XPD基因多態(tài)性與廣西壯族人群肝癌家族聚集性的關(guān)系

胡洪波,唐超莉,李永標,覃文辦,陸文西 (崇左市人民醫(yī)院，廣西崇左532200)

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·臨床研究·

XPD基因多態(tài)性與廣西壯族人群肝癌家族聚集性的關(guān)系

胡洪波,唐超莉,李永標,覃文辦,陸文西 (崇左市人民醫(yī)院，廣西崇左532200)

摘要：目的研究著色性干皮病基因D(XPD基因)基因多態(tài)性與壯族人群肝癌家族聚集性的關(guān)系。方法 于廣西肝癌高發(fā)區(qū)選取18個肝癌高發(fā)家族成員178例(高發(fā)組)及相對應(yīng)的18個無腫瘤家族成員178例(對照組)為研究對象，用流行病學(xué)問卷調(diào)查的方法收集肝癌相關(guān)因素，同時現(xiàn)場采集空腹外周血10 mL，用PCR-RFLP法檢測XPD基因。結(jié)果高發(fā)組與對照組在性別、年齡構(gòu)成、吸煙、主食玉米方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。高發(fā)組HBsAg陽性攜帶者74例，HBsAg陽性率為41.6%，對照組HBsAg陽性攜帶者31例，HBsAg陽性率為17.4%，兩組HBsAg陽性攜帶者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.374，P<0.001)。高發(fā)組TG基因型的分布與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。高發(fā)組G等位基因的分布與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論 XPD751基因多態(tài)性與壯族人群肝癌家族聚集性密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞：原發(fā)性肝癌；著色性干皮病基因D；易感性

原發(fā)性肝癌是世界第六位最常見的癌癥[1],在中國,肝癌是癌癥死亡的第二大原因，占所有癌癥的19.33%[2]。廣西是我國主要的肝癌高發(fā)地區(qū)，肝癌病死率一直位居各種惡性腫瘤的首位[3,4]，是國內(nèi)肝癌高發(fā)的幾個省(區(qū)、直轄市)之一，崇左市扶綏縣是廣西乃至全國的肝癌高發(fā)地區(qū)，所居住人群多數(shù)為壯族人群。諸多危險因素可誘發(fā)肝癌的發(fā)生，如乙型肝炎病毒感染、黃曲霉毒素感染、吸煙、大量飲酒[5]。此外，基因多態(tài)性在肝癌遺傳易感性中扮演重要角色。DNA修復(fù)系統(tǒng)對于維持機體的遺傳穩(wěn)定有關(guān)鍵作用，其可逆轉(zhuǎn)由內(nèi)外環(huán)境因素導(dǎo)致的DNA突變。某些修復(fù)基因位點的多態(tài)性可能導(dǎo)致DNA修復(fù)能力的改變，從而使惡性腫瘤如肝癌發(fā)生的危險性增加。NER是主要的DNA修復(fù)系統(tǒng)，而XRCC1和XPD基因是NER系統(tǒng)中2個主要修復(fù)基因，它們的基因多態(tài)性與DNA損傷修復(fù)改變密切相關(guān)，可導(dǎo)致多種癌癥的發(fā)生，如肺癌、腸癌、食管癌等[6]。2012年研究表明著色性干皮病基因D(XPD基因)與原發(fā)性肝癌的易感性密切相關(guān)[7]。本研究選取肝癌高發(fā)家族成員及相對應(yīng)的無腫瘤對照家族成員為研究對象，分析XPD基因型及等位基因的分布頻率與肝癌易感性的關(guān)系，探討個體遺傳因素與肝癌家族聚集性發(fā)生的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料肝癌家族病例組及對照組選擇標準：本研究中的肝癌家族定義是指在研究對象的血緣直系親屬成員中，至少有1例(或1例以上)肝癌患者，要求肝癌患者均分布在三代之內(nèi)。本研究中的對照組是指與肝癌家族組生長環(huán)境相似，未出現(xiàn)過癌癥死亡或癌癥現(xiàn)癥病例，調(diào)查范圍不小于三代。研究對象按上述肝癌家族病例組及對照組的標準，于2010年5月～2011年11月在廣西崇左市江州區(qū)及扶綏縣肝癌高發(fā)現(xiàn)場，首先對篩查對象進行知情同意簽字及流行病學(xué)問卷調(diào)查。共選取肝癌高發(fā)家系18個178例(高發(fā)組)，HBsAg陽性74例，陰性104例。按照對照組的標準在每個肝癌家族所在的自然村(街道)對應(yīng)選取1個無腫瘤家族作為對照組，要求其家庭成員構(gòu)成與高發(fā)組相似，共選取及相應(yīng)對照無癌家系18個178例，HBsAg陽性31例，陰性147例。研究對象均要求為壯族人口，在當?shù)鼐幼r間不少于10年。高發(fā)組和對照組在性別、年齡構(gòu)成、吸煙、主食玉米方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2XPD基因分型檢測檢測技術(shù)為北京博奧生物有限公司Sequenom Mass ARRAY SNP基因型分析技術(shù)。芯片點樣使用SEQUENOM公司MassARRAY Nanodispenser RS1000點樣儀；質(zhì)譜檢測及分析采用SEQUENOM公司MassARRAY Analyzer Compact系統(tǒng)。SNP分型檢測的主要試劑均購自SEQUENOM公司。采用Promega公司DNA提取試劑盒進行DNA模板的提取。XPD基因引物為F:5′-ACGTTGGATGCACCAGGAACCGTTTATGGC-3′，R:5′-ACGTTGGATGAGCCTGGAGCAGCTAGAATC-3′，擴增引物長度為 200 bp。PCR的反應(yīng)體積為10 μL，反應(yīng)步驟及條件：94 ℃預(yù)變性15 min;94 ℃變性20 s, 56 ℃退火30 s, 72 ℃延伸1 min, 進行30個循環(huán); 最后72 ℃延伸3 min。對PCR產(chǎn)物進行純化，SAP純化體積為7 μL，37 ℃中反應(yīng)40 min，85 ℃中反應(yīng)5 min。然后進行單堿基的延伸，延伸反應(yīng)體積為9 μL。單堿基延伸分2階段雙循環(huán)，每40個周期為一個大循環(huán)，52 ℃退火5 s及80 ℃擴展5 s進行5個小循環(huán)，然后返回94 ℃變性5 s后進入下一大循環(huán)?？傃h(huán)數(shù)為5×40=200循環(huán)。每個延伸反應(yīng)產(chǎn)物采用6mg Clean Resin樹脂純化。將純化產(chǎn)物移至384孔Spectro CHIP 芯片上，然后上機測定。Spectro CHIP芯片使用基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF)分析，檢測結(jié)果采用TYPER4.0軟件分型并進行輸出結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。高發(fā)組和對照組的XPD基因型和等位基因分布比較采用χ2檢驗進行分析，計算相對危險度(OR)及其95%可信區(qū)間(95%CI)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

