不同區(qū)域小油桐種質(zhì)差異與ISSR分子標(biāo)記分析

于詠

摘 要 隨著社會(huì)的進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，我國(guó)的技術(shù)方面發(fā)生了很大變化。因此對(duì)于小油桐的研究有了很大的進(jìn)展，對(duì)于小油桐的種質(zhì)差異進(jìn)行了生物研究，與ISSR分子標(biāo)記相結(jié)合，進(jìn)而引出小油桐種質(zhì)差異與地域的關(guān)系，研究小油桐種質(zhì)差異是否與地域有關(guān)。就不同地域的小油桐進(jìn)行了研究，觀察導(dǎo)致小油桐發(fā)生種質(zhì)差異的原因，分別從不同的地區(qū)引進(jìn)小油桐，結(jié)果顯示：小油桐的種質(zhì)差異與地理位置沒有必然的聯(lián)系，

關(guān)鍵詞 小油桐；區(qū)域種質(zhì)差異；ISSR分子標(biāo)記

中圖分類號(hào)：S794.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：1673-890X（2016）15--02

對(duì)于小油桐產(chǎn)生種質(zhì)差異的原因有多種，其中認(rèn)為地域是一方面的原因。小油桐原產(chǎn)地是在美洲，但在我國(guó)的云南、廣西、海南等地均有大面積的種植，當(dāng)然在其他地區(qū)也有少數(shù)的種植[1，2]。小油桐種子的含油率是非常高的，且含有豐富的蛋白質(zhì)，最重要的是生長(zhǎng)速度快，發(fā)芽率高，這使小油桐的存活率很高。此外，小油桐是一種環(huán)保的植物，目前我國(guó)的原油是非常緊缺的，因此小油桐是理想的生產(chǎn)生物柴油的能源植物。

1 不同區(qū)域小油桐種質(zhì)資源的收集

本文通過對(duì)不同地區(qū)的小油桐進(jìn)行研究，并通過進(jìn)行ISSR分子標(biāo)記得出小油桐產(chǎn)生種質(zhì)差異的原因。根據(jù)種植面積的不同，收集的小油桐種子主要來自我國(guó)的臺(tái)灣、云南、貴州農(nóng)科院、江蘇沐陽、江西九江、湖北咸豐6個(gè)地區(qū)，見表1。此外，還有來自貴州、福建、重慶以及云南的小油桐樹苗，分別對(duì)這些小油桐種子和小油桐樹苗進(jìn)行注冊(cè)，主要是用來進(jìn)行ISSR分子標(biāo)記，其中注冊(cè)見表2。

對(duì)于來自不同地區(qū)的小油桐種子及小油桐樹苗進(jìn)行了收集，并進(jìn)行了編號(hào)，其目的主要是收集小油桐基因資源，選取有代表性的地區(qū)，而且該地區(qū)種植大面積的小油桐，在收集的過程中，要減少其他方面帶來的影響，這樣才會(huì)使結(jié)果更加準(zhǔn)確，減少誤差。要研究影響小油桐種質(zhì)差異是否與地域有關(guān)，需要做到的是保證其他條件相同，只考慮不同地域的小油桐，通過比較小油桐的種子形態(tài)特征、顆粒質(zhì)量以及含油率的測(cè)試，對(duì)小油桐種質(zhì)資源進(jìn)行ISSR分子標(biāo)記等，從而更好地得出小油桐與地域的關(guān)系。通過研究得出適合小油桐生長(zhǎng)的環(huán)境，為以后小油桐的開發(fā)利用奠下基礎(chǔ)，這樣既能培育出高品質(zhì)的小油桐，又能為國(guó)家?guī)砟茉次镔|(zhì)，還對(duì)我們國(guó)家的環(huán)保有著重要貢獻(xiàn)。

2 小油桐種質(zhì)資源的ISSR分子標(biāo)記

2.1 小油桐種質(zhì)的檢查與觀測(cè)

