槲樹葉總黃酮片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

趙森姜黎鄒明

（大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院配夜中心，大連　116001）

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槲樹葉總黃酮片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

趙森姜黎鄒明*

（大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院配夜中心，大連116001）

摘要：目的制定槲樹葉總黃酮片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。方法采用高效液相色譜法測定槲樹葉總黃酮片中槲皮素含量，并采用其他方法對其硬度、崩解時間等進(jìn)行考察，確定其初步質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果制定槲樹葉總黃酮片的有關(guān)檢查項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)及含量測定方法、含量限度。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法，在現(xiàn)行的色譜條件下，測定槲樹葉總黃酮片中槲皮素的含量，方法簡單快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，回收率滿意，操作簡單可行且能提高工作效率，對槲樹葉總黃酮片質(zhì)量評價具有重要意義，并對該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步制定提供理論依據(jù)和科學(xué)參考。

關(guān)鍵詞：槲樹葉；總黃酮；槲皮素；HPLC

槲樹葉，又名槲若，為殼斗科(Fagaceae)櫟屬(Quercus L．)植物槲樹(Quercus dentata Thunb.)的干燥葉。味甘苦，平，無毒，歸脾、胃、肺、大腸經(jīng)。有止血、清熱利尿之功效。本實(shí)驗(yàn)按照最佳提取、純化工藝及成型工藝流程，制備3批次槲樹葉總黃酮片。其批號分別設(shè)為201301、201302、201303。對其質(zhì)量進(jìn)行檢查，初步確定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1　儀器與試藥

CP225D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；CQ-250超聲波清洗器（上海超聲儀器廠）；Agilent液相色譜儀；安捷倫色譜工作站；KQ3200超聲波清洗器(江蘇昆山)；槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號：848-9901)；槲樹葉，自采于丹東東港，經(jīng)鑒定為殼斗科植物槲樹的葉；甲醇、乙腈為色譜試劑，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1性狀經(jīng)對三批外觀性狀檢查，檢測結(jié)果見表1。

表1　外觀性狀檢查結(jié)果

根據(jù)上述測定結(jié)果，確立本品為棕紅色薄膜衣片，去除衣層后，片芯呈棕色或棕褐色，氣微，味淡。

2.2重量差異檢查取本品20片，精密稱定各片的重量，每片重量與標(biāo)示量0.2 g相比較，超出重量差異限度的藥片不得多于2片，并不得有1片超出限度的一倍。按上法進(jìn)行檢查，測定結(jié)果見表2。

表2　裝量差異檢查結(jié)果

測定結(jié)果表明，本品重量差異符合片劑項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。

2.3崩解時限檢查按2010版《中國藥典》一部附錄ⅫA片劑項(xiàng)下檢測方法，對樣品崩解時限進(jìn)行檢查，檢查結(jié)果見表3。

表3　崩解時限檢查表

測定結(jié)果表明，本品崩解時限檢查結(jié)果符合片劑項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定。

3　含量測定

3.1測定指標(biāo)與測定方法的確立槲樹葉總黃酮片為槲樹葉經(jīng)50%乙醇提取，經(jīng)濾過，濃縮，純化，干燥，擬以高效液相色譜法（紫外檢測器最大吸收波長）測定槲樹葉中槲皮素含量，在選定的色譜條件下，供試品溶液中槲皮素與相鄰組分分離度良好，經(jīng)方法學(xué)考察，方法的重復(fù)性、穩(wěn)定性、精密度、回收率試驗(yàn)均符合有關(guān)規(guī)定，因此確立本藥材含量指標(biāo)為槲皮素，測定方法為高效液相色譜法。

3.2供試品溶液的制備取本品片劑，去除衣層，研碎，精密稱取0.1 g，至具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱重，超聲30分鐘，放涼，稱重，用甲醇補(bǔ)足重量，然后用濾紙濾過，再用0.45 μm的濾膜濾過，精密吸取濾液2～25 ml容量瓶中，甲醇定容制刻度，混勻，即得供試品溶液。

