趨化因子與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)性的臨床研究

楊素娟　趙志明　王瑋　崔娜　郝桂敏

050000　石家莊市，河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科

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·論著·

趨化因子與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)性的臨床研究

楊素娟趙志明王瑋崔娜郝桂敏

050000石家莊市，河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科

【摘要】目的研究血清中趨化因子與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性,探討主動(dòng)免疫治療原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(URSA)患者療效的可能機(jī)制。方法選擇就診的URSA患者60例，以正常非孕、正常妊娠組各20例為對(duì)照。免疫治療前后抽取肘靜脈血3 ml，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中正常T細(xì)胞活化后表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)蛋白(RANTES)、白介素-8(IL-8)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)水平。結(jié)果URSA患者血清中3種趨化因子水平明顯低于正常非孕組、正常妊娠組(P<0.05或<0.01),而正常非孕組與正常妊娠組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；URSA患者治療后，3種趨化因子水平明顯上升(P<0.01)；持續(xù)妊娠組在治療前后3種趨化因子水平發(fā)生明顯持續(xù)性改變(P<0.05)，以RANTES最為明顯(P<0.01)，而非持續(xù)妊娠組變化不明顯(P>0.05)。結(jié)論趨化因子水平變化可以做為免疫治療URSA患者療效評(píng)價(jià)的指標(biāo)，尤其是RANTES水平，為早期診斷URSA患者及免疫治療提供理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】流產(chǎn),復(fù)發(fā)性；趨化因子；免疫治療

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(recurrent spotaneous abortion，RSA)是指連續(xù)2次或2次以上的自然流產(chǎn),其發(fā)生率約為5%[1，2]。發(fā)病原因復(fù)雜,少數(shù)患者找到的原因可能有遺傳因素、解剖異常、生殖道感染等。但多數(shù)患者流產(chǎn)原因不明，稱(chēng)為原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(unexplained recurrent spotaneous abortion,URSA),占總發(fā)生率的40%～60%[2-6]。URSA可能與同種免疫有關(guān)，而血清中趨化因子水平變化又與同種免疫相關(guān)，尤其在應(yīng)用主動(dòng)免疫治療后，趨化因子水平變化明顯。說(shuō)明趨化因子水平變化與URSA有關(guān)。為探討其可能機(jī)制，本研究對(duì)60例接受主動(dòng)免疫治療的URSA患者進(jìn)行研究，測(cè)定主動(dòng)免疫治療前后患者血清中正常T細(xì)胞活化后表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)蛋白(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和白介素-8(interleukin-8,IL-8)水平的變化，試圖為URSA的發(fā)病及治療探討新途徑。

1資料與方法

1.1一般資料URSA組：2012年4月至2013年12月在我院門(mén)診就診的URSA患者60例，年齡22～26歲，平均年齡(26.0±2.2)歲。入組標(biāo)準(zhǔn)：自然流產(chǎn)均≥2次；排除遺產(chǎn)性疾病，染色體檢查正常；生殖系統(tǒng)與解剖結(jié)構(gòu)正常；婦科內(nèi)分泌檢查均無(wú)異常；排除自身免疫性疾??；男方精液正常。60例均接受主動(dòng)免疫治療[1,7]。依據(jù)妊娠結(jié)局分為持續(xù)妊娠組(45例)和非持續(xù)妊娠組(15例)。正常非孕組20例選自同期門(mén)診要求放置宮內(nèi)節(jié)育器的女性，年齡24～37歲，平均年齡(27.0±3.0)歲，既往有妊娠史但無(wú)自然流產(chǎn)、死胎或死產(chǎn)史，無(wú)上述疾病史。正常妊娠組：20例選自同期門(mén)診孕40～49 d要求行人工流產(chǎn)女性，年齡22～34歲，平均年齡(27.0±4.2)歲，既往無(wú)不良孕育史及上述疾病史。