高發(fā)組TG和TG+GG基因型的分布與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P均<0.05)。高發(fā)組G等位基因的分布與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

表1　兩組rs13181位點多態(tài)性分布比較[例(%)]

3討論

XPD是一種ATP依賴的DNA解螺旋酶，是NER修復(fù)系統(tǒng)中關(guān)鍵基因，同時還參與組成Ⅱ型轉(zhuǎn)錄因子H( TFⅡH)復(fù)合物及p53介導(dǎo)的凋亡反應(yīng)，是一個多功能的基因。XPD多態(tài)性的功能意義可能是影響其蛋白的合成，從而影響后者與p44 (TFIIH的另一個亞單位)的交互作用，降低解旋酶活性；NER功能缺陷，導(dǎo)致DNA修復(fù)能力下降而增加腫瘤的易感性。研究[8]發(fā)現(xiàn)，XPD較常見的多態(tài)性突變發(fā)生在密碼子156、312、711、751上。其中XPD751的Lys→Gln是XPD基因SNP中研究較多的一個，該位點多態(tài)性來源于35931位點嘌呤A到嘧啶C的核苷酸突變。多數(shù)研究[9,10]認為，XPD751與癌癥的易感性有關(guān)。最近的Meta分析顯示XPDlys751Gln基因多態(tài)性可能是潛在肝癌易感性的一種標志物，XPDlys751Gln和Asp312Asn基因多態(tài)性可能是亞洲人群肝癌易感性的危險因子[11]。Wu等[12]對218例肝癌和277例健康對照組的觀察研究發(fā)現(xiàn)，攜帶XPD751GG基因型人群有更高患肝癌的風(fēng)險(OR=2.97,95%CI=1.26～7.38)。COX回歸分析發(fā)現(xiàn)攜帶XPD751Gln/Gln基因型有0.3倍患肝癌風(fēng)險。

本研究在廣西肝癌高發(fā)區(qū)選擇肝癌高發(fā)家族178例家族成員和無瘤對照組家族178例家庭成員，研究對象均為壯族人群，廣西肝癌高發(fā)組和對照組在一般人口學(xué)特征上有良好的均衡性，而XPD751基因型及等位基因的構(gòu)成分布上存在差異。高發(fā)組和對照組家族在TG基因型上差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；且在G等位基因上差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。個體攜帶XPD751TG基因型患肝癌風(fēng)險性更高(OR=2.325, 95%CI=1.206-4.481)。這與Wu等[12]得出的XPD基因多態(tài)性與肝癌易感性相關(guān)一致，但與在基因型的表達差異上有不同，可能與本研究為壯族人群有關(guān)，其機制還有待進一步研究。XPD基因致肝癌易感性增加的機制可能為XPD 基因多態(tài)性使解螺旋酶的活性下降，會導(dǎo)致核苷酸修復(fù)功能缺陷、DNA 修復(fù)能力下降，從而使肝癌的發(fā)生風(fēng)險增加。壯族人群肝癌高發(fā)人群較對照組人群較易發(fā)生肝癌與XPD751基因多態(tài)性密切相關(guān)。

本實驗通過對XPD基因與肝癌的遺傳易感性關(guān)系的研究，發(fā)現(xiàn)壯族人群肝癌的易感性與XPD基因多態(tài)性密切相關(guān)。在肝癌高發(fā)地區(qū)，肝癌的發(fā)生與基因的多態(tài)性密切相關(guān)，為民族地區(qū)肝癌高發(fā)的發(fā)病原因及原發(fā)性肝癌的防治提供相關(guān)理論依據(jù)。

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(收稿日期：2015-10-24)

中圖分類號：R735.7

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)13-0033-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.13.012

基金項目：廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費科研課題(Z2011093)；崇左市科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目(攻201210)。