3.3線性范圍考察取槲皮素對照品溶液，分別精密吸取3、6、9、12、15 μl，其回歸方程為：y=33.662x+ 19.526 (r=0.9997)，槲皮素在0.01668～0.08340 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.4精密度試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果表明精密度良好。

3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8 h進(jìn)樣測定，結(jié)果各峰的峰面積和保留時間的RSD均小于3.0%(n=6)。表明穩(wěn)定性良好。3.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一樣品5份，按照供試品溶液制備方法制備，分別進(jìn)樣測定，結(jié)果各峰的峰面積和保留時間RSD均小于3.0%(n=6)。表明重復(fù)性良好。

3.7加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知準(zhǔn)確含量的本品（含量0.01616 mg/g）六份，每份0.5 g。分別置25 ml量瓶中，精密加入槲皮素對照品溶液（0.00556 mg/ml）12.5 ml，加甲醇稀釋至刻度。在上述色譜條件下進(jìn)樣10 μl，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本方法槲皮素的回收率為97.9%，RSD%為1.46%。

3.8樣品含量測定取樣品按3.2項(xiàng)下制備成供試品溶液，精密吸取供試品溶液、對照品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀中，樣品中槲皮素的含量為0.126 mg/片。

4　結(jié)論與討論

單因素考察煎煮、超聲提取、回流提取等方法，發(fā)現(xiàn)樣品粘稠很難濾過，不適宜煎煮和超聲提取，甲醇回流提取充分，提取率高。通過預(yù)實(shí)驗(yàn)先后選用甲醇-水溶液、乙腈-水溶液等為流動相，結(jié)果以前者為流動相，比例為55∶45時槲皮素的峰型最好，與其相鄰組分分離度都可達(dá)到要求。比較了365 nm和280 nm的檢測波長，結(jié)果發(fā)現(xiàn)槲皮素在365 nm處吸收較好。并且與其他成分有較好的分離，其他成分對槲皮素的干擾較少，故選擇365 nm處作為吸收波長。本品性狀為棕紅色薄膜衣片，去除衣層后，片芯呈棕色或棕褐色，氣微，味淡。片重0.2 g，重量差異、崩解時限符合片劑項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定。含量測定在現(xiàn)行的色譜條件下，測定槲樹葉總黃酮片中槲皮素的含量，方法簡單快速，結(jié)果準(zhǔn)確可。對槲樹葉總黃酮片質(zhì)量評價具有重要意義，并對該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步制定提供理論依據(jù)和科學(xué)參考。

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Study on the Quality Standard of Oak Leaf Flavonoids

ZHAO Sen, JIANG Li, ZOU Ming
(The Affiliated Zhongshan Hospital of Dalian University, Liaoning Province, Dalian 116001, China)

Abstract：Objective To develope the quality standard of oak leaf flavonoids. Methods Using high performance liquid chromatography oak leaf content of total flavonoids quercetin film, and other methods of hardness, disintegration time were investigated to determine its initial quality standards. Results The inspection program standards, determination methods and content limits of oak leaf flavonoids were developed. Conclusion The HPLC method was used in the present chromatographic conditions, the determination of oak leaves flavonoids quercetin in the film, which is easy, quick, accurate and reproducible, and had satisfactory recovery. The operation is simple and feasible, and can improve the efficiency. It is of great significance to the evaluation of the quality of total oak leaf flavonoids, and the preparations for further development of quality standards to provide the theoretical basis and scientific reference.

Keywords:oak leaves; total flavonoids; quercetin; HPLC

收稿日期：（本文編輯：張文娟本文校對：鄒明2016-01-22）

*通訊作者：zsyyyjk@sina.com

doi:10.3969/j.issn.1672-2779.2016.08.067

文章編號：1672-2779（2016）-08-0143-02