需要對(duì)于收集的小油桐種子進(jìn)行一定的處理，看看種子是否出現(xiàn)發(fā)霉或發(fā)芽等情況，對(duì)于出現(xiàn)上述情況的種子將不能使用，應(yīng)及時(shí)摒棄，否則會(huì)給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來影響，影響小油桐的最后測(cè)量結(jié)果，對(duì)于油桐的處理首先做的是利用天平進(jìn)行各取小油桐百粒質(zhì)量[3]，然后對(duì)小油桐進(jìn)行去皮，根據(jù)種子的質(zhì)量以及種仁的質(zhì)量得出小油桐種子的出仁率，對(duì)于小油桐種子的含油率可以使用粗脂肪測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，最后得出小油桐種子的出油率，在對(duì)小油桐種子進(jìn)行觀測(cè)時(shí)，要全面考慮各方面的原因，要及時(shí)處理可能會(huì)影響結(jié)果的問題。小油桐對(duì)于我國(guó)的發(fā)展有著非常重要的作用，利用它可以生產(chǎn)生物柴油，也可用來進(jìn)行生物防治，當(dāng)然還可以進(jìn)行環(huán)保，可以使我國(guó)的資源產(chǎn)生非常大的效益，可以預(yù)測(cè)，在未來一段時(shí)間內(nèi)，它將會(huì)得到更廣泛的應(yīng)用，將會(huì)用在生活的方方面面，這對(duì)我們的生活是非常有利的。

2.2 小油桐種質(zhì)資源的ISSR分子標(biāo)記

利用ISSR分子對(duì)小油桐種質(zhì)資源進(jìn)行分子標(biāo)記，進(jìn)行標(biāo)記的引物會(huì)出現(xiàn)不同的序列，當(dāng)然擴(kuò)增的條帶也不相同，對(duì)小油桐種質(zhì)資源進(jìn)行的ISSR分子標(biāo)記主要分為DNA提取和ISSR的PCR擴(kuò)增。首先需要做的就是提取小油桐的基因組總DNA，對(duì)得到的多條ISSR引物進(jìn)行篩選，最后得到幾條帶清晰，并重復(fù)性非常好的引物，對(duì)于PCR技術(shù)需要使用酶、緩沖液、引物、模板和PCR反應(yīng)程序等，最后需要用到的是電泳，對(duì)于生物電泳需要嚴(yán)格控制溫度，溫度或高或低都會(huì)給結(jié)果帶來很大的誤差，最后在凝膠成像儀上觀察照相，根據(jù)呈現(xiàn)出來的像進(jìn)行分析，在電泳圖上每一條帶作為一個(gè)標(biāo)記，代表一個(gè)結(jié)合反應(yīng)的位點(diǎn)，按照同一個(gè)水平位置擴(kuò)增條帶的出現(xiàn)與否進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，然后分別進(jìn)行標(biāo)記，在進(jìn)行標(biāo)記的過程中，會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問題，因此需要及時(shí)處理在進(jìn)行標(biāo)記的過程中出現(xiàn)的各種問題，并減少誤差。但是在實(shí)驗(yàn)的過程中會(huì)出現(xiàn)各種各樣的誤差，有些誤差是不可避免的，但是有些誤差是可以避免的，我們要盡量避免那些不必要的誤差，這樣才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。

3 對(duì)小油桐進(jìn)行ISSR分子標(biāo)記的結(jié)果與分析

3.1 小油桐種子形態(tài)以及百粒質(zhì)量和出仁率分析

從不同的地區(qū)收集的小油桐種子在形態(tài)上差別不大，但是種子在大小上存在一定的差異。從外形上看，云南引進(jìn)的小油桐種子較大，貴州引進(jìn)的小油桐種子最小，其余的居中，對(duì)從不同地域收集的種子進(jìn)行了縱橫徑測(cè)量，其中最長(zhǎng)的是云南引進(jìn)的種子，最小的是貴州引進(jìn)的小油桐種子，其余的都比較相近，從橫測(cè)量結(jié)果看，類似于縱徑，從百粒質(zhì)量方面來說云南的小油桐種子最重，同樣出油率也是最高的[4]，但是從臺(tái)灣引進(jìn)的小油桐種子出油率最低，這與臺(tái)灣種保存時(shí)間有關(guān)。綜上所述，可以發(fā)現(xiàn)云南的小油桐種子不僅種子較大，而且出油率也是非常高的，貴州種種子比較小，臺(tái)灣種出油率比較低，除了與保存時(shí)間有關(guān)之外，還與溫度有關(guān)，可以看出小油桐的種質(zhì)差異與地域存在一定的差異，但是不能判斷小油桐與不同地域有必然的聯(lián)系，當(dāng)然在進(jìn)行ISSR標(biāo)記的過程中，會(huì)出現(xiàn)誤差，因此結(jié)果還會(huì)存在一定的誤差，不能完全判斷小油桐與地域之間一定存在某種聯(lián)系。所以，要正確分析出現(xiàn)的問題以及研究的結(jié)果。最后結(jié)果得出：從我們收集的6種小油桐種子外觀來看：形態(tài)差別不大，但是個(gè)體差別較大，云南收集的小油桐種子性狀最佳，可以在合適的地區(qū)進(jìn)行推廣，可以進(jìn)行大面積的種植，這樣有利于我國(guó)小油桐的生產(chǎn)和利用。