1.2檢測(cè)方法抽取患者肘靜脈血3 ml，置無(wú)菌試管，室溫下待其自然凝固，2 000 r/min離心10 min，分離血清后置-70℃冰箱待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清中RANTES、IL-8、MCP-1水平。檢測(cè)過(guò)程中嚴(yán)格按試劑盒(RB美國(guó))說(shuō)明書(shū)操作且為1次檢測(cè)，以減少批間誤差和操作誤差。

2結(jié)果

2.1URSA組主動(dòng)免疫治療前與正常非孕組、正常妊娠組血清中RANTES、IL-8、MCP-1水平比較URSA組主動(dòng)免疫治療前血清中3種趨化因子水平明顯低于正常非孕組、正常妊娠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或<0.01)，而正常非孕組與正常妊娠組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　免疫治療前3組血清中3種趨化因子水平比較　±s

注：與URSA組比較，*P<0.05，#P<0.01

2.2URSA患者主動(dòng)免疫治療前后血清中RANTES、IL-8、MCP-1水平比較URSA患者主動(dòng)免疫治療后血清中3種趨化因子水平均明顯升高，與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2　URSA患者免疫治療前后血清中3種趨化因子水平比較　±s

2.3持續(xù)妊娠組治療前后血清中3種趨化因子水平比較持續(xù)妊娠組免疫治療后血清中3種趨化因子水平均有明顯上升,以RANTES為著,與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或<0.01)。見(jiàn)表3。

表3　持續(xù)妊娠組免疫治療前后血清中3種趨化因子水平比較　±s

2.4非持續(xù)妊娠組治療前后血清中3種趨化因子水平比較非持續(xù)性妊娠組治療后血清中3種趨化因子有上升趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4　非持續(xù)妊娠組免疫治療前后血清中3種趨化因子水平比較　±s

3討論

對(duì)于生殖免疫來(lái)說(shuō)，妊娠成功是一種半同種移植。妊娠失敗、流產(chǎn)除常見(jiàn)的原因除解剖學(xué)改變、染色體異常、婦科內(nèi)分泌異常外，還與免疫排斥相關(guān)，是一種同種免疫現(xiàn)象，稱(chēng)同種免疫型復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，1次流產(chǎn)后再次流產(chǎn)的發(fā)生率為17%，2次流產(chǎn)后再次流產(chǎn)的發(fā)生率為24%，3次流產(chǎn)后再次流產(chǎn)的發(fā)生率為40%～50%[8]。對(duì)于胚胎染色體檢查正常而找不到明確原因?qū)е铝鳟a(chǎn)的患者來(lái)說(shuō),隨著流產(chǎn)次數(shù)的增加,其發(fā)生的比例也增加。

3.1趨化因子與正常妊娠的關(guān)系正常妊娠時(shí)母體免疫可能傾向輔助T淋巴細(xì)胞Th2型免疫應(yīng)答而偏離Th1型細(xì)胞免疫,即向著Th2型方向傾斜以體液免疫為主。妊娠各期胎盤(pán)的細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞都能分泌Th1型細(xì)胞因子IL-8、IL-10。IL-8通過(guò)與相應(yīng)受體結(jié)合參與胚胎植入的調(diào)控，促進(jìn)宮頸成熟，促使羊水中粒細(xì)胞進(jìn)入絨毛膜和胎盤(pán)，提示參與炎性反應(yīng)。

RANTES與相應(yīng)受體結(jié)合后主要能特異性趨化T細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞，且能殺傷T細(xì)胞活性，還能參與宮頸成熟和分娩發(fā)動(dòng)。有研究發(fā)現(xiàn)，RANTES水平低下時(shí)母體免疫系統(tǒng)將胎兒視為異物進(jìn)而排斥導(dǎo)致流產(chǎn)，提示RANTES具有封閉抗體的效應(yīng)，對(duì)成功妊娠起重要作用[9]。

