，2001，10（1）：93-96.

[7] 盧玲，宋福.魚類急性毒性試驗[J].生物學通報，2002，37（7）：52-53.

[8] 國家環(huán)境保護總局.水和廢水監(jiān)測分析方法[M].第四版. 北京：中國環(huán)境科學出版社， 2006：777-781.

[9] 周裕華，周文玉，潘桂平，等.4種常用藥物對松江鱸急性毒性試驗[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2012，40（11）：256-257.

[10]周禮敬，詹會祥，吳興兵，等.4種魚藥對昆明裂腹魚魚苗的急性毒性試驗[J]. 淡水漁業(yè)，2012，42（4）：26-30.

[11]李代金，黃輝，譚德清. 6 種常用漁藥對厚頜魴魚苗的急性毒性試驗[J].水生態(tài)學雜志，2009，2（6）：25-29.

[12]中國獸醫(yī)協(xié)會. 2011年執(zhí)業(yè)獸醫(yī)資格考試應(yīng)試指南（ 水生動物類）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011：282-301.

[13]黃志斌，胡紅.新編水產(chǎn)藥物應(yīng)用表解[M].南京：江蘇科學技術(shù)出版社，2004.

[14]弁洪民，唐黎，王新橋，等.4 種常用漁藥對鰱魚種的急性毒性試驗[J].淡水漁業(yè)，2010，40（5）：76-79.

[15]張永泉，尹家勝.四種藥物對哲羅魚的急性毒性試驗[J].水產(chǎn)學雜志，2007，20（2）：58-62.

[16]林啟存，陳武，周立偉，等.6種常見藥物對雜交鱧的急性毒性試驗[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2010，38（9）：4639-4641.

[17]邱郁春.水污染魚類毒性實驗方法[M].北京：中國環(huán)境科學出版社，1992： 50-56.

[18]徐德平，田習初，唐江山，等.6種常用藥物對烏鱧的急性毒性研究[J].內(nèi)陸水產(chǎn)，2000，25（5）：7-8.