3.2 小油桐ISSR分子標(biāo)記結(jié)果的分析

至今為止，ISSR分子標(biāo)記技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于很多的方面，主要是對(duì)遺傳多樣性進(jìn)行分析，并取得了很好的結(jié)果，用8條ISSR引物對(duì)收集的小油桐進(jìn)行PCR擴(kuò)增技術(shù)，在所用的引物中，其中有3條不能擴(kuò)增出明顯的多態(tài)性條帶，其余的5條引物可以，可以從得到結(jié)果看：可以明顯鑒別出來自臺(tái)灣、貴州以及重慶的小油桐種子，其中來自貴州的種子有著明顯的不同，說明我國(guó)不同地域種植的小油桐種子可能出自相近的種源，與所在的地理位置之間沒有很大的聯(lián)系，從結(jié)果可以推測(cè)出云南小油桐可能來自不同的地區(qū)，也可能是云南小油桐來自國(guó)外。以后還需要更多的進(jìn)行分析測(cè)試，同樣建立多個(gè)示范種植基地，這樣不僅可以相互參照，還有利于選出品種較好的小油桐，根據(jù)不同的需要進(jìn)行不同的改良；同時(shí)，要多方面考慮可能會(huì)出現(xiàn)的問題，遇到問題時(shí)，要及時(shí)解決不可推脫。根據(jù)小油桐本身的特性，可以知道小油桐是極具潛質(zhì)的能源物質(zhì)，此外，小油桐還是經(jīng)濟(jì)作物，小油桐可以用來生產(chǎn)生物柴油，這是非常重要的。

此外，小油桐也可以進(jìn)行水土防治以及生物防治，有利于環(huán)保，除了這些，小油桐還有很多的優(yōu)點(diǎn)，我們要利用這些優(yōu)點(diǎn)，可以結(jié)合具有優(yōu)良特性的小油桐進(jìn)行改良，通過示范種植，達(dá)到改良小油桐性狀的目的，在示范種植期間，要定期關(guān)注小油桐的生長(zhǎng)狀態(tài)，對(duì)于不同的小油桐種質(zhì)資源進(jìn)行不同的劃分，盡最大可能的培育出具有高油、高效的小油桐；同時(shí)，生產(chǎn)出具有不同用途的優(yōu)良品種，

4 結(jié)語

在我國(guó)，小油桐的覆蓋面積非常大，因此形成了豐富的生物資源。小油桐是極具潛質(zhì)的經(jīng)濟(jì)作物和能源產(chǎn)物，小油桐的用處非常廣泛，利用小油桐可以生產(chǎn)生物柴油，這會(huì)增加我國(guó)緊缺的能源物質(zhì)，此外，小油桐還可以藥物研制、生物防治、環(huán)保等。目前，小油桐已經(jīng)應(yīng)用于我國(guó)很多的領(lǐng)域，本文通過對(duì)不同地區(qū)采集的小油桐種質(zhì)資源ISSR標(biāo)記的分析，可以為以后的小油桐培育打下一定的基礎(chǔ)，改良出能夠進(jìn)行生物防治及高級(jí)凈化等不同用途的優(yōu)良品種。

參考文獻(xiàn)

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[2]向青.川渝地區(qū)油桐種質(zhì)資源評(píng)價(jià)和核心種質(zhì)的初步構(gòu)建[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[3]朱炳耀，楊志敏，莊志鴻，等.不同區(qū)域小油桐種質(zhì)差異與ISSR分子標(biāo)記研究[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，4（15）：68-69.

[4]賈寶光.油桐SSR分子標(biāo)記的開發(fā)與遺傳多樣性的研究[D].長(zhǎng)沙：中南林業(yè)科技大學(xué)，2015.

（責(zé)任編輯：劉昀）