MCP-1與其受體相結(jié)合，在母體激素分泌調(diào)控下，對(duì)胚胎植入子宮內(nèi)膜的全過(guò)程中起著重要作用[9]。妊娠早期滋養(yǎng)葉細(xì)胞產(chǎn)生少量MCP-1，妊娠中晚期則產(chǎn)生較多MCP-1，參與宮頸成熟與分娩發(fā)動(dòng)機(jī)制。

本研究在免疫治療前檢測(cè)URSA組、正常非孕組、正常妊娠組血清中RANTES、IL-8、MCP-1水平，結(jié)果表明，URSA組中3種趨化因子水平明顯低于其他2組(P<0.05或<0.01)，而正常非孕組與正常妊娠組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明3種趨化因子對(duì)胚胎植入的調(diào)控起著重要作用。

3.2趨化因子與URSA的關(guān)系鑒于上述3種趨化因子在正常妊娠全過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，倘若趨化因子水平發(fā)生改變，將對(duì)胚胎植入產(chǎn)生不利影響而致流產(chǎn)。有研究表明，與對(duì)照組比較，URSA組Th1型細(xì)胞因子水平升高，而Th2型細(xì)胞因子水平降低；URSA患者血清中IL-10水平明顯降低，打破了Th1型與Th2型細(xì)胞因子的平衡關(guān)系，不能抑制Th1型細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而向Th1型細(xì)胞因子方向傾斜，最終導(dǎo)致流產(chǎn)[10,11]。有報(bào)道認(rèn)為RANTES發(fā)揮其封閉抗體效應(yīng)是通過(guò)抑制母體與配體間的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixed Leukocytes reaction,MLR)，若患者對(duì)MLR反應(yīng)過(guò)強(qiáng)[10]，說(shuō)明母體對(duì)同種異基因的胎兒抗原產(chǎn)生強(qiáng)排斥反應(yīng)，提示RANTES水平低下，則封閉抗體缺失或不足易導(dǎo)致流產(chǎn)。

MCP-1對(duì)單核細(xì)胞具較強(qiáng)的趨化能力，雖然其對(duì)自然殺傷細(xì)胞(natural Keller,NK)不具有趨化能力，但當(dāng)不需要穿過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)它對(duì)NK細(xì)胞也表現(xiàn)出趨化能力，激化NK細(xì)胞的殺傷功能。

3.3趨化因子與免疫治療的關(guān)系URSA與免疫因素密切相關(guān)，母體血清中缺乏抑制MLR封閉因子則會(huì)對(duì)攜帶父系抗原的胎兒產(chǎn)生排斥反應(yīng)，導(dǎo)致流產(chǎn)。3種趨化因子中主要是RANTES能夠介導(dǎo)母體耐受。研究表明，URSA組與正常組比較,血清中MLR偏低,且其反應(yīng)水平隨妊娠次數(shù)增加而升高[12]。體外MLR實(shí)驗(yàn)顯示，RANTES能抑制母體對(duì)父系抗原的排斥反應(yīng),說(shuō)明RANTES是通過(guò)免疫抑制來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)胎兒的保護(hù)作用[12]。增加孕酮的水平可使子宮內(nèi)膜中T細(xì)胞表達(dá)RANTES水平也增高,說(shuō)明T細(xì)胞產(chǎn)生RANTES能力的下降,可能與URSA的發(fā)生有關(guān)。

研究證實(shí)，血清中RANTES水平明顯低下的URSA患者在接受配偶的淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療后，MLR反應(yīng)的強(qiáng)度較前顯著下降而RANTES較前顯著升高，且有80%再次妊娠成功率([6])。

本研究結(jié)果顯示，主動(dòng)免疫治療后血清中3種趨化因子水平均上升，尤其是持續(xù)妊娠組顯著上升，表明主動(dòng)免疫治療方法對(duì)URSA患者的持續(xù)妊娠的維持是可行的。非持續(xù)性妊娠組3種趨化因子水平僅有上升趨向，其機(jī)制尚需探討。

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(收稿日期：2015-12-10)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R 714.21

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002-7386(2016)09-1403-03

通訊作者：郝桂敏，050000石家莊市，河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科；

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.09.041

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